江西Human宿主細(xì)胞殘留DNA檢測常見問題

湖州申科生物宿主細(xì)胞殘留DNA復(fù)雜基質(zhì)樣本前處理試劑盒（磁珠法）用于生物制品復(fù)雜基質(zhì)和普通基質(zhì)下樣品的前處理，其中復(fù)雜基質(zhì)包括過陰離子交換柱的蛋白類樣品、蛋白濃度高且 pH 值非中性的樣品等，可穩(wěn)定高效地獲得樣品中的微量宿主細(xì)胞DNA。試劑盒具有優(yōu)異的基質(zhì)兼容性和操作穩(wěn)定性，可與各個SHENTEK宿主細(xì)胞（CHO、大腸桿菌E.coli、Vero、酵母、NS0、Human、MDCK、Sf9&AcNPV、Hi5&AcNPV、質(zhì)粒、SV40LTA&EIA 等）DNA qPCR 檢測試劑盒配合使用。

SHENTEK^® CV-1 殘留 DNA 檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)用于定量檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中 CV-1 宿主細(xì)胞 DNA 的試劑盒。試劑盒利用熒光探針原理，定量檢測樣品中 CV-1 殘留 DNA。檢測快速，專一性強(qiáng)，性能穩(wěn)定可靠，檢測限可以達(dá)到 fg 水平。試劑盒配套有 CV-1 DNA 定量參考品。本試劑盒與 SHENTEK^®宿主細(xì)胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒配套使用，可準(zhǔn)確定量樣品中 CV-1 殘留 DNA。整個分析系統(tǒng)通過優(yōu)化前處理與檢測步驟的兼容性，提升對CV-1細(xì)胞微量 DNA 殘留的回收率與定量準(zhǔn)確度。

在開展宿主細(xì)胞殘留 DNA（HCD）檢測方法驗(yàn)證前，需從文件要求與樣品處理兩方面考量。文件要求上，應(yīng)通過研究方案、研究計(jì)劃、報告或標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）的形式，預(yù)先詳細(xì)規(guī)定生物分析方法的具體內(nèi)容，為后續(xù)驗(yàn)證筑牢規(guī)范基礎(chǔ) 。樣品處理方面，若檢測時樣品存在抑制情況，可考慮稀釋，但稀釋后檢測值需處于可信范圍；對于復(fù)雜樣品，若稀釋無法消除抑制，要借助樣品前處理方式提取 DNA 后再檢測，以此保障檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，確保 HCD 方法驗(yàn)證順利、有效推進(jìn) 。

湖州申科生物自主研發(fā)生產(chǎn)的系列宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒利用qPCR（Taqman探針）法定量檢測各種宿主細(xì)胞殘留 DNA（rHCD），覆蓋各種工程細(xì)胞和載體，如細(xì)菌、酵母、昆蟲細(xì)胞、動物源細(xì)胞、人源細(xì)胞、基因載體等。檢測快速，專一性強(qiáng)，性能可靠，定量限可以達(dá)到 fg 水平。配套 SHENTEK宿主細(xì)胞殘留DNA樣本前處理試劑盒使用，可在5小時內(nèi)完成樣品前處理和分析檢測。若用戶需要，亦可選購IPC（報告基團(tuán) VIC），配合各宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒使用。

SHENTEK^® MDCK 殘留 DNA 檢測試劑盒用于定量檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中 MDCK 宿主細(xì)胞 DNA 的試劑盒。試劑盒利用熒光探針原理，定量檢測樣品中 MDCK 殘留 DNA。檢測快速，專一性強(qiáng)，性能穩(wěn)定可靠，檢測限可以達(dá)到 fg 水平。試劑盒配套有 MDCK DNA 定量參考品。本試劑盒與SHENTEK^®宿主細(xì)胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒配套使用，整個分析系統(tǒng)通過優(yōu)化前處理與檢測步驟的兼容性，明顯提升對MDCK細(xì)胞微量 DNA 殘留的回收率與定量準(zhǔn)確度。

宿主細(xì)胞殘留DNA非常主要的轉(zhuǎn)化潛能源于其可能攜帶活性的顯性轉(zhuǎn)化基因（例如 myc、經(jīng)過特定修飾的 ras）。這類基因擁有顯性遺傳特性，其表達(dá)產(chǎn)物能夠直接賦予正常細(xì)胞獲得性功能，驅(qū)動細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化并形成不適當(dāng)?shù)纳L特性，導(dǎo)致部分細(xì)胞獲得異常生長特性（這一點(diǎn)已被眾多嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膭游锬Ｐ蛯?shí)驗(yàn)所證實(shí)）。與這種直接的強(qiáng)力作用相比，殘留DNA片段通過插入宿主基因組位點(diǎn)誘發(fā)特定的關(guān)鍵基因（如影響細(xì)胞周期的關(guān)鍵控制點(diǎn)或關(guān)鍵生長調(diào)控基因）失活或過度處于活性狀態(tài)的機(jī)制，發(fā)生的頻率被認(rèn)為相對較低。具體而言，在某個特定的關(guān)鍵位置發(fā)生整合，從而抑制一個關(guān)鍵的生長負(fù)調(diào)控基因或異常活化一個促進(jìn)生長的關(guān)鍵基因，其產(chǎn)生的概率和總體頻率也受到相當(dāng)大的限制。