病毒全基因組測序,高通量測序技術(shù)的發(fā)展在生物信息學(xué)分析方面,通過新的分析軟件的研發(fā)和原有分析軟件的升級,對測序所得數(shù)據(jù)的分析也變得更加可靠;除此之外,伴隨著BasSpace等服務(wù)的出現(xiàn),進(jìn)行數(shù)據(jù)分析工作所需的設(shè)備成本也在逐步降低。將來,伴隨著高通量測序技術(shù)與數(shù)據(jù)分析技術(shù)的不斷進(jìn)步,測序精度與可靠性的上升,測序與數(shù)據(jù)分析成本的下降,高通量測序技術(shù)會在各個領(lǐng)域得到應(yīng)用。在病原微生物檢測和鑒定應(yīng)用中,高通量測序技術(shù)勢必會成為不可或缺的技術(shù)并發(fā)揮越來越重要的作用。高通量測序?qū)嶒?yàn)足夠靈敏和完善,方能獲得準(zhǔn)確、可信任的結(jié)果。病毒全基因組測序具有的特點(diǎn):獨(dú)有的一定定量技術(shù),實(shí)現(xiàn)病原定量分析。RNA深度測序突變分析公司
病毒基因組測序的五條標(biāo)準(zhǔn)是:測序的完成程度,決定著基因組的下游應(yīng)用,包括設(shè)計診斷產(chǎn)品、反向遺傳系統(tǒng)以及開發(fā)調(diào)整對策等?;蚪M是生物體內(nèi)的遺傳物質(zhì),以DNA或RNA的形式編碼。病毒基因組包括基因和一些非編碼的DNA或RNA序列,含有病毒復(fù)制和傳播所必需的信息。因此,確定這些序列可以獲得寶貴的信息,可以應(yīng)用于各種醫(yī)學(xué)和科研領(lǐng)域。高通量測序技術(shù)飛速發(fā)展,現(xiàn)在幾乎所有的病毒研究方向都涉及了測序,包括分子流行病學(xué)、藥物和疫苗開發(fā)、病毒的監(jiān)控與診斷等等。病毒基因測序原理目前對病毒溯源分型主要檢測手段就是高通量測序技術(shù)。
一直以來,病毒基因組測序都是疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查和宿主-病原關(guān)系研究的重要手段。病毒的全基因組測序以及對應(yīng)的生物信息學(xué)分析方法是研究病毒進(jìn)化、毒力因子變異、疫病爆發(fā)之間的關(guān)系、疫病傳播途徑、不同遺傳變異的分布模式、疫病發(fā)生地理區(qū)域的基礎(chǔ)。與傳統(tǒng)Sanger測序相比,NGS技術(shù)的發(fā)展使得一個小的研究小組可以擁有大量病毒株的全基因組序列,測序成本也在逐步降低。由于NGS產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量非常龐大,其序列拼接難度也隨之增加。而且對于低濃度高復(fù)雜度的樣本,研究者除了PCR外別無他法。而PCR方法往往具有偏好性,丟失的片段將為序列組裝帶來非常高的失敗率。對于完全未知的樣本,無法通過PCR進(jìn)行富集,要鑒定其種類需要調(diào)用各種方法,逐個嘗試,工作量之大,其效率之低,使得一個新的研究方法的出現(xiàn)及其必要。
對病毒的全基因組進(jìn)行測序:對病毒的全基因組進(jìn)行測序主要是通過非特異性擴(kuò)增+克隆結(jié)合sanger測序來完成的。當(dāng)物種有了參考的序列之后,可以通過特異性擴(kuò)增+sanger測序獲得全基因組序列。Sanger測序準(zhǔn)確度高,讀長很長,但與此同時,擴(kuò)增和克隆工作費(fèi)時費(fèi)力,由于流程繁瑣,加上快速變異導(dǎo)致引物無法通用,該方法對于大量基因組的測序工作而言,可操作性不強(qiáng),這對于研究者一直是一個困擾。高通量測序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測序和分析,減少了工作量,增加了成功率。探普生物進(jìn)行了大量有針對性的研發(fā)和測試,開發(fā)了全套的實(shí)驗(yàn)和分析流程用于對病毒的全基因組進(jìn)行測序,該流程自運(yùn)行以來廣受研究者們好評。病毒全基因組測序具有的特點(diǎn):無需培養(yǎng)和特異性擴(kuò)增,對采集臨床樣本直接檢測。
深度測序技術(shù)對經(jīng)濟(jì)市場的影響:未來社會的創(chuàng)新驅(qū)動將由信息技術(shù)向心理社會健康方面轉(zhuǎn)移??梢灶A(yù)見,全球老年化社會到來后的經(jīng)濟(jì)主戰(zhàn)場將是健康行業(yè),而以基因測序預(yù)測健康和臨床準(zhǔn)確分型的市場將會越來越大。深度測序相關(guān)的經(jīng)濟(jì)市場有兩個方面。一是測序儀器和技術(shù)相關(guān)的市場,二是測序應(yīng)用市場的競爭。一個顯見的例子是,近年來深度測序技術(shù)促進(jìn)了對肺病的進(jìn)一步認(rèn)識和分型,更多的位點(diǎn)突變?nèi)鏏LK、ERCC1、MET、PI3K、RRM1等被陸續(xù)發(fā)現(xiàn),多基因檢測肺病致病驅(qū)動基因?qū)︶t(yī)生準(zhǔn)確選擇靶向藥物十分重要。以肺病中常見的EGFR突變型為例,對于敏感性基因突變(19Del+L858R),第1代靶向藥物(如易瑞沙等)可以進(jìn)行良好的調(diào)整和控制;但是對于耐藥性基因突變(T790M),則需要第三代靶向藥物(AZD9291)才有較好的臨床效果。不久的將來,病癥患者將獲得更具個性化的藥物,從而達(dá)到準(zhǔn)確醫(yī)療。高通量測序技術(shù)本身并不是以病毒為目標(biāo)開發(fā)的。病毒基因測序原理
二代測序可以用于對病毒的全基因組進(jìn)行測序有哪些挑戰(zhàn)?RNA深度測序突變分析公司
哪些應(yīng)用場景需要對病毒的全基因組進(jìn)行測序?在探普生物長時間運(yùn)行過程中,我們接觸到的對病毒的全基因組進(jìn)行測序項(xiàng)目有比較豐富的應(yīng)用場景。先,從事基因進(jìn)化/疫苗/藥品/抗體研制方向的研究的研究者一定會用到測序。這種場景一般是用密集的sanger測序監(jiān)測某幾個關(guān)鍵基因,搭載一定頻率的全基因組測序。這樣的組合省時省力省經(jīng)費(fèi),同時能達(dá)到研究目的。此外,有的單位需要對傳染病的病原進(jìn)行流行病學(xué)監(jiān)測和研究,如疾控/疫控中心、醫(yī)院的傳染病科室以及一些高校和研究所的相應(yīng)課題組,可能需要對病毒的全基因組進(jìn)行測序以后,結(jié)合其他上下游的研究數(shù)據(jù),達(dá)到研究或者監(jiān)測疫病的目的。RNA深度測序突變分析公司
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