冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測序在RNA捕獲、文庫構(gòu)建方面，需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上，通過甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進行透化處理，使細胞中的mRNA釋放，并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測序文庫進行上機測序，從而獲取基因表達信息?？傮w來說，空間轉(zhuǎn)錄組的實驗流程包括：組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫-上機測序，而需要客戶進行樣本準(zhǔn)備的步驟相對簡單：組織凍存與OCT包埋。單細胞多組學(xué)測序技術(shù)整合了單細胞各個組學(xué)特征, 提供了揭示細胞內(nèi)復(fù)雜分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及其互動關(guān)系的機會。烈冰科技單細胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析可視化
空間轉(zhuǎn)錄組測序與單細胞測序的結(jié)果不同，這里存在一個概念叫做NumberofSpotsundertissue，即，空間轉(zhuǎn)錄組片子上組織覆蓋的有效的spot位點。這個有效Spot的篩選標(biāo)準(zhǔn)是有UMI以及有序列表達。那么這個時候，貼片的質(zhì)量就成為了制約空間轉(zhuǎn)錄組有效區(qū)域的要點了。如果組織沒有很好地覆蓋到空轉(zhuǎn)片上，那么容易出現(xiàn)雖然有HE染色有組織片子，但是沒有基因表達，即無有效Spot位點。同樣的，另一個就是組織切片的大小，也就是說組織切片在整個玻片的覆蓋面積越小，分析的有效區(qū)域就越少。這兩者基本上決定了整個空間轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果的基礎(chǔ)質(zhì)量。scRNA單細胞多組學(xué)技術(shù)支持單細胞測序技術(shù)提供了單個細胞水平下的科學(xué)研究視角。
單細胞測序?qū)嶒炘贅颖炯毎蠙C分選簽，需要對細胞數(shù)量、細胞活性進行準(zhǔn)確判斷，這對SingleCell分選標(biāo)記、建庫、下機數(shù)據(jù)的質(zhì)量都具有著決定性的作用。如若細胞計數(shù)偏高，將會影響建庫的成功率；計數(shù)偏低，則會顯著提高雙細胞的比例；而細胞活率過低，就會使測序數(shù)據(jù)的利用率大打折扣，因此把好單細胞懸液質(zhì)量這一關(guān)尤為重要。而在鋪板過程中，由于不同操作人員手法具有不可避免的差異，不同的液體流速將直接影響單細胞的入孔效果。因此烈冰生物BDRhapsody單細胞分選平臺配套了專門定制的電動移液器，其具有PrimeTreat、CellLoad、BeadLoad、Wash、Lysis、Retrieval多種操作模式，來對應(yīng)各種不同的操作。通過已經(jīng)設(shè)定的程序來控制液體的流速，大幅度降低人為操作習(xí)慣帶來的差異，保證實驗操作的一致性。
單細胞測序是指針對單個細胞進行全轉(zhuǎn)錄組測序分析，可精確地描述每一個細胞的狀態(tài)，在異質(zhì)性發(fā)育過程中具有不可忽視的應(yīng)用價值。然而，單細胞測序無法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細胞空間排布信息，對于揭示發(fā)育過程、病理微環(huán)境都存在很大的局限性?？臻g轉(zhuǎn)錄組測序以點陣形式記錄病理切片細胞的空間信息并進行測序，可以精確指示點陣內(nèi)的全部基因表達情況?？臻g轉(zhuǎn)錄組測序的加入，無疑讓單細胞測序如虎添翼，更精確地勾勒了組織水平的異質(zhì)性。烈冰智造PanoCell單細胞捕獲，媲美國際主流的單細胞平臺。
機體為響應(yīng)各種應(yīng)激，其細胞會從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”；當(dāng)細胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時，往往會經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組，導(dǎo)致一些基因被“沉默”，一些基因被重新“喚醒”，但純化這些瞬態(tài)細胞進行研究是很困難或不可能的；scRNA-seq擬時序分析可以讓我們在不需要純化的情況下查看這些細胞狀態(tài)。擬時序分析，即根據(jù)不同細胞亞群基因表達量隨時間的變化情況，構(gòu)建細胞譜系發(fā)育，但這里的時間并不是真時間，而是一個虛擬的時間，是指的細胞與細胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡。即使在同一個樣本中，也會存在多種不同的細胞形態(tài)。因此，不論測定了多少樣本，我們都可以采用擬時序分析對樣本中的細胞轉(zhuǎn)化和變化進行描述。單細胞多組學(xué) 測序技術(shù)會轉(zhuǎn)向研發(fā)多組學(xué)測序分析和功能驗證同時 進行的方法。深圳BD Rhapsody單細胞多組學(xué)平臺
目前已應(yīng)用的單細胞多組學(xué)聯(lián)合分析包括轉(zhuǎn)錄組和基因組，轉(zhuǎn)錄組和ＤＮＡ甲基化、轉(zhuǎn)錄組和蛋白組。烈冰科技單細胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析可視化
空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)可以用單細胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析策略進行分析，例如，利用GO和Pathway分析篩選不同發(fā)育時期特定空間區(qū)域內(nèi)的信號通路及其關(guān)鍵基因的較大情況，揭示在特定發(fā)育時期特定區(qū)域內(nèi)發(fā)生的生物學(xué)過程。針對任何一個基因，空間轉(zhuǎn)錄組可以顯示表達該基因的點陣及其空間排布；單細胞轉(zhuǎn)錄組可以給出該基因表達的細胞類群；原位測序可以給出該基因在細胞內(nèi)的表達狀況。通過不同發(fā)育時間點的信息比較，可以分析細胞類群在某個部位在不同時間點的差異，給出其在細胞內(nèi)的真實的演變狀況。烈冰科技單細胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析可視化
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