山東發(fā)展酵母文庫

文章中酵母文庫實驗由歐易生物完成。2021 年 3 月，揚州大學(xué)陳忱教授為通訊作者，在 The Plant Journal 雜志（IF: 6.141）在線發(fā)表了題為“The rice LEC1-like transcription factor OsNF-YB9 interacts with SPK, an endosperm specific sucrose synthase protein kinase, and functions in seed development”的研究論文，報道了 OsNF-YB9 在調(diào)控水稻種子發(fā)育中的作用機制。NF-Y轉(zhuǎn)錄因子家族成員LEC1在擬南芥胚胎發(fā)生和種子發(fā)育中發(fā)揮了重要作用。水稻中的OsNF-YB9和OsNF-YB7是擬南芥LEC1的同源基因。這些LEC1同源基因在水稻中的作用尚未經(jīng)報道。酵母雙雜交技術(shù)服務(wù)酵母雙雜交文庫構(gòu)建。山東發(fā)展酵母文庫

酵母雙雜交、pulldown和BiFC實驗均顯示，MdTRB1可以通過其C末端與JAZ1蛋白互作。在蘋果葉片和愈傷組織中過表達MdJAZ1，花青素和原花青素的累積受到明顯抑制。在蘋果葉片和愈傷組織***表達MdJAZ1/MdJAZ1，結(jié)果顯示過表達MdJAZ1抑制了MdTRB1對花青素和原花青素累積的促進作用。Pull down 實驗和熒光素酶互補成像實驗結(jié)果表明，在 MdJAZ1 存在下，MdTRB1 與 MdMYB9 的結(jié)合減弱（圖 a-c）；外源施加 JA 可以部分恢復(fù) MdTRB1 與 MdMYB9 的結(jié)合。對于 MdTRB1 在 JA 介導(dǎo)的花青素和原花青素積累中的作用機制，本研究建立了一個新的模型：MdTRB1 通過與 MdMYB9 互作，增強了 MdMYB9 對下游基因的轉(zhuǎn)錄***活性，進而正向調(diào)節(jié)了 JA 介導(dǎo)的花青素和原花青素累積。在 JA 缺乏的條件下，MdJAZ1 與 MdTRB1 互作，干擾了 MdTRB1 與 MdMYB9 之間的結(jié)合；在 JA 存在的條件下，MdJAZ1 被降解，MdTRB1 被釋放出來以參與后續(xù)過程。江西運用酵母文庫報價眾所周知，酵母雜交技術(shù)存在一定的假陽性。

酵母文庫實驗：本研究發(fā)現(xiàn)了一個硝酸鹽響應(yīng)的 BTB/TAZ 蛋白 MdBT2，它參與調(diào)節(jié)硝酸鹽介導(dǎo)的蘋果植株生長。利用酵母雙雜交、蛋白質(zhì) pull-down、BiFC 實驗證實，MdBT2 可以與一個 DELLA 蛋白 MdRGL3a 互作，這種互作是 MdRGL3a 蛋白經(jīng)由 26S 蛋白酶體途徑的泛素化及降解所必需的。此外，異源表達 MdBT2 部分回復(fù)了 MdRGL3a 過表達所導(dǎo)致的擬南芥生長抑制。綜上表明，MdBT2 可以通過降低 DELLA 蛋白 MdRGL3a 的豐度促進硝酸鹽介導(dǎo)的植物生長。實驗室培養(yǎng)顯示，培養(yǎng) 45 天，蘋果幼苗的高度和生物量隨硝酸鹽濃度的增加而增加（圖 A-C）。

酵母雙雜交技術(shù)，自創(chuàng)建以來被廣泛應(yīng)用于蛋白互作研究領(lǐng)域，在生命科學(xué)的基礎(chǔ)探秘研究中起著重要作用。然而該技術(shù)設(shè)計初衷，*是斯坦利先生為了完成申請學(xué)校經(jīng)費的目的。該技術(shù)設(shè)計巧妙，它的許多優(yōu)點在設(shè)計之初并未顯現(xiàn)，反而在這么多年的高頻使用和進一步開發(fā)利用過程中越發(fā)明顯。（引用自MarcVidal&StanleyFields的“Theyeasttwo-hybridassay：stillfindingconnectionsafter25years”）:(1）盡管酵母雜交技術(shù)揭示了蛋白質(zhì)結(jié)合位點的詳細信息，但操作簡單。只需2個質(zhì)粒+1個菌株即可完成，且有不同體系方便選擇。（2）該技術(shù)利用比較好的DNA結(jié)合位點，有效的***結(jié)構(gòu)域和友好的報告基因系統(tǒng)，可以放大弱互作的信號。（3）該技術(shù)可用于各種物種的蛋白互作檢測，具有物種普適性，尤其是人類蛋白。（4）衍生技術(shù)具有更***的應(yīng)用，可擴展到檢測蛋白質(zhì)與DNA、蛋白質(zhì)與RNA、蛋白質(zhì)與小分子以及其他組合之間的相互作用，甚至可實現(xiàn)將生理相互作用與表型數(shù)據(jù)直接關(guān)聯(lián)。當然，做過酵母雜交實驗的小伙伴應(yīng)該都了解，互作結(jié)果的判斷，往往要等酵母生長好幾天才能看出來（當然，小歐認為這在偉大的科研事業(yè)過程中算不上啥），互作強弱也是主觀判斷性較強，存在假陽性。合作文章上百篇，平均影響因子高達7.124 歐易生物酵母文庫。

酵母文庫研究：棉花是世界上天然纖維的主要來源。近年來，氣候變化給植物帶來的干旱、高鹽等滲透脅迫，使棉花產(chǎn)量穩(wěn)步下降。為適應(yīng)變化莫測的氣候，植物不斷進化出復(fù)雜而有組織的應(yīng)對非生物脅迫的反應(yīng)機制，其中數(shù)千個抗性相關(guān)基因間的相互作用，在提高植物的抗旱性和耐鹽性中發(fā)揮著重要作用。功能基因組學(xué)研究表明，植物胚胎發(fā)育晚期豐富蛋白（LEA）就是這樣一種基因，它在植物發(fā)育過程中，面對多種環(huán)境脅迫時均有表達，對提高植物的抗旱性和耐鹽性具有重要作用。2022年3月，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所在國際期刊上發(fā)表了BiologicalMacromolecules上發(fā)表了題為“LateembryogenesisabundantgeneLEA3（Gh_A08G0694）enhancesdroughtandsaltstresstoleranceincotton”的研究論文，該研究發(fā)現(xiàn)LEA3能夠增強棉花的抗旱性和耐鹽性。該項目中所用的棉花酵母文庫由歐易生物構(gòu)建。關(guān)于酵母雜交文庫構(gòu)建及篩選你需要知道這些。山西宣傳酵母文庫報價

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目前，歐易生物負責(zé)該水稻轉(zhuǎn)錄因子文庫的維護和保存工作，并對廣大水稻科研工作者提供轉(zhuǎn)錄因子篩選服務(wù)。如去年歐易生物助力中國科學(xué)院分子植物科學(xué)***創(chuàng)新中心的王二濤老師應(yīng)用該文庫對水稻-叢枝菌根進行了深入研究，成功構(gòu)建了水稻-叢枝菌轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果發(fā)表于《Cell》封面。截至文章發(fā)表，該文庫已收錄了1683個水稻轉(zhuǎn)錄因子，隸屬于54個家族，覆蓋預(yù)測的水稻轉(zhuǎn)錄因子總量的70%。文庫中水稻轉(zhuǎn)錄因子的a基因信息來源于PlantTFDB和KOME數(shù)據(jù)庫。文庫載體使用pGADT7，酵母菌株使用Y187，每一個轉(zhuǎn)錄因子菌株**保存于96孔板中。山東發(fā)展酵母文庫

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