武漢插入位點整合位點政策

2020年9月發(fā)布的《細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品申請臨床試驗藥學(xué)研究和申報資料的考慮要點》“生產(chǎn)工藝開發(fā)的技術(shù)要求”及“質(zhì)量研究和質(zhì)量控制中的安全性研究”部分要求提供目的基因在染色體中的整合情況及提供細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化（成瘤性和致瘤性）進(jìn)行安全性研究和評估內(nèi)容。2020年2月發(fā)布的《免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中規(guī)定：探索性臨床試驗的安全性和耐受性要考慮"外源基因隨機整合到細(xì)胞基因組形成插入突變，導(dǎo)致成瘤性和惡性轉(zhuǎn)化等"。整合位點方法，推薦唯可生物，實驗實力強，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。武漢插入位點整合位點政策

全基因組測序是對重組細(xì)胞的基因組DNA進(jìn)行深度測序，技術(shù)成熟簡單這里不做介紹了，我們分享一下LM-PCR結(jié)合二代測序的檢測方法。LM-PCR全稱連接介導(dǎo)的PCR。將含有慢病毒插入的基因組進(jìn)行隨機打斷并連接接頭，然后通過兩輪PCR富集含有慢病毒LTR-宿主區(qū)域的嵌合序列。此擴增產(chǎn)物進(jìn)行二代測序即可以分析確定載體在宿主基因組上的整合位點。LM-PCR與高通量測序技術(shù)相結(jié)合后，有了更為豐富的應(yīng)用場景。比如，識別整合載體（慢病毒載體，轉(zhuǎn)座子）的整合位點。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于基因zhiliao研究基因修飾細(xì)胞的克隆組成，或者通過研究整合事件評估新載體系統(tǒng)的生物安全性。北京慢病毒整合位點實驗室整合位點服務(wù)，推薦唯可生物，實驗實力強，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。

病毒載體介導(dǎo)的外源基因隨機插入的可能風(fēng)險之一是其可能整合到宿主細(xì)胞的原基因或抑基因內(nèi)引發(fā)插入性誘變（insertionalmutagenesis），導(dǎo)致基因的jihuo或抑基因的抑制，從而誘導(dǎo)的發(fā)生。這些潛在的副作用已經(jīng)引起人們的極大關(guān)注，因此亟需發(fā)展普適的整合位點檢測手段來評估以病毒為載體的基因zhiliao的安全性。病毒載體整合位點檢測能夠特異性捕獲整合位點序列，經(jīng)過文庫構(gòu)建、二代測序及生物信息學(xué)分析，即可得出病毒載體在細(xì)胞中的整合位點。

應(yīng)注意以下幾點：在接受基因zhiliao產(chǎn)品的較初5年內(nèi)，兩次檢測間的采樣間隔建議不超過6個月。此后每年至少檢測一次，直至檢測數(shù)據(jù)表明不再存在任何安全性風(fēng)險。檢測方法的敏感度、特異性和可重復(fù)性應(yīng)經(jīng)過驗證，并設(shè)計適當(dāng)?shù)年栃院完幮詫φ?；?dāng)體內(nèi)靶細(xì)胞或替代細(xì)胞中載體序列陽性的比例超出預(yù)期范圍時，應(yīng)開展克隆性生長的評估。如果存在優(yōu)勢克隆或單克隆生長，應(yīng)在不超過3個月的時間內(nèi)再次檢測確認(rèn)，并盡快開展整合位點的分析。當(dāng)載體的整合位點確定后，應(yīng)與人類基因組數(shù)據(jù)庫及基因組的其他數(shù)據(jù)庫等進(jìn)行比較，確定整合位點的基因功能，評估是否與包括zheng在內(nèi)的任何疾病有關(guān)。ISA整合位點，推薦唯可生物，實驗實力強，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。

確證性臨床試驗。與其它藥物一樣，免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品的確證性研究（或關(guān)鍵研究）的目的是確認(rèn)探索性研究中初步提示的療效和安全性，為注冊提供關(guān)鍵的獲益/風(fēng)險評估證據(jù)。確證性研究的目標(biāo)人群、主要和次要終點的選擇、研究持續(xù)時間、樣本量估計和統(tǒng)計學(xué)設(shè)計等應(yīng)符合具體zhiliao領(lǐng)域的一般指南要求。對照和設(shè)盲，良好的隨機對照試驗（randomizedcontrolledtrial,RCT）是確證性研究中優(yōu)先推薦的設(shè)計方法，該研究方法可以消除受試者的基線差異、減少偏倚，有利于客觀評價試驗產(chǎn)品的zhiliao效果。對于某些適應(yīng)癥，可能缺少合適的對照藥物，或倫理上不宜采用安慰劑作為對照藥，可考慮與比較好支持性護(hù)理或zhiliao進(jìn)行對照。LV整合位點，推薦唯可生物，實驗實力強，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。武漢基因編輯整合位點安評

基因整合位點高通量測序分析的新方法。武漢插入位點整合位點政策

長期隨訪的觀察時間長期隨訪的持續(xù)時間應(yīng)確保足以觀察到受試者因產(chǎn)品特性、暴露情況（生物分布和給藥途徑）等導(dǎo)致的風(fēng)險，應(yīng)不短于遲發(fā)性不良反應(yīng)的預(yù)期發(fā)生時間。一般而言，針對不同類型的基因zhiliao產(chǎn)品建議如下：?具有基因組整合活性的載體（例如γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體）和轉(zhuǎn)座子元件建議觀察不短于15年。?可以產(chǎn)生持續(xù)ganran、或有潛伏再jihuo風(fēng)險的細(xì)菌或病毒載體（如單純皰疹病毒）建議觀察15年或至數(shù)據(jù)表明不再存在任何風(fēng)險（ganran或再jihuo）。武漢插入位點整合位點政策