在基因工程中，質(zhì)粒的拷貝數(shù)應(yīng)該怎么理解?為什么構(gòu)建載體時(shí)要選擇高拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體?把細(xì)胞當(dāng)做工廠，質(zhì)粒就是廠房里的流水線，拷貝數(shù)就流水線的數(shù)量在理想狀態(tài)下，選擇盡量多的流水線，這樣能得到的產(chǎn)品多，這是很自然的選擇實(shí)際上，高拷貝也有它的問(wèn)題，當(dāng)流水線多到一定程度，決定產(chǎn)量就不只是流水線的多寡，工人的工作效率，也就是轉(zhuǎn)錄翻譯水平，也會(huì)影響到較終的產(chǎn)量此外，過(guò)多的流水線帶來(lái)放不下的情況，工廠沒(méi)那么大地方，原材料供應(yīng)不上，吃不消，也會(huì)影響到工廠正常運(yùn)轉(zhuǎn)所以，拷貝數(shù)只是一個(gè)方面，構(gòu)建載體要綜合考慮各方面及實(shí)際用途。有時(shí)低拷貝質(zhì)粒滲漏表達(dá)，反而有奇效。腺相關(guān)病毒的基因組為單鏈 DNA,外源 DNA 拷貝數(shù)...

為促進(jìn)及早發(fā)現(xiàn)此類風(fēng)險(xiǎn)并提供有效地風(fēng)險(xiǎn)控制措施，本指導(dǎo)原則在借鑒ICHE2E藥物警戒計(jì)劃、《藥物警戒質(zhì)量管理規(guī)范》和國(guó)內(nèi)外風(fēng)險(xiǎn)管理計(jì)劃相關(guān)指導(dǎo)原則的基礎(chǔ)上，列舉了CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)，以及常規(guī)和本類產(chǎn)品特異的額外藥物警戒活動(dòng)和風(fēng)險(xiǎn)較小化措施。CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別應(yīng)盡早開始，并在整個(gè)研發(fā)過(guò)程中持續(xù)進(jìn)行，以在可能的情況下預(yù)防、較小化風(fēng)險(xiǎn)。隨著對(duì)風(fēng)險(xiǎn)認(rèn)知的變化，應(yīng)及時(shí)更新風(fēng)險(xiǎn)管理計(jì)劃。本指導(dǎo)原則包括CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品申報(bào)上市臨床風(fēng)險(xiǎn)管理計(jì)劃的結(jié)構(gòu)和內(nèi)容，重點(diǎn)就撰寫CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理計(jì)劃時(shí)的特殊考慮進(jìn)行描述，CA...

Southern blot 是一種常用的 DNA 定量的分子生物學(xué)方法。其原理是將待測(cè)的 DNA 樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與探針有同源序列的固相 DNA 的位置上顯示出雜交信號(hào)，通過(guò)檢測(cè)信號(hào)的有無(wú)、強(qiáng)弱可以對(duì)樣品定性、定量，從而計(jì)算出轉(zhuǎn)入的拷貝數(shù)。 Southern 法準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)，但存在費(fèi)時(shí)費(fèi)力的缺點(diǎn)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR，其定量的基本原理是在PCR反應(yīng)體系中加入非特異性的熒光染料（如：SYBRGREENI）或特異性的熒光探針（如：Taqman探針）。嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒每個(gè)細(xì)胞中拷貝數(shù)有限,大約 1 ～幾個(gè);松馳型質(zhì)粒拷貝數(shù)較多,可達(dá)幾百。南通VC...

如果iPS細(xì)胞設(shè)計(jì)了機(jī)制以降低致瘤風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)在體內(nèi)試驗(yàn)中確認(rèn)/驗(yàn)證此類機(jī)制的功能重編程可能會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)改變，其后果尚不完全清楚。為評(píng)估iPS細(xì)胞衍生細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)改變所引起的潛在異常特征，應(yīng)采用體外和/或體內(nèi)非臨床研究來(lái)闡明細(xì)胞具有適當(dāng)?shù)男袨楹蜕砉δ?，毒理學(xué)試驗(yàn)還應(yīng)評(píng)估細(xì)胞異常行為引起的不良反應(yīng)。應(yīng)結(jié)合質(zhì)量表征數(shù)據(jù)、非臨床安全性數(shù)據(jù)以及文獻(xiàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行深入的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，并就旨在保護(hù)患者安全的風(fēng)險(xiǎn)減輕措施進(jìn)行討論。如果發(fā)現(xiàn)遺傳學(xué)和/或表觀遺傳學(xué)改變，應(yīng)解決相應(yīng)的安全性問(wèn)題。細(xì)胞療法載體拷貝數(shù)檢測(cè)服務(wù)，歡迎咨詢，為您報(bào)價(jià)！寧波基因療法載體拷貝數(shù)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)粒的不相容性通俗來(lái)說(shuō)，就是一山不能容二虎...

拷貝數(shù)，是指某基因（可以是質(zhì)粒）在某一生物的基因組中的個(gè)數(shù)。單拷貝就是該基因在該生物基因組中只有一個(gè)，多拷貝則指有多個(gè)。在細(xì)菌細(xì)胞中，根據(jù)復(fù)制特性，質(zhì)粒分嚴(yán)緊型和松弛型兩類，前者在細(xì)胞中只含1?2個(gè)，而后者含10?15個(gè)以上。恒定的拷貝數(shù)與質(zhì)粒復(fù)制控制系統(tǒng)、宿主細(xì)胞遺傳背景及生長(zhǎng)條件有關(guān)。拷貝數(shù)變異(Copynumbervariation,CNV)是由基因組發(fā)生重排而導(dǎo)致的,一般指長(zhǎng)度為1kb以上的基因組大片段的拷貝數(shù)增加或者減少,主要表現(xiàn)為亞顯微水平的缺失和重復(fù)。慢病毒ganran靶細(xì)胞的ganran效率可以通過(guò)qPCR檢測(cè)靶細(xì)胞中的慢病毒載體拷貝數(shù)來(lái)測(cè)算。浙江 LV載體拷貝數(shù)服務(wù)CAR-T...

CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)根據(jù)產(chǎn)品從生產(chǎn)、運(yùn)輸、處理、給藥、隨訪等流程的時(shí)間順序，將關(guān)于CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)列舉如下。所列舉的風(fēng)險(xiǎn)并非全部，在撰寫CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理計(jì)劃時(shí)，應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品特性、作用靶點(diǎn)、作用機(jī)制、非臨床研究和臨床試驗(yàn)中暴露的安全性信息等。與產(chǎn)品的質(zhì)量特征、儲(chǔ)存和分配相關(guān)的對(duì)患者造成的風(fēng)險(xiǎn)。疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)：考慮T細(xì)胞的來(lái)源（自體或異體），可能存在與傳染病有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)（如病毒）。載體拷貝數(shù)分析，可咨詢上海唯可生物。寧波 LV載體拷貝數(shù)服務(wù)使用核酸載體進(jìn)行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)或修飾時(shí)，應(yīng)持續(xù)關(guān)注細(xì)胞產(chǎn)品中載體系統(tǒng)的殘留情況...

安全性說(shuō)明包括藥物重要的已確認(rèn)風(fēng)險(xiǎn)，重要的潛在風(fēng)險(xiǎn)和重要的缺失信息。CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品安全性風(fēng)險(xiǎn)較高，應(yīng)在產(chǎn)品整個(gè)研發(fā)過(guò)程中持續(xù)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別，以預(yù)防和降低風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品特點(diǎn)、作用靶點(diǎn)和作用機(jī)制，其安全性風(fēng)險(xiǎn)可能包括：T細(xì)胞jihuo引起的細(xì)胞因子釋放綜合征、免疫效應(yīng)細(xì)胞相關(guān)神經(jīng)毒性綜合征等；腫瘤細(xì)胞被快速殺傷引起的liu溶解綜合征；遺傳物質(zhì)整合到宿主基因組中、患者長(zhǎng)期處于免疫抑制狀態(tài)誘發(fā)（惡性）liu形成；誘導(dǎo)自身免疫或免疫原性反應(yīng)；出現(xiàn)移植物抗宿主病或原有移植物抗宿主病加重；由于用藥錯(cuò)誤/用藥不當(dāng)而造成傷害等。此外，接受CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)...

在細(xì)菌細(xì)胞中，某種特定基因的數(shù)目。一般檢測(cè)方法有若是測(cè)序結(jié)果，可選用censor軟件檢測(cè)相關(guān)拷貝數(shù)。Southernblot是一種常用的DNA定量的分子生物學(xué)方法。其原理是將待測(cè)的DNA樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號(hào)，通過(guò)檢測(cè)信號(hào)的有無(wú)、強(qiáng)弱可以對(duì)樣品定性、定量，從而計(jì)算出轉(zhuǎn)入的拷貝數(shù)。Southern法準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)，但存在費(fèi)時(shí)費(fèi)力的缺點(diǎn)。另外，由于 Southern 法檢測(cè)不經(jīng)過(guò)靶片段的擴(kuò)增（ PCR ），一般每個(gè)電泳通道需要 10-30 μ g 的 DNA ，在實(shí)際操作中就需要較大量的植物材料...

使用核酸載體進(jìn)行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)或修飾時(shí)，應(yīng)持續(xù)關(guān)注細(xì)胞產(chǎn)品中載體系統(tǒng)的殘留情況，分析外源在基因組中的插入位置、拷貝數(shù)等，監(jiān)控基因編輯用酶的細(xì)胞內(nèi)持續(xù)表達(dá)時(shí)間等，并在受試者給藥后進(jìn)行長(zhǎng)期安全性監(jiān)測(cè)。當(dāng)基因zhiliao產(chǎn)品在生殖qiguan持續(xù)存在時(shí)，需要進(jìn)一步研究確定其在生殖細(xì)胞（例如卵母細(xì)胞、精子）的暴露水平。根據(jù)載體類型、復(fù)制能力、基因組整合特性、劑量水平、給藥途徑等因素，分析評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品生殖系整合風(fēng)險(xiǎn)。基因zhiliao產(chǎn)品將遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞內(nèi)或整合到宿主基因組中或?qū)λ拗骰蚪M進(jìn)行編輯，存在潛在的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。目前對(duì)于判斷細(xì)胞基因組插入/修飾是否會(huì)產(chǎn)生遺傳毒性、是否較終會(huì)發(fā)...

質(zhì)粒的不相容性通俗來(lái)說(shuō)，就是一山不能容二虎。但是作為科學(xué)來(lái)說(shuō)，我們需要一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)亩x?！袄猛粡?fù)制系統(tǒng)的兩個(gè)質(zhì)粒會(huì)在復(fù)制和隨后向自細(xì)胞的分配過(guò)程中彼此競(jìng)爭(zhēng)，這樣的質(zhì)粒在細(xì)菌培養(yǎng)物中不能和平共處，這種現(xiàn)象稱之為不相容性”。那要怎么才能在一個(gè)菌里面使用兩個(gè)質(zhì)粒呢？簡(jiǎn)單的方法就是使用不同復(fù)制源的且?guī)в胁煌剐曰虻膬蓚€(gè)質(zhì)粒。pUCori：復(fù)制起始點(diǎn)，pUC為高拷貝表達(dá)質(zhì)粒（120-200個(gè)/細(xì)胞）。Amp：氨芐抗性，為原核抗性，用于質(zhì)粒抽提時(shí)的篩選。U6promoter：U6啟動(dòng)子，真核啟動(dòng)子，啟動(dòng)shRNA的表達(dá)。CMV：真核啟動(dòng)子，啟動(dòng)ZsGreen1的表達(dá)。ZsGreen1：第三代綠色熒光蛋...

穿梭質(zhì)粒：是指一類人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)和篩選，因而可以在兩種不同類群宿主中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。此概念不僅用于不同的微生物菌群之間，也可以推廣到真核生物表達(dá)載體的構(gòu)建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體pMT2和用于植物細(xì)胞的Ti質(zhì)粒。這些穿梭質(zhì)粒不僅可以在大腸桿菌中復(fù)制擴(kuò)增，也可以在相應(yīng)的枯草、酵母、動(dòng)物或植物細(xì)胞中擴(kuò)增和表達(dá)。這樣利于對(duì)質(zhì)粒的分子生物學(xué)操作和大量制備。質(zhì)粒的不相容性：通俗來(lái)說(shuō)，就是一山不能容二虎。但是作為科學(xué)來(lái)說(shuō)，我們需要一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)亩x?！袄猛粡?fù)制系統(tǒng)的兩個(gè)質(zhì)粒會(huì)在復(fù)制和隨后向自細(xì)胞的分配過(guò)程中彼此競(jìng)爭(zhēng)，這樣的質(zhì)粒在細(xì)菌培養(yǎng)物中不能和平...

關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長(zhǎng)期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao產(chǎn)品的基因組整合風(fēng)險(xiǎn)，建議申辦方分析基因zhiliao載體在靶細(xì)胞或相關(guān)替代細(xì)胞的基因組中整合的影響如在優(yōu)勢(shì)克隆、克隆性生長(zhǎng)是否導(dǎo)致惡性。依據(jù)載體在靶細(xì)胞基因組中整合能力的不同，可分為非整合型、定點(diǎn)整合型、弱整合型、隨機(jī)整合型等不同類型?；蜣D(zhuǎn)導(dǎo)與修飾的作用機(jī)制包括同源重組、非同源重組等。因此，需要根據(jù)多方面因素、針對(duì)不同類型產(chǎn)品的特性進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和控制。應(yīng)通過(guò)綜合風(fēng)險(xiǎn)分析來(lái)論...

對(duì)于CAR修飾的免疫細(xì)胞，應(yīng)采用多種體外方法評(píng)估其胞外抗原識(shí)別區(qū)的脫靶風(fēng)險(xiǎn)。TCR修飾免疫細(xì)胞的脫靶毒性可通過(guò)評(píng)估TCR與人體自身抗原肽的交叉識(shí)別能力來(lái)評(píng)估。首先，應(yīng)采用體外試驗(yàn)測(cè)定TCR修飾的免疫細(xì)胞與人自身抗原肽-HLA（與遞呈靶抗原肽的HLA等位基因相同）復(fù)合物的親和力，并說(shuō)明抗原肽的選擇依據(jù)及選擇范圍。此外，還應(yīng)研究其他相關(guān)或不相關(guān)的蛋白中是否含有靶抗原肽序列。如果TCR與人自身抗原肽有交叉反應(yīng)可能，應(yīng)確定靶抗原肽的較小識(shí)別基序（motif），并采用計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)分析評(píng)估交叉反應(yīng)性。如果計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)可識(shí)別出具有潛在交叉反應(yīng)性的抗原肽，應(yīng)在體外測(cè)定TCR修飾免疫細(xì)胞對(duì)表達(dá)相應(yīng)蛋白或遞呈相應(yīng)抗原...

關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長(zhǎng)期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao產(chǎn)品的基因組整合風(fēng)險(xiǎn)，建議申辦方分析基因zhiliao載體在靶細(xì)胞或相關(guān)替代細(xì)胞的基因組中整合的影響如在優(yōu)勢(shì)克隆、克隆性生長(zhǎng)是否導(dǎo)致惡性。依據(jù)載體在靶細(xì)胞基因組中整合能力的不同，可分為非整合型、定點(diǎn)整合型、弱整合型、隨機(jī)整合型等不同類型。基因轉(zhuǎn)導(dǎo)與修飾的作用機(jī)制包括同源重組、非同源重組等。因此，需要根據(jù)多方面因素、針對(duì)不同類型產(chǎn)品的特性進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和控制。應(yīng)通過(guò)綜合風(fēng)險(xiǎn)分析來(lái)論...

流式檢測(cè)CAR+T細(xì)胞數(shù)量，較，作者用FC流式評(píng)估了用axis-cel和tisasa-celzhiliao的患者的CAR+T細(xì)胞的數(shù)量。在CAR-T細(xì)胞給藥后5個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)冷凍的PBMCs上對(duì)UPN#009(軸細(xì)胞)和UPN#020(組織細(xì)胞)進(jìn)行了回顧性FC試驗(yàn)。CAR-T細(xì)胞的數(shù)量測(cè)定每ul血液。從圖4中可以明顯看出，兩種方法都可以觀察到CAR-T細(xì)胞數(shù)量的高度收斂。值得注意的是，所有三種方法(fc、dPCR和qPCR)都檢測(cè)到了第35天UPN#009中CAR-T細(xì)胞數(shù)量的復(fù)蘇。這些數(shù)據(jù)與我們小組之前觀察到的基于PCR和基于fc的定量的高一致性相一致。隨訪載體拷貝數(shù)檢測(cè)服務(wù)，選上海唯可，檢...

使用核酸載體進(jìn)行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)或修飾時(shí)，應(yīng)持續(xù)關(guān)注細(xì)胞產(chǎn)品中載體系統(tǒng)的殘留情況，分析外源在基因組中的插入位置、拷貝數(shù)等，監(jiān)控基因編輯用酶的細(xì)胞內(nèi)持續(xù)表達(dá)時(shí)間等，并在受試者給藥后進(jìn)行長(zhǎng)期安全性監(jiān)測(cè)。當(dāng)基因zhiliao產(chǎn)品在生殖qiguan持續(xù)存在時(shí)，需要進(jìn)一步研究確定其在生殖細(xì)胞（例如卵母細(xì)胞、精子）的暴露水平。根據(jù)載體類型、復(fù)制能力、基因組整合特性、劑量水平、給藥途徑等因素，分析評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品生殖系整合風(fēng)險(xiǎn)?；騴hiliao產(chǎn)品將遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞內(nèi)或整合到宿主基因組中或?qū)λ拗骰蚪M進(jìn)行編輯，存在潛在的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。目前對(duì)于判斷細(xì)胞基因組插入/修飾是否會(huì)產(chǎn)生遺傳毒性、是否較終會(huì)發(fā)...

安全性說(shuō)明包括藥物重要的已確認(rèn)風(fēng)險(xiǎn)，重要的潛在風(fēng)險(xiǎn)和重要的缺失信息。CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品安全性風(fēng)險(xiǎn)較高，應(yīng)在產(chǎn)品整個(gè)研發(fā)過(guò)程中持續(xù)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別，以預(yù)防和降低風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品特點(diǎn)、作用靶點(diǎn)和作用機(jī)制，其安全性風(fēng)險(xiǎn)可能包括：T細(xì)胞jihuo引起的細(xì)胞因子釋放綜合征、免疫效應(yīng)細(xì)胞相關(guān)神經(jīng)毒性綜合征等；腫瘤細(xì)胞被快速殺傷引起的liu溶解綜合征；遺傳物質(zhì)整合到宿主基因組中、患者長(zhǎng)期處于免疫抑制狀態(tài)誘發(fā)（惡性）liu形成；誘導(dǎo)自身免疫或免疫原性反應(yīng)；出現(xiàn)移植物抗宿主病或原有移植物抗宿主病加重；由于用藥錯(cuò)誤/用藥不當(dāng)而造成傷害等。此外，接受CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)...

穿梭質(zhì)粒：是指一類人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)和篩選，因而可以在兩種不同類群宿主中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。此概念不僅用于不同的微生物菌群之間，也可以推廣到真核生物表達(dá)載體的構(gòu)建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體pMT2和用于植物細(xì)胞的Ti質(zhì)粒。這些穿梭質(zhì)粒不僅可以在大腸桿菌中復(fù)制擴(kuò)增，也可以在相應(yīng)的枯草、酵母、動(dòng)物或植物細(xì)胞中擴(kuò)增和表達(dá)。這樣利于對(duì)質(zhì)粒的分子生物學(xué)操作和大量制備。質(zhì)粒的不相容性：通俗來(lái)說(shuō)，就是一山不能容二虎。但是作為科學(xué)來(lái)說(shuō)，我們需要一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)亩x?！袄猛粡?fù)制系統(tǒng)的兩個(gè)質(zhì)粒會(huì)在復(fù)制和隨后向自細(xì)胞的分配過(guò)程中彼此競(jìng)爭(zhēng)，這樣的質(zhì)粒在細(xì)菌培養(yǎng)物中不能和平...

對(duì)于CAR修飾的免疫細(xì)胞，應(yīng)采用多種體外方法評(píng)估其胞外抗原識(shí)別區(qū)的脫靶風(fēng)險(xiǎn)。TCR修飾免疫細(xì)胞的脫靶毒性可通過(guò)評(píng)估TCR與人體自身抗原肽的交叉識(shí)別能力來(lái)評(píng)估。首先，應(yīng)采用體外試驗(yàn)測(cè)定TCR修飾的免疫細(xì)胞與人自身抗原肽-HLA（與遞呈靶抗原肽的HLA等位基因相同）復(fù)合物的親和力，并說(shuō)明抗原肽的選擇依據(jù)及選擇范圍。此外，還應(yīng)研究其他相關(guān)或不相關(guān)的蛋白中是否含有靶抗原肽序列。如果TCR與人自身抗原肽有交叉反應(yīng)可能，應(yīng)確定靶抗原肽的較小識(shí)別基序（motif），并采用計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)分析評(píng)估交叉反應(yīng)性。如果計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)可識(shí)別出具有潛在交叉反應(yīng)性的抗原肽，應(yīng)在體外測(cè)定TCR修飾免疫細(xì)胞對(duì)表達(dá)相應(yīng)蛋白或遞呈相應(yīng)抗原...

在沒(méi)有接受任何橋接zhiliao的3名患者中，1名患者有PR,2名患者有PD之前接受過(guò)CAR-T細(xì)胞zhiliao。CAR-T細(xì)胞zhiliao后，16例患者發(fā)生CRS，其中3例為高級(jí)別CRS。6例ICANS,2例ICANS等級(jí)高。CAR-T細(xì)胞拷貝的峰值水平在43到159,304拷貝/ugPBMCDNA之間。在CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增高峰(UPN#001和#003)的患者中觀察到高ICANS。1例患者(UPN#017)在CAR-T細(xì)胞zhiliao后1周內(nèi)死亡，原因是噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增多/巨噬細(xì)胞活化綜合征。其余19例患者可評(píng)估臨床療效:14例(74%)患者zhiliao有效，8例(42%)...

在細(xì)菌細(xì)胞中，某種特定基因的數(shù)目。一般檢測(cè)方法有若是測(cè)序結(jié)果，可選用censor軟件檢測(cè)相關(guān)拷貝數(shù)。Southernblot是一種常用的DNA定量的分子生物學(xué)方法。其原理是將待測(cè)的DNA樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號(hào)，通過(guò)檢測(cè)信號(hào)的有無(wú)、強(qiáng)弱可以對(duì)樣品定性、定量，從而計(jì)算出轉(zhuǎn)入的拷貝數(shù)。Southern法準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)，但存在費(fèi)時(shí)費(fèi)力的缺點(diǎn)。另外，由于 Southern 法檢測(cè)不經(jīng)過(guò)靶片段的擴(kuò)增（ PCR ），一般每個(gè)電泳通道需要 10-30 μ g 的 DNA ，在實(shí)際操作中就需要較大量的植物材料...

利用ddPCR檢測(cè)溶液中空載體的濃度和整合到T細(xì)胞群中的CAR和TCR載體的平均數(shù)量。ddPCR檢測(cè)到的平均每個(gè)細(xì)胞的載體拷貝數(shù)與流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到的細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)比例呈線性關(guān)系。使用ddPCR與Real-time PCR的定量精度比較表明，ddPCR明顯更精確，測(cè)量的差異減少了7倍，文中通過(guò)一些數(shù)據(jù)的比較說(shuō)明了ddPCR具有更高的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。使用ddPCR測(cè)定法通過(guò)不同的工作人員獲得了類似的載體拷貝數(shù)測(cè)量結(jié)果，突出了該測(cè)定法在技術(shù)人員之間的可重復(fù)性。對(duì)新鮮的和冷凍保存的CAR T和TCR工程改造的T細(xì)胞進(jìn)行的分析得出了相似的結(jié)果。說(shuō)明ddPCR是一種準(zhǔn)確定量CAR和TCR工程T細(xì)胞中平均載體拷貝...

新型CAR/TCR T細(xì)胞臨床產(chǎn)品中載體拷貝數(shù)的定量—數(shù)字PCR法?；蚬こ蘐細(xì)胞已經(jīng)成為zhiliaoB細(xì)胞惡性的重要方法。CAR-T細(xì)胞的常見應(yīng)用是zhiliao過(guò)表達(dá)細(xì)胞外標(biāo)記物的B細(xì)胞惡性?；蚬こ蘐細(xì)胞已經(jīng)成為zhiliaoB細(xì)胞惡性的重要方法。CAR-T細(xì)胞的常見應(yīng)用是zhiliao過(guò)表達(dá)細(xì)胞外標(biāo)記物的B細(xì)胞惡性。嵌合抗原受體(CAR)T細(xì)胞是一種新型細(xì)胞療法，其中自患者體內(nèi)收獲自體T細(xì)胞并進(jìn)行基因修飾以表達(dá)嵌合抗原受體。測(cè)量載體整合到T細(xì)胞基因組的效率對(duì)于評(píng)估這些ai免疫療法的效力和安全性是很重要的。 ..CAR-T載體拷貝數(shù)檢測(cè)服務(wù)，歡迎來(lái)電咨詢！廣州病毒載體拷貝數(shù)企業(yè)載體拷貝...

安全性說(shuō)明包括藥物重要的已確認(rèn)風(fēng)險(xiǎn)，重要的潛在風(fēng)險(xiǎn)和重要的缺失信息。CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品安全性風(fēng)險(xiǎn)較高，應(yīng)在產(chǎn)品整個(gè)研發(fā)過(guò)程中持續(xù)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別，以預(yù)防和降低風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品特點(diǎn)、作用靶點(diǎn)和作用機(jī)制，其安全性風(fēng)險(xiǎn)可能包括：T細(xì)胞jihuo引起的細(xì)胞因子釋放綜合征、免疫效應(yīng)細(xì)胞相關(guān)神經(jīng)毒性綜合征等；腫瘤細(xì)胞被快速殺傷引起的liu溶解綜合征；遺傳物質(zhì)整合到宿主基因組中、患者長(zhǎng)期處于免疫抑制狀態(tài)誘發(fā)（惡性）liu形成；誘導(dǎo)自身免疫或免疫原性反應(yīng)；出現(xiàn)移植物抗宿主病或原有移植物抗宿主病加重；由于用藥錯(cuò)誤/用藥不當(dāng)而造成傷害等。此外，接受CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)...

對(duì)于TCR修飾的T細(xì)胞，還應(yīng)關(guān)注引入TCR鏈和內(nèi)源性TCR之間的錯(cuò)配可能性，應(yīng)描述和說(shuō)明旨在降低錯(cuò)配可能性的TCR設(shè)計(jì)策略。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞產(chǎn)品誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（inducedpluripotentstemcell，iPS）自身具有致瘤性風(fēng)險(xiǎn)，在體內(nèi)可形成畸胎瘤，整合病毒載體的使用和誘導(dǎo)多能性可能增加iPS細(xì)胞插入致突變性和致性的風(fēng)險(xiǎn)。因此，應(yīng)在shouci臨床試驗(yàn)前完成致瘤性試驗(yàn)。若設(shè)計(jì)科學(xué)合理，能夠滿足評(píng)價(jià)要求，也可在持續(xù)時(shí)間足夠長(zhǎng)的毒性研究中評(píng)估致瘤性風(fēng)險(xiǎn)。體內(nèi)致瘤性試驗(yàn)建議采用摻入未分化iPS細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)品作為陽(yáng)性對(duì)照，以確認(rèn)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的靈敏度。用于檢測(cè)單個(gè)CAR-T細(xì)胞的慢病毒載...

安全性說(shuō)明包括藥物重要的已確認(rèn)風(fēng)險(xiǎn)，重要的潛在風(fēng)險(xiǎn)和重要的缺失信息。CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品安全性風(fēng)險(xiǎn)較高，應(yīng)在產(chǎn)品整個(gè)研發(fā)過(guò)程中持續(xù)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別，以預(yù)防和降低風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品特點(diǎn)、作用靶點(diǎn)和作用機(jī)制，其安全性風(fēng)險(xiǎn)可能包括：T細(xì)胞jihuo引起的細(xì)胞因子釋放綜合征、免疫效應(yīng)細(xì)胞相關(guān)神經(jīng)毒性綜合征等；腫瘤細(xì)胞被快速殺傷引起的liu溶解綜合征；遺傳物質(zhì)整合到宿主基因組中、患者長(zhǎng)期處于免疫抑制狀態(tài)誘發(fā)（惡性）liu形成；誘導(dǎo)自身免疫或免疫原性反應(yīng)；出現(xiàn)移植物抗宿主病或原有移植物抗宿主病加重；由于用藥錯(cuò)誤/用藥不當(dāng)而造成傷害等。此外，接受CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)...

質(zhì)粒的不相容性通俗來(lái)說(shuō)，就是一山不能容二虎。但是作為科學(xué)來(lái)說(shuō)，我們需要一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)亩x。“利用同一復(fù)制系統(tǒng)的兩個(gè)質(zhì)粒會(huì)在復(fù)制和隨后向自細(xì)胞的分配過(guò)程中彼此競(jìng)爭(zhēng)，這樣的質(zhì)粒在細(xì)菌培養(yǎng)物中不能和平共處，這種現(xiàn)象稱之為不相容性”。那要怎么才能在一個(gè)菌里面使用兩個(gè)質(zhì)粒呢？簡(jiǎn)單的方法就是使用不同復(fù)制源的且?guī)в胁煌剐曰虻膬蓚€(gè)質(zhì)粒。pUCori：復(fù)制起始點(diǎn)，pUC為高拷貝表達(dá)質(zhì)粒（120-200個(gè)/細(xì)胞）。Amp：氨芐抗性，為原核抗性，用于質(zhì)粒抽提時(shí)的篩選。U6promoter：U6啟動(dòng)子，真核啟動(dòng)子，啟動(dòng)shRNA的表達(dá)。CMV：真核啟動(dòng)子，啟動(dòng)ZsGreen1的表達(dá)。ZsGreen1：第三代綠色熒光蛋...

新型CAR/TCR T細(xì)胞臨床產(chǎn)品中載體拷貝數(shù)的定量—數(shù)字PCR法?；蚬こ蘐細(xì)胞已經(jīng)成為zhiliaoB細(xì)胞惡性的重要方法。CAR-T細(xì)胞的常見應(yīng)用是zhiliao過(guò)表達(dá)細(xì)胞外標(biāo)記物的B細(xì)胞惡性?；蚬こ蘐細(xì)胞已經(jīng)成為zhiliaoB細(xì)胞惡性的重要方法。CAR-T細(xì)胞的常見應(yīng)用是zhiliao過(guò)表達(dá)細(xì)胞外標(biāo)記物的B細(xì)胞惡性。嵌合抗原受體(CAR)T細(xì)胞是一種新型細(xì)胞療法，其中自患者體內(nèi)收獲自體T細(xì)胞并進(jìn)行基因修飾以表達(dá)嵌合抗原受體。測(cè)量載體整合到T細(xì)胞基因組的效率對(duì)于評(píng)估這些ai免疫療法的效力和安全性是很重要的。 ..LV載體拷貝數(shù)qPCR分析可根據(jù)監(jiān)管要求使用100ng級(jí)別的人類基因組DN...

由于CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品的特點(diǎn)和作用機(jī)制，在開展CAR-T臨床試驗(yàn)過(guò)程中也暴露出了細(xì)胞因子釋放綜合征（Cytokinereleasesyndrome,CRS）、免疫效應(yīng)細(xì)胞相關(guān)神經(jīng)毒性綜合征（ImmuneEffectorCell-associatedNeurotoxicitySyndrome，ICANS）等如不及時(shí)采取妥當(dāng)?shù)募本却胧┛赡苤旅牟涣挤磻?yīng)。除自體來(lái)源的CAR-T細(xì)胞外，移植供體來(lái)源CAR-T細(xì)胞以及通用型CAR-T細(xì)胞也已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。由于它們的新穎性、復(fù)雜性和技術(shù)特異性，可能會(huì)給患者帶來(lái)遠(yuǎn)期的、潛在的安全性風(fēng)險(xiǎn)。載體拷貝數(shù)就是某種質(zhì)粒在單個(gè)細(xì)菌中的數(shù)量。廣州VCN...

在基因工程中，質(zhì)粒的拷貝數(shù)應(yīng)該怎么理解?為什么構(gòu)建載體時(shí)要選擇高拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體?把細(xì)胞當(dāng)做工廠，質(zhì)粒就是廠房里的流水線，拷貝數(shù)就流水線的數(shù)量在理想狀態(tài)下，選擇盡量多的流水線，這樣能得到的產(chǎn)品多，這是很自然的選擇實(shí)際上，高拷貝也有它的問(wèn)題，當(dāng)流水線多到一定程度，決定產(chǎn)量就不只是流水線的多寡，工人的工作效率，也就是轉(zhuǎn)錄翻譯水平，也會(huì)影響到較終的產(chǎn)量此外，過(guò)多的流水線帶來(lái)放不下的情況，工廠沒(méi)那么大地方，原材料供應(yīng)不上，吃不消，也會(huì)影響到工廠正常運(yùn)轉(zhuǎn)所以，拷貝數(shù)只是一個(gè)方面，構(gòu)建載體要綜合考慮各方面及實(shí)際用途。有時(shí)低拷貝質(zhì)粒滲漏表達(dá)，反而有奇效。檢測(cè)細(xì)胞中病毒載體拷貝數(shù)的引物和探針、試劑盒、方法。江...