上海dojindo cck8 說(shuō)明書(shū)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-20

CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖和毒性實(shí)驗(yàn)佰歐晶生物專(zhuān)注于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢(xún)和技術(shù)服務(wù),致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究,中藥功能及機(jī)理研究,納米靶向***研究,**研究整體方案服務(wù)。CellCountingKit-8(簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8)試劑用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazandye)。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。CCK-8的英文全稱(chēng)是Cell Counting Kit-8,也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)盒子。上海dojindo cck8 說(shuō)明書(shū)

CCK-8的原理

所以粗略的可以認(rèn)為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。為什么是粗略的呢,因?yàn)檫@里沒(méi)有考慮到細(xì)胞代謝水平的高低,有些細(xì)胞在***處理后,可能活細(xì)胞數(shù)不變,但是代謝率低了以后,細(xì)胞呼吸減弱,NAD+產(chǎn)生減少,測(cè)出的Formazan也會(huì)減少,所以此時(shí)怎么算呢(此時(shí)我就比較懷戀中性紅了)?當(dāng)然也有解決的辦法,下期給大家介紹。因此可利用這個(gè)原理進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,在吸光度為450時(shí)檢測(cè)讀數(shù)。顏色也會(huì)越深 天津cck8結(jié)果怎么算CCK-8用途:***篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、**藥敏試驗(yàn).

培養(yǎng)基對(duì)CCK8測(cè)定的影響:不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,(主要是氨基酸的成分及糖含量),會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差,因此所用培養(yǎng)基要一致,不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93;1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下,會(huì)增加空白吸收,但不影響測(cè)定,扣除空白吸收即可,可見(jiàn)空白孔非常重要,所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照。另外,血清不影響測(cè)定,所以我用CCK-8來(lái)測(cè)定病毒對(duì)細(xì)胞活性的影響或者某個(gè)***對(duì)病毒復(fù)制的影響時(shí),我都小心翼翼的測(cè)很多個(gè)時(shí)間點(diǎn),說(shuō)實(shí)話,效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。

CellCountingKit-8(簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8)試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】。它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazandye)。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。換液的意思是將cck8加在培養(yǎng)基中以換液的形式加在孔板中避免氣泡產(chǎn)生。

CCK8的優(yōu)點(diǎn):方法方便,不用洗滌細(xì)胞,不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑;CCK-8快速檢測(cè);CCK-8檢測(cè)靈敏度高,細(xì)胞密度低也可以檢測(cè);CCK-8的重復(fù)性?xún)?yōu)于MTT法;CCK-8對(duì)細(xì)胞的毒性很??;CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中是1瓶溶液,不需要現(xiàn)用現(xiàn)配,即開(kāi)即用。CCK8的缺點(diǎn):相比于與MTT法,CCK8的價(jià)格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。用途:***篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、**藥敏試驗(yàn)?;瘜W(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).浙江cck8軟件

用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。上海dojindo cck8 說(shuō)明書(shū)

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定,常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測(cè)。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果。所以,***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。MTT實(shí)驗(yàn)操作1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,設(shè)置對(duì)照組(細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基)、實(shí)驗(yàn)組和空白組(無(wú)血清培養(yǎng)基),可以采用如下圖的排版方式:2、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中,每孔加入細(xì)胞懸液100ul上海dojindo cck8 說(shuō)明書(shū)