嘉興育種脫靶檢測實驗室

堿基編輯器：CBE：胞嘧啶堿基編輯器(Cytosine base editor，CBE)，依賴于胞嘧啶核苷脫氨基酶，通過將胞嘧啶核苷脫氨轉(zhuǎn)換為尿嘧啶核苷，尿嘧啶核苷在DNA復(fù)制和修復(fù)過程中會轉(zhuǎn)換為胸腺嘧啶核苷，從而實現(xiàn)C到T的轉(zhuǎn)換。已開發(fā)出四代CBE（BE1、BE2、BE3和BE4），由于BE3引起的脫靶效應(yīng)相對較少，因此它已在動物（小鼠）、細(xì)菌和植物細(xì)胞中廣用于編輯細(xì)胞的基因組成。腺嘌呤堿基編輯器(Adenine base editor，ABE)，依賴于腺嘌呤核苷脫氨基酶，通過將腺嘌呤核苷脫氨轉(zhuǎn)換為次黃苷，然后在DNA復(fù)制和修復(fù)過程中會轉(zhuǎn)換為鳥嘌呤核苷，從而實現(xiàn)腺嘌呤(A)到鳥嘌呤(G)的轉(zhuǎn)換。新開發(fā)的堿基編輯器ABE8e，比ABE7.10增加了590倍的靶向活性。根據(jù)選擇的sgRNA，通過生物信息學(xué)方法，對sgRNA進(jìn)行脫靶分析。嘉興育種脫靶檢測實驗室

誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來源的細(xì)胞產(chǎn)品。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（inducedpluripotentstemcell，iPS）自身具有致瘤性風(fēng)險，在體內(nèi)可形成畸胎瘤，整合病毒載體的使用和誘導(dǎo)多能性可能增加iPS細(xì)胞插入致突變性和致性的風(fēng)險。因此，應(yīng)在shou次臨床試驗前完成致瘤性試驗。若設(shè)計科學(xué)合理，能夠滿足評價要求，也可在持續(xù)時間足夠長的毒性研究中評估致瘤性風(fēng)險。體內(nèi)致瘤性試驗建議采用摻入未分化iPS細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)品作為陽性對照，以確認(rèn)實驗系統(tǒng)的靈敏度。如果iPS細(xì)胞設(shè)計了機制以降低致瘤風(fēng)險，應(yīng)在體內(nèi)試驗中確認(rèn)/驗證此類機制的功能 江蘇脫靶檢測企業(yè)基因編輯脫靶檢測，推薦唯可生物，實驗實力強，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。

CIRCLE-Seq，將gDNA打斷并環(huán)化，環(huán)化的DNA與CRISPR/RNP孵育，NGS測序檢測線性化的DNapian段，確定脫靶位點。PCR富集后測序，成本相對較低，能檢測低頻脫靶突變。安必奇sgRNA脫靶效應(yīng)評估，安必奇生物提供sgRNA脫靶效應(yīng)評估服務(wù)，幫助您挑選高度特異，脫靶率低的sgRNA進(jìn)行后續(xù)實驗。同時，我們也協(xié)助您檢測分析基因編輯后細(xì)胞樣品的脫靶情況，通過各種高通量測序檢測技術(shù)，我們能準(zhǔn)確的分析全基因組范圍內(nèi)的脫靶位點，推動CRISPR/Cas9技術(shù)在zhiliao藥物開發(fā)和臨床研究中的應(yīng)用。我們的優(yōu)勢：靈敏度高：能檢測低頻脫靶突變★準(zhǔn)確性高：檢測結(jié)果可通過實驗驗證★多種檢測方法可選擇以滿足不同的實驗需求

長期隨訪觀察的考慮要素:遲發(fā)性不良反應(yīng)相關(guān)的潛在風(fēng)險因素.在評估基因zhiliao產(chǎn)品的風(fēng)險因素時，申請人應(yīng)考慮基因zhiliao產(chǎn)品的特性，同時參考該產(chǎn)品的非臨床和臨床數(shù)據(jù)以及類似產(chǎn)品的已知數(shù)據(jù)?；騴hiliao產(chǎn)品的非臨床研究旨在為臨床研究提供支持性信息和關(guān)鍵安全性特征參數(shù)，如機體中的生物分布和持久性、整合/修飾宿主基因組、潛伏再jihuo以及潛在免疫原性等。對于新型基因zhiliao產(chǎn)品，可參考數(shù)據(jù)有限，申請人應(yīng)盡可能在非臨床研究中獲得用于評估遲發(fā)性不良反應(yīng)風(fēng)險的數(shù)據(jù)。脫靶檢測guide-sequence，推薦唯可生物，實驗實力強，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。

但是由于CHIP-seq實驗本身的難度較高，DISCOVER-seq這類方法的接受度并不高。3. 其他特殊方法CRISPR技術(shù)經(jīng)過這么多年的發(fā)展，其應(yīng)用已經(jīng)不局限于造成DNA雙鏈斷裂，一些不要切割DNA雙鏈的CRISPR衍生技術(shù)（如堿基編輯、先導(dǎo)編輯和CRISPRi/a），可以在不引發(fā)隨機突變的情況下，對基因組進(jìn)行精細(xì)編輯或者調(diào)控。這些技術(shù)所使用nCas9或dCas9只結(jié)合或者切割雙鏈中的一條鏈，之前的脫靶檢測方法都不能直接適用。這些CRISPR衍生技術(shù)中，CRISPR產(chǎn)生的脫靶可以被細(xì)分為兩個部分，其一是Cas9/sgRNA結(jié)合DNA導(dǎo)致的脫靶，這部分信息使用同樣序列的sgRNA進(jìn)行野生型Cas9脫靶位點檢測能夠間接得到定量脫靶檢測，推薦唯可生物，實驗實力強，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。off-target脫靶檢測

選擇潛在的脫靶位點，例如選擇gRNA預(yù)測網(wǎng)站上Top 5潛在脫靶位點，進(jìn)行Sanger測序單克??；嘉興育種脫靶檢測實驗室

不論在科研還是臨床中，CRISPR技術(shù)的使用都帶來了非常高的回報，也同時伴隨著各種風(fēng)險，這其中脫靶現(xiàn)象就研究者們較為擔(dān)心的一類風(fēng)險。本文中我們盤點了多種主流的CRISPR脫靶位點檢測方法，但沒有一種方法是適用于所有CRISPR技術(shù)的脫靶檢測，一個項目中只使用一種脫靶檢測方法也是不足夠的。如何在實驗中，特別是臨床試驗中多方面評估CRISPR的脫靶風(fēng)險，需要將多種脫靶檢測方法有效組合。同時，每一條sgRNA都不可避免地存在脫靶位點，如何評估這種風(fēng)險，如何降低這種風(fēng)險，具體的解決方案我們用臨床實例來為大家介紹。嘉興育種脫靶檢測實驗室