浙江cck8英文說(shuō)明書(shū)

CCK8實(shí)驗(yàn)操作CCK8的優(yōu)勢(shì)在于對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，可以直接加入細(xì)胞中長(zhǎng)時(shí)間孵育，而不用考慮試劑本身對(duì)細(xì)胞帶來(lái)的影響。1、向96孔板中每孔加入細(xì)胞100ul，置于培養(yǎng)箱中孵育24小時(shí)，96孔板的排版情況和上述MTT相同，在這里不重復(fù)介紹了。2、向各孔中加入10ul的CCK-8檢測(cè)溶液。如若檢測(cè)的細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn)，需在此之前加入作用***培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8檢測(cè)液。3、培養(yǎng)箱中孵育1～4小時(shí)，比較好反應(yīng)時(shí)間以細(xì)胞具體顯色程度為準(zhǔn)。對(duì)細(xì)胞毒性小；6、為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開(kāi)即用。 缺點(diǎn).浙江cck8英文說(shuō)明書(shū)

統(tǒng)一鋪好后，待細(xì)胞完全沉淀下來(lái)后，在顯微鏡下觀察各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞密度，如果密度不均勻，則固定一組，微調(diào)其他組細(xì)胞的量再次鋪板（如：發(fā)現(xiàn)NC組細(xì)胞較多，降低細(xì)胞量再次鋪板），放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4.從鋪板后第二天開(kāi)始，每孔加入10-20μlCCK-8溶液，如果每孔的培養(yǎng)基為100μl，則加入10μlCCK-8溶液，如果每孔的培養(yǎng)基為200μl，則加入20μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。用加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒(méi)有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。浙江dojindo cck8CCK-8 反復(fù)凍融會(huì)增加背景值，干擾實(shí)驗(yàn)測(cè)定。

CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請(qǐng)見(jiàn)說(shuō)明書(shū)）：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測(cè)1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。5、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)1.先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。2.按比例(例如：1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個(gè)復(fù)孔。3.接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定O.D值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸)，O.D值為縱坐標(biāo)(Y軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的前提條件是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間)。cck8試劑盒價(jià)格是多少?

CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】。它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。代謝率低了以后，細(xì)胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少，測(cè)出的Formazan也會(huì)減少。湖北cck8換液

MTT與CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)和注意事項(xiàng).浙江cck8英文說(shuō)明書(shū)

CCK8檢測(cè)原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、細(xì)胞處理（不同實(shí)驗(yàn)處理方式不同）。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。6、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。浙江cck8英文說(shuō)明書(shū)