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簡單制作培養(yǎng)基,需要完成以下幾個主要步驟:需要選擇培養(yǎng)基配方,同一種培養(yǎng)基,其表達(dá)方式往往存在著差異。所以,除了應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)方法的規(guī)定編制之外,我們一般應(yīng)盡可能收集有關(guān)數(shù)據(jù),加以比較和核對,然后根據(jù)自己的目的選擇和記錄數(shù)據(jù)來源。需記錄培養(yǎng)基的制備,培養(yǎng)基的制備記錄包括培養(yǎng)基的名稱、配方及其來源、pH值、滅菌溫度、時間、配制日期、制備人等,并且要復(fù)印記錄和保存原始記錄備查。對副本的記錄應(yīng)該和培養(yǎng)基一起保存,以防出現(xiàn)混亂。需稱重培養(yǎng)基的成分,培養(yǎng)基成分要準(zhǔn)確稱量,并注意防止混淆。每一種成分稱量完畢后,都要在分裝的一面打上記號,然后將分裝的藥物一起放在左邊。每一個成分稱量完之后,都會向右移動。全部稱量完畢,應(yīng)再次檢查。培養(yǎng)基制備器負(fù)載的壓力,有效地避免了培養(yǎng)基過溫失效和培養(yǎng)基中氣泡的產(chǎn)生。上海大容量 培養(yǎng)基制備器
⑴倒置的小管充滿培養(yǎng)基,不留氣泡。⑵在關(guān)閉殺菌鍋的排氣閥之前,將鍋內(nèi)的氣體排空。⑶試管塞不要塞得太緊。使用硅膠塞時,請勿使用橡膠塞。⑷不可過早打開殺菌鍋,等殺菌鍋內(nèi)的氣壓和溫度降到與室溫相同或相差不大時再打開殺菌鍋。如果按照以上方法操作還有氣泡,可以用水作為培養(yǎng)基組的對照試驗。如果培養(yǎng)基組有氣泡,對照組沒有氣泡,可以確定培養(yǎng)基本身原因。為有效體現(xiàn)培養(yǎng)基其生物學(xué)特性,其制備生長及繁殖需要特定的PH范圍。海南全自動培養(yǎng)基制備器理想設(shè)備應(yīng)在20~30分鐘內(nèi)將培養(yǎng)基從121°C冷卻至50°C以下(視體積而定)。
制備培養(yǎng)基的操作要點:a.液體培養(yǎng)基所配制的培養(yǎng)基是液態(tài)的,其中的成分基本上溶于水,沒有明顯的固形物,液體培養(yǎng)基營養(yǎng)成分分布均勻,易于控制微生物的生長代謝狀態(tài)。b.固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入適量的凝固劑即成固體培養(yǎng)基。常用作凝固劑的物質(zhì)有瓊脂、明膠、硅膠等,以瓊脂為常用。固體培養(yǎng)基在實際中用得十分普遍。在實驗室中,它被用作微生物的分離、鑒定、檢驗雜菌、計數(shù)、保藏、生物測定等。c.半固體培養(yǎng)基如果把少量的凝固劑加入到液體培養(yǎng)基中,就制成了半固體培養(yǎng)基。以瓊脂為例,它的用量在0.2~1%之間。這種培養(yǎng)基有時可用來觀察微生物的動力,有時用來保藏菌種。
牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基(又稱營養(yǎng)肉湯,用于培養(yǎng)細(xì)菌):成分:牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g,蒸餾水(或去離子水)1000mL,pH7.4士0.2。制法:將各成分溶解于水中,于20~25℃條件下以1mol/LNaOH溶液用pH計校正pH7.4,分裝三角瓶(裝量以三角瓶容積的1/2~2/3為宜),或試管(分裝量以試管高度的1/4左右為宜),0.1MPa滅菌15~20min后備用?;瘜W(xué)分類:天然培養(yǎng)基指一類利用動、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基等。組合培養(yǎng)基又稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基,是一類按微生物的營養(yǎng)要求精確設(shè)計后用多種高純化學(xué)試劑配制成的培養(yǎng)基。如葡萄糖銨鹽培養(yǎng)基、淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基等。半組合培養(yǎng)基指一類主要以化學(xué)試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。例如,馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。培養(yǎng)基制備器鋁制表面光滑平坦;易于清潔,無孔隙和裂縫,以防培養(yǎng)基流進(jìn)去。
制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基:(1)方法步驟:計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(2)倒平板操作的步驟:①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上,右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶,將瓶口迅速通過火焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~20mL)倒入培養(yǎng)皿,左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固,大約需5~10min。然后,將平板倒過來放置,使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50℃左右時,才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度?提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時,就可以進(jìn)行倒平板了。在選購培養(yǎng)基制備器時,快速加熱和冷卻能力是重要考量因素,直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量、實驗效率及操作便利性。海南全自動培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備器必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁或明顯標(biāo)簽.上海大容量 培養(yǎng)基制備器
濕熱滅菌:濕熱滅菌在高壓鍋或培養(yǎng)基制備器中進(jìn)行,高壓滅菌一般采用121℃±3℃滅菌15min,具體培養(yǎng)基按食品微生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基體積不應(yīng)超過1000mL,否則滅菌時可能會造成過度加熱。所有的操作應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)或使用說明的規(guī)定進(jìn)行。滅菌效果的控制是關(guān)鍵問題。加熱后采用適當(dāng)?shù)姆绞嚼鋮s,以防加熱過度。這對于大容量和敏感培養(yǎng)基十分重要,例如含有煌綠的培養(yǎng)基。過濾除菌:過濾除菌可在真空或加壓的條件下進(jìn)行。使用孔徑為0.2μm的無菌設(shè)備和濾膜。消毒過濾設(shè)備的各個部分或使用預(yù)先消毒的設(shè)備。一些濾膜上附著有蛋白質(zhì)或其他物質(zhì)(如物品),為了達(dá)到有效過濾,應(yīng)事先將濾膜用無菌水潤濕。上海大容量 培養(yǎng)基制備器