定量實時聚合酶鏈反應(qPCR)廣用于特異性核酸的第三方檢測,RNA轉錄物豐度的測量和高通量實驗結果的驗證。qPCR通常在標準的96孔板上進行,現在實驗室里的qPCR就像移液器和燒杯那樣常見。在引物設計和功能分析方面,NCBI里的數據已經很多了。但這些數據只是理論上的,在具體實驗操作中還要經過各種復雜的計算和實驗。在以前的qPCR中,為了使測定正常進行,通常需要進行大量耗時的反復試驗。而現在,這些步驟都可以通過數據預實驗來完成。更方便的是,已經有人把qPCR實驗中所用到的各種工具都整合到了一個工具箱里。比如,Biosearch這個網站里,就有一個成套的qPCR工具箱OligoToolbox,其中包含的工具能做很多實驗計算工作。瑞普信提供專業(yè)QPCR第三方基礎實驗檢測。甘肅人ELISA第三方檢測中心
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磷酸化蛋白的WB第三方檢測在實操過程中有哪些注意事項?研究完某一蛋白的磷酸化情況后比較好也要研究一下該蛋白總的表達量。如壓完 phospho-p38 抗體后,我會把相同的 membrane 做 strip 后再壓 p38, 然后再 strip 一次,再壓內標 actin 。做磷酸化蛋白 WB 時,除了目標蛋白的 band 以外,往往會出現非特異性的 band. 磷酸化抗體不好的話,甚至會壓出非特異性的 band, 而沒有你想要的 band, 所以壓片以后,一定要根據 markers 比對一下,壓出的 band 分子量是否正確。 磷酸化蛋白 WB 時 backgroud 也往往較深,所以壓片時間要適當,不能太長或過短,太長則 backgroud 太深蓋住想要的那條 band, 時間過短則可能沒有 band 或者 band 太淺。磷酸化蛋白 WB 時,要用TBST,不能用PBST。用 TBST 洗時也要注意一下,搖床的轉速不要太快,洗的時間不要太長,孵育一抗和二抗之后分別洗 5min 3 次即可,寧愿 background 深一些,總比做不出來強得多 . 另外,洗的時候,比較好不要把幾張 membrane 疊在一起洗。
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