大規(guī)模蛋白表達定位

相較于原核表達體系，真核體外蛋白表達的he xin優(yōu)勢在于具備部分翻譯后修飾能力，但 關(guān)鍵修飾途徑仍存在明顯局限。在缺乏內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體轉(zhuǎn)運機制的情況下，糖基化修飾通常終止于高甘露糖型（Man?GlcNAc?）階段，無法合成復(fù)雜雙觸角唾液酸化糖鏈。這一缺陷直接影響zhi liao性抗體的抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒性（ADCC）效應(yīng)。同時，裂解物中二硫鍵異構(gòu)酶（PDI）與分子伴侶（如BiP）的活性不足，導(dǎo)致含多對二硫鍵的蛋白錯誤折疊率升高40%-60%。為克服此瓶頸，需在裂解物中外源性添加重組糖基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體（如GnT-I/GnT-II/FUT8）以重構(gòu)修飾途徑，并通過優(yōu)化氧化還原電勢（Eh=-230 mV至-280 mV）改善二硫鍵形成效率。體外蛋白表達的這些修飾缺陷是目前制約其應(yīng)用于功能性糖蛋白生產(chǎn)的主要因素。添加硒代甲硫氨酸的體外蛋白表達實驗??，直接獲得 X 射線晶體學級硒標記蛋白。大規(guī)模蛋白表達定位

凋亡因子（如caspase-3）、細菌du su（如白喉du suA鏈）在細胞內(nèi)表達會引發(fā)宿主死亡。體外蛋白表達系統(tǒng)通過無細胞環(huán)境規(guī)避毒性效應(yīng)：在添加線粒體膜組分的兔網(wǎng)織紅細胞裂解物中，全長BAX蛋白（21kDa）表達量達0.8mg/mL，并成功模擬其介導(dǎo)的細胞色素C釋放過程（CellDeathDiffer.,2024）。該系統(tǒng)還可表達HIV蛋白酶（活性>95%），用于高通量抑制劑篩選，加速抗病毒藥物開發(fā)。真he dan白的糖基化修飾（如抗體Fc段N-糖）是zhi liao性蛋白功能的he xin。傳統(tǒng)體外蛋白表達因缺乏高爾基體，糖基化效率不足5%。突破性方案是在HEK293裂解物中添加重組糖基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體（含GnT-I、GnT-II、FUT8），使曲妥珠單抗的復(fù)雜雙觸角糖型比例升至80%（Science,2022）。結(jié)合UDP-GlcNAc底物連續(xù)補料，糖均一性（G0F:G2F=1:1.2）媲美哺乳細胞表達，為下一代抗體偶聯(lián)藥物（ADC）提供新生產(chǎn)路徑。定制蛋白表達純化大腸桿菌裂解物添加含T7啟動子的線性DNA后，利用其??高密度核糖體??快速啟動蛋白表達。

無細胞蛋白表達技術(shù)（CFPS）的he xin組分包括細胞裂解物（如大腸桿菌、兔網(wǎng)織紅細胞或小麥胚芽提取物），其中含有核糖體、tRNA、氨酰-tRNA合成酶及轉(zhuǎn)錄/翻譯因子（如啟動/延伸/終止因子）。此外，系統(tǒng)需補充能量再生系統(tǒng)（如ATP、磷酸肌酸與肌酸激酶）以維持反應(yīng)持續(xù)進行，以及底物（氨基酸、核苷酸）和輔因子（Mg2?、K?等）以支持蛋白質(zhì)合成。例如，大腸桿菌S30提取物常通過敲除核酸酶和蛋白酶來提升蛋白穩(wěn)定性。英國nuclera高通量微流控蛋白表達篩選系統(tǒng)可支持助力無細胞蛋白表達技術(shù)，如想更多關(guān)于無細胞蛋白表達的產(chǎn)品信息，歡迎咨詢官方代理商上海曼博生物！

體外蛋白表達（InVitroProteinExpression）是指在無完整活細胞的環(huán)境下（如試管、微孔板或芯片），利用生物提取物中的核糖體、tRNA、酶及能量系統(tǒng)，直接將遺傳信息轉(zhuǎn)化為功能蛋白質(zhì)的技術(shù)。與傳統(tǒng)細胞依賴的系統(tǒng)不同，該技術(shù)完全避開了細胞膜屏障和基因復(fù)制過程，只通過添加目標DNA/RNA模板及底物（氨基酸、ATP）即可啟動蛋白表達。這一過程通常可在1-4小時內(nèi)完成，其速度優(yōu)勢大幅加速了蛋白質(zhì)研究進程。無細胞蛋白表達系統(tǒng)的重點在于重構(gòu)翻譯機器，例如提取大腸桿菌裂解物中的核糖體，或利用兔網(wǎng)織紅細胞裂解物中的真核翻譯因子，以實現(xiàn)跨物種的高效蛋白表達。真核型體外蛋白表達系統(tǒng)對??毒性蛋白研究??具有不可替代的價值，如凋亡相關(guān)蛋白caspase-3的可控表達。

英國nuclera公司由劍橋大學的博士生們于2013年創(chuàng)立。在撰寫論文期間，他們發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)難以獲取的問題是生物學領(lǐng)域的首要障礙和關(guān)鍵瓶頸。他們著手解決蛋白質(zhì)難以獲取的問題，以期改善人類健康狀況。這一驅(qū)動力符合公司的愿景，即打造出一個從構(gòu)思到蛋白質(zhì)的原型設(shè)計系統(tǒng)，以減少在藥物發(fā)現(xiàn)計劃中獲得靶蛋白的時間和障礙。nuclera eProtein Discovery系統(tǒng)產(chǎn)品優(yōu)勢：一臺系統(tǒng)，多重優(yōu)勢；一臺系統(tǒng)，多重應(yīng)用：?未知的藥物靶點?難以表達的蛋白質(zhì)?AI/ML蛋白質(zhì)工程?從頭設(shè)計蛋白質(zhì)?可開發(fā)性評估?氨基酸標記；已生產(chǎn)超過1000種蛋白質(zhì)。上海曼博生物是nuclera的官方代理商，歡迎咨詢！科學家用細菌??進行蛋白表達??來生產(chǎn)胰島素。目的蛋白表達陽性

體外蛋白表達需使用??不含質(zhì)粒骨架的模板??以避免副反應(yīng)。大規(guī)模蛋白表達定位

B淋巴細胞抗原CD19是一種跨膜糖蛋白，為B細胞惡性zhong Liu生物標志物、CAR-T等療法理想靶點，包含單個跨膜螺旋（292-313）、天然信號肽（1-20）、胞外N端結(jié)構(gòu)域（ECD）和胞內(nèi)C端結(jié)構(gòu)域（ICD）。其ECD有兩個通過二硫鍵連接的免疫球蛋白樣C2型結(jié)構(gòu)域，ICD有多個無序區(qū)域。生產(chǎn)CD19，尤其是ECD對開發(fā)新的B細胞淋巴瘤Zhi liao方法十分重要。然而，ECD素來有“難表達”的特點，會導(dǎo)致表達滴度低、蛋白質(zhì)錯誤折疊和聚集，阻礙了對細胞表面分子的詳細分子研究。在本應(yīng)用中，我們利用eProteinDiscovery系統(tǒng)的可溶性標簽選擇功能和無細胞混合物，在24小時內(nèi)篩選了192種表達條件，優(yōu)化了可溶性CD19蛋白的生產(chǎn)（如圖1所示）。我們成功表達并純化了全長CD19、ECD和ICD。篩選完成后，在24小時內(nèi)將適合條件進行放大，可生產(chǎn)微克級的蛋白質(zhì)，從而實現(xiàn)了Zhi liao研究所需復(fù)雜蛋白質(zhì)的提效生產(chǎn)。本應(yīng)用為表達其他具有跨膜結(jié)構(gòu)域、二硫鍵和高度無序區(qū)域的“難表達”蛋白質(zhì)提供了參考。大規(guī)模蛋白表達定位