聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：模板的制備，PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。模板的取材主要依據(jù)PCR的擴(kuò)增對(duì)象，可以是病原體標(biāo)本如病毒、細(xì)菌、菌類等。也可以是病理生理標(biāo)本如細(xì)胞、血液、羊水細(xì)胞等。法醫(yī)學(xué)標(biāo)本有血斑、精斑、毛發(fā)等。標(biāo)本處理的基本要求是除去雜質(zhì)，并部分純...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的試驗(yàn)污染：PCR反應(yīng)的很大特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與極高的靈敏性，但令人腦袋不適的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽(yáng)性的產(chǎn)生。 污染原因：標(biāo)本間交叉污染：標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染，或標(biāo)本放置時(shí)，由于密封不嚴(yán)溢于容器外，或容器外粘有...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)準(zhǔn)備：引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補(bǔ)序列。兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其是避免3 ′端的互補(bǔ)重疊。引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過70%，引物3′末端連續(xù)8個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。引物3‘端的堿基，特別是...

不同產(chǎn)地的胎牛血清，品質(zhì)也是相差甚遠(yuǎn)。值得注意的是，胎牛血清是動(dòng)物源生物制品，我國(guó)對(duì)于動(dòng)物源制品的進(jìn)口一直有很嚴(yán)格的規(guī)定，目前我國(guó)批準(zhǔn)進(jìn)口的胎牛血清來源是澳大利亞、新西蘭和烏拉圭，合法正規(guī)途徑進(jìn)口的胎牛血清必須在產(chǎn)品包裝上標(biāo)注血源地。這意味著，其他血源地的胎牛...

聚合酶鏈反應(yīng)也可以用作以下敏感試驗(yàn)的一部分組織分型，對(duì)移植至關(guān)重要。截至2008年，甚至有人提議用聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)取代傳統(tǒng)的血型抗體檢測(cè)。許多形式的病癥涉及致病基因的改變。通過使用基于聚合酶鏈反應(yīng)的測(cè)試來研究這些突變，醫(yī)治方案有時(shí)可以根據(jù)患者的不同而不同。聚合...

胎牛血清的合規(guī)血源產(chǎn)地對(duì)于細(xì)微差異即可決定成敗的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)來說，選擇來源安全、品質(zhì)優(yōu)良的胎牛血清至關(guān)重要。作為牛肉制品的副產(chǎn)品，胎牛血清的傳統(tǒng)產(chǎn)地包括澳大利亞，新西蘭， 美國(guó)， 南美（烏拉圭&巴西）以及歐洲等畜牧業(yè)發(fā)達(dá)的區(qū)域。業(yè)內(nèi)通常會(huì)根據(jù)不同產(chǎn)地的牛情況，...

胎牛血清用于細(xì)胞培養(yǎng)不過百年歷史，但發(fā)展得相當(dāng)快，每年的需求量也不斷上升。在胎牛血清和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的方面，國(guó)外起步較早，認(rèn)識(shí)也較深入。應(yīng)該說，胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)基方面，具有的優(yōu)勢(shì)。因?yàn)槠錉I(yíng)養(yǎng)，所以幾乎適合所有類型的細(xì)胞生長(zhǎng)，每種細(xì)胞都可以從中攝取自己所需的養(yǎng)分...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的特點(diǎn)：靈敏度高：PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12）量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克（μg=-6）水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位）；在細(xì)菌學(xué)中很小檢...

血清的主要作用：對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被較廣用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成...

聚合酶鏈反應(yīng)：嵌套聚合酶鏈反應(yīng):通過減少DNA非特異性擴(kuò)增的背景，提高DNA擴(kuò)增的特異性。兩組引物用于兩個(gè)連續(xù)的PCR。在個(gè)反應(yīng)中，一對(duì)引物用于產(chǎn)生DNA產(chǎn)物，除了預(yù)期的靶之外，該產(chǎn)物可能仍然由非特異性擴(kuò)增的DN段組成。然后用一組引物將產(chǎn)物用于第二次聚合酶鏈反...

胎牛血清用于細(xì)胞培養(yǎng)不過百年歷史，但發(fā)展得相當(dāng)快，每年的需求量也不斷上升。在胎牛血清和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的方面，國(guó)外起步較早，認(rèn)識(shí)也較深入。應(yīng)該說，胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)基方面，具有的優(yōu)勢(shì)。因?yàn)槠錉I(yíng)養(yǎng)，所以幾乎適合所有類型的細(xì)胞生長(zhǎng)，每種細(xì)胞都可以從中攝取自己所需的養(yǎng)分...

國(guó)際上流行的【血清融化三步法】可較為大限度地保存血清中因子的活性，不會(huì)產(chǎn)生沉淀，同時(shí)能縮短血清融化時(shí)間。關(guān)于胎牛血清的滅活：真正的胎牛血清因?yàn)樘ヅ]有形成有效補(bǔ)體，如果針對(duì)補(bǔ)體滅活的話，就不需要。其他情況根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來決定。胎牛血清的濃度：胎牛血清通常是以2%...

如何解凍血清？血清解凍需采用逐步解凍法：將血清從-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解，然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡），減少沉淀生成。切勿直接將血清從-20℃轉(zhuǎn)入37℃解凍，這樣因溫差較大易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)并出現(xiàn)沉淀。...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)又稱多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)利用DNA雙鏈復(fù)制的原理，在生物體外復(fù)制特定DN段的核酸合成技術(shù)。透過這項(xiàng)技術(shù)，可在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因，而不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。聚合酶鏈反應(yīng)是是一種簡(jiǎn)單，廉價(jià)和可靠的方法復(fù)制DN段，這個(gè)概念適用于現(xiàn)物學(xué)...

血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和生長(zhǎng)因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。血清指血漿...

聚合酶鏈反應(yīng)的常見問題分析與解決方法：反應(yīng)緩沖液未完全融化或未充分混勻。確保反應(yīng)緩沖液融化完全并徹底混勻。引物特異性差。利用BLAST檢查引物特異性或重新設(shè)計(jì)引物。引物量過多。減少反應(yīng)體系中引物的用量。模板量過多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)

胎牛血清與其它牛血清有何區(qū)別？根據(jù)牛出生時(shí)間和血清采集分離方法分為：胎牛血清：胎牛血清是指懷孕3-8個(gè)月的母牛被屠宰后，發(fā)育未完全的胎牛心臟密閉穿刺后，通過一系列工藝處理較為終獲得。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長(zhǎng)發(fā)育因子，一旦胚胎發(fā)育完全這些因子會(huì)自動(dòng)消失。新生牛...

那么如何保障胎牛血清的品質(zhì)呢：內(nèi)有毒的，內(nèi)有毒的含量越低的血清，胎牛血清級(jí)別就越高：內(nèi)有毒的≤10EU/ml時(shí)，此血清為特級(jí)胎牛血清；10EU/ml＜內(nèi)有毒的≤ 25EU/ml時(shí)，此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清；內(nèi)有毒的≥ 25EU/ml時(shí)，此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清；應(yīng)選...

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)...

血清的主要作用：提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。提供和各種生長(zhǎng)因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)（氫化可的松、）、類固醇（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。提供結(jié)...

添加胎牛血清的時(shí)候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液，因?yàn)槿绻囵B(yǎng)液有沉淀的存在，會(huì)使得其中培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生大量的黑點(diǎn)，除此之外，細(xì)胞的表面還很可能會(huì)覆蓋一層油狀物質(zhì)，總之出現(xiàn)這樣的情況會(huì)極其不利于細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。那么為了較為大程度減少血清的損失，可以把所有有沉淀的血清...

聚合酶鏈反應(yīng)同時(shí)擴(kuò)增單個(gè)精子中幾個(gè)基因座的能力]增強(qiáng)了極大地增強(qiáng)了通過研究減數(shù)分裂后染色體交叉來進(jìn)行基因定位的傳統(tǒng)任務(wù)。通過分析數(shù)千個(gè)單個(gè)精子，已經(jīng)直接觀察到非常緊密基因座之間罕見的交叉事件。類似地，可以分析異常的缺失、插入、易位或倒位，所有這些都無需等待(或...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)準(zhǔn)備：引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補(bǔ)序列。兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其是避免3 ′端的互補(bǔ)重疊。引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過70%，引物3′末端連續(xù)8個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。引物3‘端的堿基，特別是...

血清的保存應(yīng)該注意：血清中的沉淀物、絮狀物：主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量，可用離心3000rpm，5分鐘去除，也可不用處理，顯微鏡下"小黑點(diǎn)"。經(jīng)過熱處理過的血清，沉淀物的形成會(huì)明顯增多。有些沉淀物在顯微...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的常見問題：出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增帶：PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致，或大或小，或者同時(shí)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶 與非特異性擴(kuò)增帶。非特異性條帶的出現(xiàn)，其原因：一是引物與靶序列不完全互補(bǔ)、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低，...

聚合酶鏈反應(yīng)的常見問題分析與解決方法：無擴(kuò)增條帶：酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或運(yùn)輸不當(dāng)而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結(jié)果。模板含有雜質(zhì)。特別是對(duì)甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的...

如何挑選適合細(xì)胞生長(zhǎng)的血清？原代或是正常細(xì)胞株建議使用BI特級(jí)胎牛血清，對(duì)生長(zhǎng)條件要求高的細(xì)胞和干細(xì)胞可選用所用特級(jí)胎牛血清，或胚胎干細(xì)胞所用胎牛血清。由于血清有批間差異，細(xì)胞種類不同，我們建議客戶購(gòu)買前可先申請(qǐng)?jiān)囉脴悠?，通過篩選得到滿意的血清批號(hào)，之后根據(jù)項(xiàng)...

膜片鉗技術(shù)——打開細(xì)胞電生理之門：定義：膜片鉗技術(shù)被稱為研究離子通道的“金標(biāo)準(zhǔn)”，是一種基于電工學(xué)和電化學(xué)原理的分析手段，可以通過檢測(cè)細(xì)胞的電信號(hào)(電生理性質(zhì))來研究化學(xué)物質(zhì)、電、機(jī)械力等刺激因素對(duì)細(xì)胞功能的影響，從而幫助揭示細(xì)胞在生命活動(dòng)中的化學(xué)和生物學(xué)機(jī)制...

膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細(xì)胞膜面積不同，進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細(xì)胞跨膜電位不變，并迅速控制其數(shù)值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個(gè)細(xì)胞膜或...

膜片鉗技術(shù)與其他生物檢測(cè)技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用：1.膜片鉗與光學(xué)顯微成像技術(shù)結(jié)合應(yīng)用：利用激光掃描共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術(shù)可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)成像研究，將膜片鉗技術(shù)與光學(xué)顯微成像技術(shù)結(jié)合使用不但可以檢測(cè)細(xì)胞的電流變化情況，而且還可以對(duì)細(xì)胞的電信號(hào)傳遞...