支原體是細(xì)胞外生存的 小微生物，是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，大小一般在0.2~0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲形、分枝狀等多種態(tài)。
1、支原體存在于我們周圍，他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中
2、可透過一般的濾膜，所以不要寄希望于過濾可以清楚支原體污染的液體
支原體對培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率高，據(jù)估計平均發(fā)生率在60%左右。同時又非常隱秘，早期不容易被發(fā)現(xiàn)，除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測試劑盒。支原體因為個頭小，能穿過0.22微米濾器，并且在實驗室內(nèi)會潛在的擴(kuò)散。支原體污染使得用被污染的細(xì)胞樣本做的實驗完全失去意義和價值。
支原體去除的原理是什么？蘇州細(xì)胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨
預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)過程中的支原體污染至關(guān)重要，因為一旦發(fā)生污染，可能會嚴(yán)重影響實驗結(jié)果和細(xì)胞的生長。以下是一些有效的預(yù)防措施：
1. 無菌操作：始終在無菌條件下進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)操作，包括使用無菌的移液器、手套和其他實驗室器材。
2. 個人防護(hù)：穿戴適當(dāng)?shù)膫€人防護(hù)裝備，如實驗服、手套和口罩，以減少污染的風(fēng)險。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)室的清潔：保持實驗室和細(xì)胞培養(yǎng)室的清潔，定期進(jìn)行消毒處理。
4. 培養(yǎng)箱的維護(hù)：定期清潔和消毒CO2培養(yǎng)箱，避免飛濺和溢出，并維持嚴(yán)格的清潔計劃。
5. 使用無支原體污染的試劑：使用經(jīng)過檢測確認(rèn)無支原體污染的培養(yǎng)基、血清和其他添加物。
6. 細(xì)胞的檢測：定期對細(xì)胞進(jìn)行支原體污染的檢測，尤其是在引入新的細(xì)胞系或傳代細(xì)胞之前。
7. 培養(yǎng)基和試劑的過濾：使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾所有細(xì)胞培養(yǎng)用液體，以阻止支原體的通過。
8. 使用抗*素預(yù)防：雖然抗*素不能作為常規(guī)預(yù)防手段，但在某些情況下，可以考慮使用抗*素作為預(yù)防措施，尤其是在高風(fēng)險操作中。
杭州細(xì)胞支原體檢測方法LAMP法支原體去除試劑會影響細(xì)胞的生長狀態(tài)嘛？
支原體去除試劑使用后，對支原體的檢測可能會有影響。一些支原體去除試劑通過特異性地與支原體膜結(jié)合、改變支原體膜的通透性來殺死支原體，而對真核細(xì)胞幾乎沒有影響。然而，某些情況下，去除試劑可能會對細(xì)胞的活力和形態(tài)產(chǎn)生一定的影響，尤其是在去除劑作用期間。此外，如果去除劑的效果不徹底，可能會導(dǎo)致細(xì)胞再次被支原體污染。
需要注意的是，某些支原體去除試劑可能會在去除支原體的過程中導(dǎo)致支原體膜溶解，從而釋放出支原體的DNA，這可能會在隨后的支原體核酸檢測中引起假陽性結(jié)果。因此，在去除支原體后，建議在繼續(xù)正常傳代培養(yǎng)幾代細(xì)胞后再進(jìn)行支原體檢測，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
|
方法
|
靈敏度
|
優(yōu)勢
|
劣勢
|
|
培養(yǎng)法
|
☆☆☆
|
ü 便捷
ü 便宜
ü 金標(biāo)準(zhǔn)
|
ü 費勞力
ü 耗時長
ü 需要特定的培養(yǎng)基
ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基
|
|
DNA染色
(DAPI or Hoescht)
|
☆
|
ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
|
ü 可能難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 可能假陽性可能性
|
|
間接染色
|
☆☆☆
|
ü 迅速
ü 便宜
ü 易檢測
|
ü 費時
ü 需要細(xì)胞系指示
|
|
ELISA
|
☆☆
|
ü 迅速
ü 客觀，易判讀結(jié)果
ü 可以鑒別支原體種屬
|
ü 受抗體限制
ü 價格高
|
|
免疫染色
|
☆☆
|
ü 迅速
ü 可檢測支原體種屬
ü 價格略高
|
ü 可檢測的支原體種屬有限
|
|
放射自顯影
|
☆☆
|
ü 迅速
|
ü 難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 費勞力
|
|
生物發(fā)光
|
☆☆
|
ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
|
ü 難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
|
|
PCR
|
☆☆☆
|
ü 便宜
ü 迅速
ü 具有特異性
|
ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
|
|
Real-Time PCR
|
☆☆☆
|
ü 便捷
ü 迅速
ü 具有特異性
ü 結(jié)果可靠
ü 高通量
|
ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
|
|
LAMP
|
☆☆
|
ü 便捷
ü 無需DNA提取
ü *需10min左右的實驗操作時間
ü 具有特異性
ü 高通量
|
ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
支原體的檢測方法有哪些？
|
細(xì)胞被支原體污染后可能會出現(xiàn)以下幾種情況：
1. 生長速度變慢：支原體污染的細(xì)胞生長速度可能會減慢，甚至停止生長。
2. 形態(tài)改變：部分細(xì)胞可能會變圓，從培養(yǎng)瓶壁脫落。有些細(xì)胞在支原體污染后，形態(tài)變化可能不明顯，但有些細(xì)胞可能會出現(xiàn)體積增大、細(xì)胞碎片增多等現(xiàn)象。
3. 培養(yǎng)液pH變化：支原體污染的細(xì)胞可能導(dǎo)致培養(yǎng)液pH值變化明顯，更換培養(yǎng)液后幾小時內(nèi)變酸（顏色變黃）。
4. 細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積：在某些情況下，細(xì)胞與細(xì)胞間隙可能出現(xiàn)膜狀沉積，影響細(xì)胞的正常生長和傳代。
5. 細(xì)胞功能受損：支原體污染可能會影響細(xì)胞的代謝和功能，如影響細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、RNA的合成。
6. 染色體畸變：支原體污染可能會導(dǎo)致細(xì)胞染色體斷裂、數(shù)目減少，出現(xiàn)雙著絲點染色體、環(huán)狀染色體等異常。
7. 免疫細(xì)胞產(chǎn)量受影響：對于巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞的培養(yǎng)，支原體污染可能會抑制干擾素的合成和降低其活性。
8. 細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的污染：污染的細(xì)胞可能成為實驗室的污染源，影響工作區(qū)域、培養(yǎng)箱和液氮罐等。
9. 實驗結(jié)果的不確定性：使用被支原體污染的細(xì)胞進(jìn)行實驗可能會得到不準(zhǔn)確的結(jié)果，影響科研的可靠性。
支原體污染和黑膠蟲污染有什么區(qū)別？杭州細(xì)胞培養(yǎng)支原體去除現(xiàn)貨
細(xì)胞庫支原體檢測的必要性？蘇州細(xì)胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨
巢式PCR法和一步法恒溫支原體檢測試劑盒各有優(yōu)缺點，具體哪個更好要根據(jù)實驗需求和條件來決定。
1. 巢式PCR法通過兩輪PCR擴(kuò)增來提高檢測的特異性和靈敏度。它的優(yōu)點是：
2. 特異性強(qiáng)，可以減少假陽性結(jié)果。
3. 靈敏度高，可以檢測到很低數(shù)量的支原體。
4. 通過設(shè)計多對引物，可以覆蓋多種支原體種類。
不過巢式PCR法也存在一些缺點：
1. 操作復(fù)雜，需要兩輪PCR反應(yīng)。
2. 容易受到PCR抑制物的影響，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。
3. 反應(yīng)后需要開蓋電泳檢測，增加了污染的風(fēng)險。
而一步法恒溫支原體檢測試劑盒采用等溫擴(kuò)增技術(shù)，具有以下優(yōu)點：
1. 操作簡便，只需一次反應(yīng)即可完成檢測。
2. 靈敏度和特異性也很高，可檢出10個拷貝以上的支原體污染。
3. 反應(yīng)后無需開蓋，減少了污染的風(fēng)險。
但一步法試劑盒的缺點是：
1. 靈敏度雖高，但可能略低于巢式PCR法。
2. 價格可能比巢式PCR試劑盒要高。
蘇州細(xì)胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨
上海世途科生物(CYTOCH)是一家生命科學(xué)上游工具類企業(yè)。聚焦于細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)的化學(xué)技術(shù)及相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)與生產(chǎn)，產(chǎn)品覆蓋細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品如胎牛血清，支原體檢測，支原體去除試劑等，細(xì)胞轉(zhuǎn)染產(chǎn)品如轉(zhuǎn)染試劑，及細(xì)胞檢測產(chǎn)品如增殖凋亡檢測，報告基因等多個科研場景，給終端客戶提供良好的產(chǎn)品以及服務(wù)。
CYTOCH世途科生物正穩(wěn)步前行，致力于將自己打造成為全球客戶信賴的中國生命科學(xué)工具品牌，助力全球科研工作者在生命科學(xué)的探索之旅中不斷取得突破。