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每層鋪好后先趕走氣泡再鋪另一層。在轉(zhuǎn)移緩沖液中制備三明治可避免氣泡的產(chǎn)生。④接上正負(fù)極,按膜向正極的方向?qū)⑥D(zhuǎn)移盒放入電轉(zhuǎn)儀中,加入轉(zhuǎn)膜緩沖液。⑤將電轉(zhuǎn)儀置于冰水中,100V恒壓轉(zhuǎn)膜1h。⑥轉(zhuǎn)膜結(jié)束后,快速取出PVDF膜,放入5BSA室溫封閉2h。⑦取出膜,于搖床上用TBST洗膜5min3次。⑧孵育袋中加入TBST稀釋的一抗(1500)4℃孵育過夜。⑨TBST洗膜5min3次,辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗小鼠二抗(13000),室溫孵育1h。⑩TBST洗膜10min3次。膜于化學(xué)發(fā)光檢測試劑反應(yīng)至暗處出現(xiàn)亮條帶,取出膜,甩去多余的液體,用保鮮膜包好PVDF膜,暗室中用X膠片感光、顯影、定影。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果蛋白DH。時間就是金錢,效率就是生命唯有惜時才能成功,唯有努力方可成就。成都免疫組化第三方檢測機(jī)構(gòu)
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