當(dāng)細(xì)胞被裂解后,這些蛋白質(zhì)復(fù)合物在一定條件下仍能保持相對穩(wěn)定。我們向裂解液中加入針對某個(gè)已知蛋白(通常稱為誘餌蛋白)的特異性抗體,抗體與誘餌蛋白特異性結(jié)合形成抗原 - 抗體復(fù)合物。借助 Protein A/G 磁珠或瓊脂糖珠這類固相載體,其表面的 Protein A 或 Protein G 能夠與抗體的 Fc 段緊密相連,通過離心或磁力分離,將抗原 - 抗體復(fù)合物連同與之相互作用的其他蛋白質(zhì)(獵物蛋白)一同從裂解液中沉淀出來,從而實(shí)現(xiàn)對蛋白質(zhì)復(fù)合物的富集和分析,揭示蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究,幫助科學(xué)家揭示蛋白質(zhì)功能與相互作用。南京ChIP免疫沉淀磁珠多少錢
Co-IP技術(shù)在疾病研究中同樣發(fā)揮著重要作用。通過研究疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的相互作用網(wǎng)絡(luò),科學(xué)家們能夠揭示出疾病發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制,為疾病的診斷和提供新的思路和方法。例如,在研究中,Co-IP可用于鑒定相關(guān)基因的表達(dá)產(chǎn)物及其相互作用伙伴,從而揭示發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵途徑和靶點(diǎn)。近年來,隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,Co-IP技術(shù)也取得了許多新進(jìn)展。例如,通過優(yōu)化抗體和沉淀?xiàng)l件,提高了Co-IP的靈敏度和特異性;通過引入新的檢測手段如高通量測序和單細(xì)胞測序技術(shù),實(shí)現(xiàn)了對蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的更加深入和的研究。這些新進(jìn)展不僅推動了Co-IP技術(shù)在生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用和發(fā)展,也為揭示生命活動的奧秘提供了更加有力的工具。北京免疫沉淀磁珠貨期免疫沉淀的關(guān)鍵在于選擇合適的抗體,確保其與目標(biāo)蛋白的高親和力和特異性。
在生命科學(xué)研究的微觀世界里,探索生物分子之間的相互作用關(guān)系猶如在錯(cuò)綜復(fù)雜的迷宮中尋找線索。免疫沉淀技術(shù),作為一種強(qiáng)大的研究手段,如同為科研人員點(diǎn)亮了一盞明燈,幫助他們深入剖析生物分子的奧秘。免疫沉淀的原理基于抗原與抗體之間高度特異性的結(jié)合反應(yīng)??贵w是免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的一種特殊蛋白質(zhì),它能夠精細(xì)識別并緊密結(jié)合特定的抗原分子。在實(shí)驗(yàn)操作中,首先將針對目標(biāo)抗原的特異性抗體與細(xì)胞裂解液或其他生物樣品混合。細(xì)胞裂解液中包含了眾多的生物分子,其中目標(biāo)抗原會與抗體發(fā)生特異性結(jié)合,形成抗原-抗體復(fù)合物。隨后,向混合體系中加入能夠與抗體結(jié)合的固相載體,例如ProteinA或ProteinG偶聯(lián)的瓊脂糖珠或磁珠。
免疫沉淀技術(shù)的發(fā)展經(jīng)歷了多個(gè)重要階段。初,免疫沉淀技術(shù)是作為親和柱色譜的一種改進(jìn)方法而被開發(fā)出來的,當(dāng)時(shí)在微量離心管中使用少量的瓊脂糖樹脂來完成相關(guān)操作。隨著科研需求的不斷增加和技術(shù)的逐步進(jìn)步,磁性微粒(磁珠)開始逐漸取代瓊脂糖,成為免疫沉淀的優(yōu)先支持物。磁珠具有更高的擴(kuò)散速率,使得孵育時(shí)間縮短,同時(shí)在純度和可重復(fù)性方面也有了提升。自 20 世紀(jì) 70 年代單克隆抗體技術(shù)取得重大發(fā)展后,免疫沉淀技術(shù)迎來了新的飛躍。單克隆抗體的出現(xiàn)提升了抗原 - 抗體結(jié)合的特異性和靈敏度,使得免疫沉淀在蛋白質(zhì)相互作用等研究領(lǐng)域能夠發(fā)揮更為重要的作用。之后,根據(jù)不同的檢測目的,免疫沉淀技術(shù)又進(jìn)一步衍生出了免疫共沉淀(Co - IP)、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)和 RNA 免疫共沉淀(RIP)等多種新型技術(shù),這些衍生技術(shù)不斷拓展著免疫沉淀技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用范圍,從單純的蛋白質(zhì)分離鑒定,逐漸深入到蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)與 DNA、蛋白質(zhì)與 RNA 等多種生物分子相互作用的研究領(lǐng)域,為生命科學(xué)研究提供了更為強(qiáng)大的工具。蛋白質(zhì)組學(xué)研究中,免疫沉淀可有效分離出與目標(biāo)蛋白相互作用的其他蛋白,助力機(jī)制探索。
隨后,借助偶聯(lián)了特定抗體結(jié)合蛋白(如 Protein A 或 Protein G)的固相載體,通過離心或磁分離等手段,就能將復(fù)合物從復(fù)雜的細(xì)胞裂解物中高效分離出來。與其他蛋白質(zhì)分離技術(shù)相比,免疫沉淀技術(shù)具有獨(dú)特優(yōu)勢。例如,相較于傳統(tǒng)的親和層析,免疫沉淀對低豐度蛋白的捕獲能力更強(qiáng),能在復(fù)雜背景下精細(xì)富集目標(biāo)蛋白。同時(shí),它能更好地保留蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)及相互作用關(guān)系,這對于研究蛋白質(zhì)復(fù)合物的組成與功能至關(guān)重要。在藥物研發(fā)領(lǐng)域,免疫沉淀技術(shù)發(fā)揮著關(guān)鍵作用。通過研究藥物靶點(diǎn)蛋白與其他蛋白的相互作用,科學(xué)家可以深入了解藥物的作用機(jī)制。植物學(xué)研究用免疫沉淀探究植物蛋白功能,助力培育更優(yōu)農(nóng)作物品種,保障糧食安全。南京ChIP免疫沉淀磁珠多少錢
免疫沉淀廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué),幫助解析蛋白質(zhì)功能、相互作用及修飾機(jī)制。南京ChIP免疫沉淀磁珠多少錢
其具體實(shí)驗(yàn)流程通常包括以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟。首先是細(xì)胞或組織裂解,將樣本置于合適的裂解液中,通過物理或化學(xué)方法破碎細(xì)胞,釋放出細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)等生物分子。接著,向裂解液中加入特異性抗體,在適宜的條件下孵育,讓抗體與目標(biāo)蛋白充分結(jié)合形成復(fù)合物。之后加入 Protein A/G 珠子,再次孵育,使復(fù)合物與珠子結(jié)合。通過離心或磁力分離,將結(jié)合有目標(biāo)蛋白的珠子從溶液中分離出來,經(jīng)過多次洗滌去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)。,使用洗脫液將目標(biāo)蛋白從珠子上洗脫下來,得到純化的目標(biāo)蛋白,可用于后續(xù)的分析檢測。南京ChIP免疫沉淀磁珠多少錢