胎牛血清制備：用止血鉗夾住血管，切開1厘米左右的切口進(jìn)行插管，插好管后打開血管的止血鉗，讓牛血順采的血管流入另一個潔凈房間內(nèi)的瓶中。采的血瓶采的血前經(jīng)干烤滅菌（180℃2小時）后，按無菌操作注入10毫升左右經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口，于采的血前半小時放入3...

胎牛血清如何采取?在牛屠宰過程中，如發(fā)現(xiàn)母牛懷孕，就應(yīng)立即將生殖系統(tǒng)從尸體中分離出來，在無菌條件下從子宮中取出小牛，進(jìn)行臍帶打結(jié)處理，清理羊水并消毒。在胎兒兩肋之間直接插入一根針頭到心臟，在真空的條件下，血液通過導(dǎo)管被抽入無菌的血液收集袋內(nèi)。在沒有真空泵時，也...

一種提高膜片鉗實驗效率的方法與流程：膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜上離子通道分子活動的技術(shù)。是用來研究單個離體的活細(xì)胞、組織切片或細(xì)胞膜片離子流的電生理實驗技術(shù)。這項技術(shù)在可興奮細(xì)胞如神經(jīng)元、心肌細(xì)胞、肌纖維和胰腺細(xì)胞的研究中起至關(guān)重要...

胎牛血清與其它牛血清有何區(qū)別？胎牛血清（FoetalBovineSerum，簡稱FBS）：胎牛血清是指懷孕3-8個月的母牛被屠宰后，發(fā)育未完全的胎牛心臟密閉穿刺采的血后，通過一系列工藝處理獲得。此時胎牛血中含有特殊的生長發(fā)育因子，一旦胚胎發(fā)育完全這些因子會自動...

胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用：1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的Hormone，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有...

所謂real-timeQ-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，之后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在real-time技術(shù)的發(fā)展過程中，兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）TaqDNA多聚酶的5′核...

如何區(qū)別真假胎牛血清：1、血紅蛋白，標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl，顏色越紅，數(shù)值越高，反之，數(shù)值越低。2、pH，國產(chǎn)血清，大多高于7.5，進(jìn)口胎牛血清，大多低于7.5，具體原因未知，可能和牛齡有關(guān)，這也能用來初步鑒別血清的來源。3、微生物。包括細(xì)菌、霉菌、支原體...

胎牛血清都有哪些重要的指標(biāo)：一、內(nèi)的毒性，內(nèi)的毒性是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的特有成分。當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時，才表現(xiàn)其毒性。內(nèi)的毒性直接參與細(xì)胞凋亡，血清中內(nèi)的毒性含量越低，對細(xì)胞毒性越小，越利于細(xì)胞的生長和傳代；內(nèi)的毒性含量過高，會直接導(dǎo)致細(xì)...

胎牛血清：胎牛血清(FBS)，胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質(zhì)含量...

胎牛血清：胎牛血清用于細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)超過半個世紀(jì)了，20世紀(jì)50年代末TheodorePuck在細(xì)胞和組織培養(yǎng)中初次加入胎牛血清（FBS）來刺激細(xì)胞生長。后來人們發(fā)現(xiàn)，由于胎牛未進(jìn)食過母乳，所以IgG的含量極低，不會阻礙細(xì)胞生長，而且胎牛血清中含有豐富的促進(jìn)細(xì)胞...

所謂real-timeQ-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，之后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在real-time技術(shù)的發(fā)展過程中，兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）TaqDNA多聚酶的5′核...

Real-time PCR-傳統(tǒng)定量PCR：1）內(nèi)參照法：在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電...

Real-time PCR反應(yīng)：多重連接依賴探針擴增（MLPA):允許用單個引物對擴增多個靶標(biāo)，從而避免多重PCR的分辨率限制。多重聚合酶鏈反應(yīng):由單個PCR混合物中的多個引物組組成，以產(chǎn)生對不同DNA序列特異的不同大小的擴增子。通過同時靶向多個基因，可以從單...

Real-time PCR的染料法和探針法的選擇：進(jìn)行mRNA表達(dá)量的測定，采用染料法是比較經(jīng)濟(jì)實惠的；染料法可以通過比較熔解曲線的熔解峰位置得到產(chǎn)物特異性的情況；目的基因和內(nèi)參基因分管檢測，染料法可以選用Realtime染料PCRPreMIX，探針法主要應(yīng)用...

Real-time PCR螢光染料摻入法:在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR螢光染料，SYBR螢光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射螢光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何螢光信號，從而保證螢光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。此方法適用于：...

胎牛血清的主要成分有哪些？脂聯(lián)素，有人發(fā)現(xiàn)，將牛脂聯(lián)素注射入C57小鼠，可降低循環(huán)血糖水平和在高脂飲食后提高脂肪清理率。持續(xù)注射牛脂聯(lián)素兩周后，胰島素敏感性和葡萄糖耐受性明顯增強，高脂喂養(yǎng)小鼠肝臟脂質(zhì)堆積減少。這些結(jié)果提供了直接的證據(jù)表明內(nèi)源性牛脂聯(lián)素是一種調(diào)...

如果胎牛血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，應(yīng)該如何去除？胎牛血清中的沉淀物出現(xiàn)有很多種原因，但較普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白在胎牛血清解凍后，也會存在于胎牛血清中，這也是造成沉淀物的主要原因之一。但少量絮狀沉淀物，并不影響胎牛血清本...

胎牛血清的生產(chǎn)工藝：透析胎牛血清，顧名思義，需經(jīng)過透析。它是在4°C下用特定的透析膜對血清在0.15MNaCl中透析。由于該透析膜只允許10kDa以下的小分子穿過，在滲透壓的作用下，這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10kDa以下的小分子有化...

Real-time PCR從用途上分可以分為定性分析和定量分析：定量分析可以分為定量和相對定量兩種。定量指的是我們想知道某個基因在初始樣品中具體的拷貝數(shù)或濃度是多少？定量實驗必須使用已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品，必須做標(biāo)準(zhǔn)曲線。而相對定量是指我們想知道某一個基因在不同樣...

Real-time PCR的染料法和探針法的選擇：進(jìn)行mRNA表達(dá)量的測定，采用染料法是比較經(jīng)濟(jì)實惠的；染料法可以通過比較熔解曲線的熔解峰位置得到產(chǎn)物特異性的情況；目的基因和內(nèi)參基因分管檢測，染料法可以選用Realtime染料PCRPreMIX，探針法主要應(yīng)用...

如何區(qū)別真假胎牛血清：沉淀，很多血清客戶，會發(fā)現(xiàn)進(jìn)口血清有沉淀，從而懷疑血清的質(zhì)量問題，這是沒有根據(jù)的。血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生，對血清質(zhì)量沒有任何影響，沉淀的產(chǎn)生原因很多，和廠家的加工生產(chǎn)方式密切相關(guān)。國產(chǎn)的血清，大多來自北方，由于價格低廉，保存環(huán)...

胎牛血清應(yīng)該如何保存，可以存放多久？胎牛血清可長期儲存于-20℃冰箱中。倘若把胎牛血清存放在4℃冰箱，請不要超過一個月。如果一次性無法用完一瓶血清，建議將胎牛血清無菌條件下分裝并儲存于-20℃，避免反復(fù)凍融。如何正確地解凍胎牛血清？采用逐步解凍法，將胎牛血清從...

Real-time PCR原理：Real-time PCR主要指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)，然后通過熒光化學(xué)物質(zhì)監(jiān)測每次PCR反應(yīng)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法，之后通過內(nèi)參法或外參法對待測樣品中的特定DNA序列（目的基因）進(jìn)行定量分析的方法。實驗過程中，這些熒光物...

引物的設(shè)計注意事項：1，引物設(shè)計要跨內(nèi)含子，不能在一個外顯子上（我們的實驗是以cDNA為模板來擴增的，如果有DNA污染的話，因為DNA上含有分子量很大的內(nèi)含子，不可能完成擴增。這對我們消除整個實驗的誤差起很大的作用）。2，引物設(shè)計的時候要盡可能設(shè)計在同一退火溫...

Real-time PCR-傳統(tǒng)定量PCR：1）內(nèi)參照法：在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電...

Real-time PCR鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的常見問題：靶序列變異：如靶序列發(fā)生突變或缺失，影響引物與模板特異性結(jié)合，或因靶序列某段缺失使引物與模板失去互補序列，其PCR擴增是不會成功的。假陽性：出現(xiàn)的PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致，有時其條帶更整齊，亮度更高。引物...

胎牛血清是血液凝固后的液體部分，不含血細(xì)胞、纖維蛋白及凝集因子等，含有多種對細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)因子及大分子物質(zhì)。血清白蛋白是胎牛血清的主要成分。此外，重要的是，胎牛血清中含有大量對細(xì)胞生長必需的生長因子。胎牛血清也含有一些小分子物質(zhì)，如氨基酸、糖類、脂類及Ho...

Real-time PCR鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶，不但操作煩瑣，而且價格昂貴，制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展。耐熱DNA聚合酶-Taq酶的發(fā)現(xiàn)對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技...

Real-time PCR從用途上分可以分為定性分析和定量分析：定性分析指的是用于分析待檢測的樣本中是否存在我們想要檢測的成分，即待檢測成分有無的分析。通常，定性分析可以應(yīng)用于病毒以及病原菌的檢測，物種鑒定以及基因分型等。病毒及病原菌檢測，如SARS、H1N1...

Real-time PCR原理：基于探針的化學(xué)法，Real-time PCR應(yīng)用一個或多個熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針檢測PCR擴增產(chǎn)物；依賴熒光能量共振傳遞（FRET）檢測特異性擴增產(chǎn)物，單單檢測特異性擴增產(chǎn)物，DNA及RNA定量；基因表達(dá)驗證；等位基因鑒別；SN...