上海昆蟲細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑分裝

來源： 發(fā)布時(shí)間：2022-04-03

美國Polysciences公司是一家成立于1961年，致力于特殊技精細(xì)化學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品，單/多聚體等產(chǎn)品的研發(fā)供應(yīng)，所提供的產(chǎn)品服務(wù)于組織學(xué)（顯微技術(shù)）、生物技術(shù)、電子技術(shù)、護(hù)理及制藥工程等多個(gè)領(lǐng)域。起初為電子顯微鏡提供納米級(jí)樣本制備方案，幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域。隨后，開拓了在病理（組織研究）應(yīng)用產(chǎn)品，使組織除了石蠟包埋外，還能夠包埋在塑料塊中；開發(fā)染料和染色劑，以實(shí)現(xiàn)更好的樣品觀測(cè)方式。與****合作，開發(fā)了用于診斷試劑盒應(yīng)的聚合物微球。與美國國家**中心合作，開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品，并用于紫杉醇的初步臨床試驗(yàn)。繼而開發(fā)出超順磁珠，用于DNA、蛋白質(zhì)和肽的研究。質(zhì)粒細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟是什么?上海昆蟲細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑分裝

轉(zhuǎn)染 48 小時(shí)后，使用尼康熒光顯微鏡 GFP 熒光進(jìn)行成像（左側(cè)四幅圖），A：LipoD293； B：293fectin；C：Xfect 和 D：Fugene 6.  帶有 6xHis 標(biāo)記的 GFP 熒光蛋白使用 Ni-NTA 親和柱技術(shù)實(shí)現(xiàn)分離。5 微升洗脫液載入 SDS-PAGE 凝膠電泳分離并進(jìn)行 Coomassie 亮藍(lán)染色（右上圖 E），道 1 為 LipoD293293、道 2 為標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子、道 3 為 Xfect、道 4 為 293fectin 和道 5 為 Fugene 6。這四種轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生蛋白質(zhì)的效率被進(jìn)一步定量（見右下圖 F）。產(chǎn)生慢***的比較

通過 LipoD293? 試劑（升級(jí)版）和 Lipofectamine LTX（LTX）試劑將三個(gè) cDNAs 共轉(zhuǎn)染進(jìn) 293T 細(xì)胞。一個(gè) GFP 載體，pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用來測(cè)定慢***的滴度。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 細(xì)胞，其次是分別添加不同量的慢定都上清液，1 微升（上圖）和 10 微升（下圖）。 陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑選購誰來拯救我的細(xì)胞之QIAGEN轉(zhuǎn)染試劑.

確定希望輸送的運(yùn)載物

（如DNA、RNA或蛋白質(zhì)）

根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)類型，我們可能需要將不同的運(yùn)載物輸送到細(xì)胞內(nèi)部，包括**常見的DNA，用于基因編輯的siRNA，能夠更快表達(dá)蛋白的mRNA，CRISPR-Cas9甚至是體內(nèi)轉(zhuǎn)染。正確的了解您希望輸送的運(yùn)載物是選擇可靠轉(zhuǎn)染產(chǎn)品的第一步。

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希望轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型

轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型可簡單分為兩大類，連續(xù)細(xì)胞系和原代細(xì)胞。

連續(xù)細(xì)胞系具有無限增殖的潛能，通常要比原代或有限細(xì)胞更易處理。但由于此類細(xì)胞經(jīng)歷過基因改變而變得具有無限增殖能力，它們?cè)谂囵B(yǎng)過程中的表現(xiàn)可能無法必然地反映體內(nèi)狀態(tài)。

原代細(xì)胞直接分離自組織并在適當(dāng)條件下增殖,因此，它們的形態(tài)學(xué)和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似。但相對(duì)于連續(xù)細(xì)胞系，它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過***次傳代培養(yǎng)之后，原代培養(yǎng)物變成了一種細(xì)胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細(xì)胞系具有有限的壽命（即它們是有限細(xì)胞系），且隨著傳代的進(jìn)行，具有比較高的生長能力的細(xì)胞逐漸占據(jù)支配地位，從而造成了細(xì)胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對(duì)來說，這一類細(xì)胞要比原代細(xì)胞使用起來更為方便，尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代。臨床級(jí)******毒載體生產(chǎn)必備轉(zhuǎn)染試劑..

產(chǎn)生慢***的比較

通過 LipoD293? 試劑（升級(jí)版）和 Lipofectamine LTX（LTX）試劑將三個(gè) cDNAs 共轉(zhuǎn)染進(jìn) 293T 細(xì)胞。一個(gè) GFP 載體，pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用來測(cè)定慢***的滴度。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 細(xì)胞，其次是分別添加不同量的慢定都上清液，1 微升（上圖）和 10 微升（下圖）。

5 天后，細(xì)胞通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)。右上角的數(shù)字表明轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞的百分比來測(cè)定慢***的滴度。由 LipoD293? and LTX 產(chǎn)生的慢***的滴度被量化，分為是 8x10^6 和 3x10^6 tu/ml 。 驚艷登場(chǎng)!臨床級(jí)載體生產(chǎn)必備轉(zhuǎn)染試劑。roche轉(zhuǎn)染試劑配方

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用LipoD293?體外DNA轉(zhuǎn)染試劑（Ver.II）（上圖）和受歡迎的品牌產(chǎn)品Invitrogen公司的293fectin?（下圖）轉(zhuǎn)染pEGFP-C1質(zhì)粒到HEK293細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，細(xì)胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成像圖（左側(cè)）和熒光成像圖（右側(cè)）。對(duì)懸浮HEK293F產(chǎn)生蛋白質(zhì)效率的比較30毫升的293F細(xì)胞分別使用LipoD293?試劑、293fectin、Xfect和Fugene6等轉(zhuǎn)染試劑按照生產(chǎn)商的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染步驟將pEGFP-6xHis質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞表達(dá)，用量為LipoD293?試劑，20微克，所有其他三種轉(zhuǎn)染試劑均使用30微克質(zhì)粒DNA。上海昆蟲細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑分裝