合肥single cell RNA單細胞多組學數(shù)據(jù)分析

來源: 發(fā)布時間:2022-09-10

冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測序在RNA捕獲、文庫構(gòu)建方面,需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上,通過甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進行透化處理,使細胞中的mRNA釋放,并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測序文庫進行上機測序,從而獲取基因表達信息。總體來說,空間轉(zhuǎn)錄組的實驗流程包括:組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫-上機測序,而需要客戶進行樣本準備的步驟相對簡單:組織凍存與OCT包埋。分子檢測型單細胞多組學測序技術(shù)中也有一些集 中于探究單細胞內(nèi)表觀遺傳組各層面的變化及關(guān)聯(lián)。合肥single cell RNA單細胞多組學數(shù)據(jù)分析

烈冰生物已空間轉(zhuǎn)錄組測序服務提供從一個組織切片樣本中獲取包括空間信息在內(nèi)的全部轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),從而可以區(qū)分和定位功能基因在特定組織區(qū)域內(nèi)的活躍表達。其可以檢測組織樣本中的所有基因活動,并繪制活動發(fā)生的位置,這將有助于科學家更好地構(gòu)建生物圖譜,并進一步理解疾病和生物學過程。目前,空間轉(zhuǎn)錄組主要應用于多種疾病、免疫、發(fā)育、神經(jīng)和病理學等研究領(lǐng)域。烈冰生物具有專業(yè)的實驗團隊、豐富的切片經(jīng)驗,配置了國際主流的儀器設備,實驗團隊針對不同組織類型優(yōu)化完善實驗方案,并制定了嚴謹規(guī)范的實驗室SOP流程,保證空間轉(zhuǎn)錄組切片的質(zhì)量,全優(yōu)保障測序數(shù)據(jù)質(zhì)量。成都single cell RNA單細胞多組學數(shù)據(jù)分析可視化單細胞多組學技術(shù)基于單細胞測序技術(shù)和高通量組學方法發(fā)展而來,能在單細胞分辨率下同時整合多種組學信息。

二代測序技術(shù)在測序方法上取得了重大突破,基于“邊合成邊測序”(sequencingbysynthesis)和大規(guī)模平行測序技術(shù)(massiveparallelanalysis,MPS),使測序通量和讀取速度得到極大提升,烈冰生物斥巨資購置的Novaseq6000測序儀的測序原理可以簡化為四步:樣品文庫構(gòu)建、簇生成、測序和數(shù)據(jù)分析。由于讀長限制,樣品DNA或由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段,并在3和5端接上3種序列:1)Index,用于區(qū)分樣品來源;2)Adapter,用于結(jié)合測序通道上的位點;3)Primerbindingsite,用于結(jié)合PCR引物啟動擴增反應。

reads數(shù)、基因表達量及細胞數(shù)量判定過程中:以捕獲5000個細胞、100G的測序量為標準,每個細胞的reads數(shù)大約在50k左右;每個細胞的基因中位數(shù)取決于樣本的細胞類型,例如成熟的B,T,粒細胞數(shù)量較多的組織中,由于該類型細胞表達的基因數(shù)普遍較少,導致基因中位數(shù)下降。而某一疾病組織、或者體外培養(yǎng)的如干細胞等,他們的基因表達數(shù)較高,甚至可以超過1萬,這就導致該類樣本基因中位數(shù)非常高。因此,我們對細胞數(shù)量以及基因中位數(shù)確認時,需要考察實際組織的細胞組成。單細胞多組學可從整體層面快速有效地探尋疾病發(fā)生、發(fā)展的根本原因或藥物作用靶點等信息。

單細胞多組學測序技術(shù)的發(fā)展依賴于各種單一組學檢測技術(shù)的完善,但即使在單細胞測序技術(shù)迅速發(fā)展的情況下,在單細胞水平協(xié)同檢測多個不同的分子層面仍然非常具有挑戰(zhàn)性.每一種組學都有不同的特性和測量方法,這些方法在敏感性、特異性、通量和適用性上都有所不同.因此,在單細胞水平對多種組學方法進行整合和應用時,需要在策略上做出改進,以保證各組學間的上游建庫以及下游生物信息分析均能良好地兼容,同時也要明確技術(shù)的局限性及其對研究結(jié)果的潛在影響。單細胞測序手段有力地解決了組織內(nèi)高度異質(zhì)性對于低豐度信號影響的問題。烈冰科技單細胞多組學技術(shù)支持

烈冰測序數(shù)據(jù)分析平臺,不依賴已有物種信息,可研究非模式物種,針對不同平臺的數(shù)據(jù),制定多套流程。合肥single cell RNA單細胞多組學數(shù)據(jù)分析

多樣本數(shù)據(jù)合并:FractionofReadsKept:合并樣本時,各樣本根據(jù)MappedBarcodedReadsperCell數(shù)量計算出來的數(shù)據(jù)利用率。如果各樣本間該參數(shù)值相差很大,需要進行Downsample處理,以數(shù)據(jù)量少的樣本為基準將不同樣本中細胞測序深度標化到同一水平,從而避免因測序深度差異導致的基因檢測數(shù)量、基因表達水平的差異。烈冰科技自主研發(fā)的單細胞云平臺致力于幫助每一位客戶定制化分析數(shù)據(jù),深入解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果,深入挖掘其背后的生物學意義;從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細胞研究,加速科研進程!合肥single cell RNA單細胞多組學數(shù)據(jù)分析

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