牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)與細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的主要區(qū)別如下:1.**來(lái)源不同**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I來(lái)源于牛痘病毒,是一種真核生物病毒中的酶。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶則來(lái)源于原核生物,如大腸桿菌的ω蛋白等。2.**功能特性**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I能夠解旋DNA的超螺旋結(jié)構(gòu),并且識(shí)別并切割雙鏈DNA末端[5’C(T)CCTT],與DNA形成共價(jià)連接形成穩(wěn)定復(fù)合物,遇到DNA的5’-OH基團(tuán)后,重新連接形成完整DNA鏈。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶,如大腸桿菌的ω蛋白,主要功能是催化DNA鏈斷開(kāi)和結(jié)合的偶聯(lián)反應(yīng),以改變DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。3.**活性條件**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I即使在Mg2+不存在的條件下也顯示活性。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶可能需要Mg2+等金屬離子作為輔因子來(lái)發(fā)揮活性。4.**作用的DNA鏈**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I能使正負(fù)兩方的超螺旋分子均形成松散型。-原核生物由來(lái)的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I只作用負(fù)鏈的超螺旋分子。5.**共價(jià)鍵形成**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I與DNA形成共價(jià)連接,此酯鍵中所貯存的能量可能在切斷端的再結(jié)合上起著作用。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶在原核生物中是游離型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端與酶形成共價(jià)鍵。
通過(guò)SDS-PAGE、Western blot、質(zhì)譜等方法驗(yàn)證蛋白的純度和分子量。通過(guò)活性測(cè)試評(píng)估蛋白的生物活性。Recombinant Human Follistatin
在分子生物學(xué)研究中,核酸染料是檢測(cè)DNA和RNA的重要工具。然而,傳統(tǒng)的溴化乙錠(EB)染料因其劇毒性和致病,逐漸被更安全的替代品所取代。GoldenView 吖啶橙核酸染料作為一種新型的核酸染料,憑借其性能和安全性,成為科研工作者的理想選擇。GoldenView 吖啶橙核酸染料的成分是吖啶橙,這是一種細(xì)胞滲透性熒光染料,能夠與核酸結(jié)合并發(fā)出熒光信號(hào)。其獨(dú)特的熒光特性使其在檢測(cè)雙鏈DNA(dsDNA)時(shí)呈現(xiàn)綠色熒光(530 nm),而在與單鏈DNA(ssDNA)或RNA結(jié)合時(shí)則發(fā)出紅色熒光(640 nm)。這種雙重?zé)晒馓匦圆粌H提高了檢測(cè)的靈敏度,還為研究人員提供了更豐富的信息。在瓊脂糖凝膠電泳中,GoldenView 吖啶橙核酸染料表現(xiàn)出與EB相當(dāng)?shù)撵`敏度,能夠清晰地檢測(cè)到大片段(>1 kb)的DNA。此外,該染料的使用方法與EB完全相同,無(wú)需改變現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)流程,即可輕松替換傳統(tǒng)染料。安全性是GoldenView 吖啶橙核酸染料的另一大優(yōu)勢(shì)。與EB不同,GoldenView 經(jīng)過(guò)多項(xiàng)致突變性試驗(yàn)驗(yàn)證,結(jié)果均為陰性,表明其對(duì)細(xì)胞和環(huán)境更為安全。這種低毒性特性使其在實(shí)驗(yàn)室中使用更為便捷,同時(shí)降低了對(duì)研究人員健康的潛在風(fēng)險(xiǎn)。Recombinant Human Proinsulin C-Peptide AnaloguePfu DNA Polymerase的熱穩(wěn)定性和保真性使其在優(yōu)化PCR條件時(shí)更為靈活,比如在GC含量較高的模板中。
一、產(chǎn)品特點(diǎn)高純度與穩(wěn)定性dNTPSetSolution中的每種核苷酸(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)濃度均為100mM,純度超過(guò)99%,經(jīng)HPLC驗(yàn)證,無(wú)DNase和RNase污染。這種高純度的dNTP溶液能夠有效減少實(shí)驗(yàn)中的非特異性擴(kuò)增,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。獨(dú)立包裝與靈活使用該套裝將四種dNTP分別獨(dú)立包裝,便于用戶根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求精確調(diào)整每種dNTP的濃度,從而優(yōu)化反應(yīng)條件。這種靈活性對(duì)于復(fù)雜的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)尤為重要,例如多重PCR和高保真PCR。適用性dNTPSetSolution適用于多種分子生物學(xué)應(yīng)用,包括但不限于PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、RT-PCR、cDNA合成和DNA標(biāo)記。其超純的成分和穩(wěn)定的性能使其能夠兼容各種DNA聚合酶,包括高保真酶和熱啟動(dòng)酶。二、性能優(yōu)勢(shì)高效擴(kuò)增在PCR反應(yīng)中,dNTP的純度和濃度直接影響擴(kuò)增效率。dNTPSetSolution能夠支持長(zhǎng)達(dá)20kb的DNA片段擴(kuò)增,表現(xiàn)出色的擴(kuò)增能力和穩(wěn)定性。此外,其高純度特性可以減少非特異性產(chǎn)物的生成,提高實(shí)驗(yàn)的特異性和靈敏度。
T7EndonucleaseI(T7EI)在CRISPR/Cas9基因編輯中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在突變體檢測(cè)和基因編輯效率評(píng)估上。以下是T7EI在CRISPR/Cas9中的具體應(yīng)用步驟和特點(diǎn):1.**基因編輯效率評(píng)估**:-T7EI用于評(píng)估CRISPR-Cas9在給定的導(dǎo)向RNA靶位點(diǎn)上對(duì)細(xì)胞群體進(jìn)行基因編輯的效率。-通過(guò)PCR擴(kuò)增圍繞CRISPR導(dǎo)向RNA靶位點(diǎn)的基因組DNA,如果CRISPR-Cas9介導(dǎo)的非同源末端連接(NHEJ)修復(fù)事件引入了突變,變性和退火將形成突變型和野生型PCR擴(kuò)增子的異源雙鏈DNA。2.**突變體檢測(cè)**:-如果CRISPR/Cas9編輯成功在DNA上引入突變,則可與野生型DNA片段退火產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。T7EI可以識(shí)別該DNA上的不完全配對(duì)的DNA位點(diǎn)然后進(jìn)行雙鏈切割,通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳即可顯示酶切后的條帶,從而半定量判定基因編輯效果。-T7EI能識(shí)別長(zhǎng)度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導(dǎo)致的錯(cuò)配DNA,不能識(shí)別1bp的插入、缺失或突變。3.**實(shí)驗(yàn)步驟**:-收集細(xì)胞并提取基因組DNA,然后使用PCR擴(kuò)增期望編輯的基因組區(qū)域。擴(kuò)增子的長(zhǎng)度建議為0.5-1kb。-對(duì)擴(kuò)增的DNA進(jìn)行變性和退火復(fù)性,以產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。-使用T7EI酶處理退火后的DNA產(chǎn)物,在37℃孵育15分鐘。
T7EndonucleaseI(T7EI)是一種特殊的DNA內(nèi)切酶,具有以下特點(diǎn):1.**識(shí)別錯(cuò)配DNA**:T7EI能夠識(shí)別并切割不完全配對(duì)的DNA、十字型結(jié)構(gòu)DNA、Holliday結(jié)構(gòu)或交叉DNA以及異源雙鏈DNA。2.**切割位點(diǎn)**:T7EI切割錯(cuò)配位點(diǎn)5'端的、第二或第三個(gè)磷酸二酯鍵。3.**靈敏度**:T7EI對(duì)錯(cuò)配DNA的識(shí)別非常靈敏,能夠檢測(cè)并切割單堿基和多堿基的錯(cuò)配。4.**應(yīng)用**:T7EI常用于CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)導(dǎo)致的基因突變的鑒定。它通過(guò)識(shí)別錯(cuò)配DNA來(lái)幫助鑒定基因編輯是否成功以及是否有非目標(biāo)效應(yīng)。5.**直接電泳檢測(cè)**:T7EI的產(chǎn)物可以直接通過(guò)電泳進(jìn)行檢測(cè),這使得它在實(shí)驗(yàn)操作中更為方便。6.**來(lái)源**:T7EI來(lái)源于大腸桿菌菌株,是一種麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)和T7核酸內(nèi)切酶I(T7EI)的融合蛋白。7.**成本效益**:盡管T7EI在商業(yè)上使用時(shí)成本較高,但它在大規(guī)模樣本測(cè)試中,尤其是在基因突變鑒定方面,提供了一種有效的篩選方法。8.**特殊注意事項(xiàng)**:T7EI能夠識(shí)別長(zhǎng)度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導(dǎo)致的錯(cuò)配DNA,但不能識(shí)別1bp的插入、缺失或突變。這些特點(diǎn)使得T7EndonucleaseI成為基因突變鑒定中一個(gè)非常有用的工具,尤其是在CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)的應(yīng)用中。Ultra-Long DNA Polymerase是一種專為擴(kuò)增超長(zhǎng)DNA片段設(shè)計(jì)的聚合酶能夠擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)數(shù)十kb上百kb的DNA片段。Recombinant Mouse PLD4 Protein,His Tag
Phusion Master Mix的成分為Phusion DNA聚合酶,這是一種通過(guò)融合技術(shù)開(kāi)發(fā)的高保真酶,具有極低的錯(cuò)誤率。Recombinant Human Follistatin
高靈敏度與特異性該試劑盒采用優(yōu)化的緩沖體系和新一代TaqDNA聚合酶,結(jié)合高效的逆轉(zhuǎn)錄酶,能夠在低濃度RNA樣本中實(shí)現(xiàn)高靈敏度的檢測(cè)。其特異性高,即使在復(fù)雜的樣本中,也能通過(guò)熔解曲線分析呈現(xiàn)單一峰,避免非特異性擴(kuò)增。防污染設(shè)計(jì)OneStepRT-qPCRSYBRGreenKit(UDGPlus)內(nèi)置dUTP/UDG防污染系統(tǒng),能夠有效降解含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,防止實(shí)驗(yàn)室氣溶膠污染對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。這一特性在病毒檢測(cè)和低豐度基因表達(dá)分析中尤為重要。操作簡(jiǎn)便該試劑盒將逆轉(zhuǎn)錄和qPCR反應(yīng)整合在同一管中完成,避免了多次開(kāi)蓋操作,減少了人為誤差和污染風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí),預(yù)混液的設(shè)計(jì)使得實(shí)驗(yàn)操作更加便捷,用戶只需加入引物和模板即可進(jìn)行反應(yīng)。示蹤染料輔助試劑盒中的反應(yīng)緩沖液含有惰性示蹤染料,通過(guò)顏色變化(如藍(lán)色與黃色混合后變?yōu)榫G色)直觀判斷樣本是否加入,提高了實(shí)驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性和可靠性。兼容性該試劑盒適用于多種qPCR儀器,并提供不同濃度的ROX校正染料,以滿足不同儀器的需求。Recombinant Human Follistatin