CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖和毒性實(shí)驗(yàn)佰歐晶生物專(zhuān)注于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢(xún)和技術(shù)服務(wù)，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究，中藥功能及機(jī)理研究，納米靶向***研究，**研究整體方案服務(wù)。CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8）試劑用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。該方法已被***用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗*****篩選以及藥敏試驗(yàn)等。天津cck8孵育時(shí)間
培養(yǎng)基對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會(huì)增加空白吸收，但不影響測(cè)定，扣除空白吸收即可，可見(jiàn)空白孔非常重要，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照。另外，血清不影響測(cè)定，所以我用CCK-8來(lái)測(cè)定病毒對(duì)細(xì)胞活性的影響或者某個(gè)***對(duì)病毒復(fù)制的影響時(shí)，我都小心翼翼的測(cè)很多個(gè)時(shí)間點(diǎn)，說(shuō)實(shí)話，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。湖北dojindo cck8說(shuō)明書(shū)在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）.
。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測(cè)定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度作為空白對(duì)照。金屬對(duì)CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)***5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10 mM的話，將會(huì)*****。懸浮細(xì)胞由于染色比較困難，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。
7、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。注意：如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可?；盍τ?jì)算：保存條件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。cck8試劑盒原理是什么a?
實(shí)驗(yàn)材料及試劑96孔板、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈、移液***、酶標(biāo)儀等；細(xì)胞、CCK8等。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，每孔按4×103個(gè)接種至96孔板中，每組設(shè)置8個(gè)復(fù)孔，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含10ｕL的毒性檢測(cè)液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后，用酶標(biāo)儀測(cè)波長(zhǎng)為450nm的OD值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值作為**終實(shí)驗(yàn)結(jié)果。按公式計(jì)算生長(zhǎng)***率＝[(對(duì)照組OD－實(shí)驗(yàn)組OD)/對(duì)照組OD]×**，以分組為橫坐標(biāo)，生長(zhǎng)***率為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)科研狗**值錢(qián)的就是時(shí)間,不能再被CCK8“拖累”了.江蘇cck8換液
水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞.天津cck8孵育時(shí)間
酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾，可以通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
· CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過(guò)程中需要避免細(xì)菌污染，以免影響結(jié)果。
· CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個(gè)月，在-20℃下避光可以保存1年。
· 當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下，**外一圈的孔加培養(yǎng)基或者PBS，不作為測(cè)定孔用。
· 在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度作為空白對(duì)照。 天津cck8孵育時(shí)間