CCK-8沒有具體規(guī)定反應(yīng)時間的長短，以具體反映比較好顯色的時間為主。因為不同的細(xì)胞反應(yīng)時間、顯色標(biāo)準(zhǔn)都不一樣，所以一定要設(shè)置預(yù)實驗。預(yù)實驗中，可以先做幾個孔摸索一下接種數(shù)量和培養(yǎng)時間。3、懸浮細(xì)胞比貼壁細(xì)胞難顯色。在加入CCK-8培養(yǎng)后，可每隔一小時觀測一下顏色的變化情況，或者之間用酶標(biāo)儀檢測更為準(zhǔn)確。4、CCK8作用時間越長，OD值就越大，所以對于作用時間也不是越長久越好，要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求檢測孔內(nèi)不能有氣泡。靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好.江蘇cck8英文說明書
CCK-8盒子的選購還記得***次做CCK-8的實驗時研究生二年級的時候，當(dāng)時用的***個盒子是Sigma的，當(dāng)時的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，還不是現(xiàn)在的Millipore-Sigma。那個盒子給了我莫大的鼓勵，因為在那之前做分子克隆一直都不是很順利。這個盒子是我的碩士老板從美國帶回來的，品質(zhì)有保證，***的結(jié)果也是很好的。后面在做CCK-8的實驗時，我們在有選擇的情況下都會買sigma，下圖2是sigma官網(wǎng)的截圖。其實也不貴，只是到貨時間太慢。上海cck8實驗?zāi)康臒o需放射性同位素和有機(jī)溶劑，對細(xì)胞毒性低.
細(xì)胞增殖-毒性檢測1.在96孔板中配制100ml的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(在37℃，5%CO2的條件下)。2.向培養(yǎng)板加入10ml不同濃度的待測物質(zhì)。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間(例如:6,12,24或48小時)。4.向每孔加入10mlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數(shù))。5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。6.用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。7.如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉***的影響。當(dāng)然***影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。
切記一定要使用無血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，一是可以排除血清對細(xì)胞生長的影響；二是血清的存在會對吸光度的測量產(chǎn)生影響。以上是MTT比色法的介紹，MTT比色法因為涉及到吸出培養(yǎng)基溶解沉淀的操作，所以更適用于貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞比較好選用CCK8檢測細(xì)胞增殖，下面給大家介紹一下CCK8操作的注意事項。CCK8實驗操作CCK8的優(yōu)勢在于對細(xì)胞沒有毒性，可以直接加入細(xì)胞中長時間孵育，而不用考慮試劑本身對細(xì)胞帶來的影響。向各孔中加入10ul的CCK-8檢測溶液。如若檢測的細(xì)胞增殖或毒性試驗，需在此之前加入作用***培養(yǎng)適當(dāng)時間，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8檢測液。CCK-8用途：***篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、**藥敏試驗.
培養(yǎng)板對CCK8測定的影響：不同公司的培養(yǎng)板，以及培養(yǎng)板是否經(jīng)過處理對讀數(shù)都有一定的影響。所以前后實驗要一致。另外在培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)板**外一圈的孔容易干燥揮發(fā)，從而能導(dǎo)致培養(yǎng)基的體積不一樣，增加誤差。如果有可能，**外一圈的孔只加高壓滅菌的PBS或ddH2O。另外，注意CCK-8不要貼在板壁上。一定要注意是否是***有問題。解決的方案就是可以在測定CCK-8的讀數(shù)前，換個細(xì)胞液，再測定。這樣會有一定的影響，但是影響的是所有的，所以均一性還算比較好。CCK8細(xì)胞增值檢測實驗簡介.浙江cck8軟件
CCK8系列簡稱終于來了.江蘇cck8英文說明書
統(tǒng)一鋪好后，待細(xì)胞完全沉淀下來后，在顯微鏡下觀察各實驗組的細(xì)胞密度，如果密度不均勻，則固定一組，微調(diào)其他組細(xì)胞的量再次鋪板（如：發(fā)現(xiàn)NC組細(xì)胞較多，降低細(xì)胞量再次鋪板），放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4.從鋪板后第二天開始，每孔加入10-20μlCCK-8溶液，如果每孔的培養(yǎng)基為100μl，則加入10μlCCK-8溶液，如果每孔的培養(yǎng)基為200μl，則加入20μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。用加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。江蘇cck8英文說明書
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