在難轉(zhuǎn)染細胞(原代大鼠動脈平滑肌細胞)轉(zhuǎn)染效率的比較
圖片由芝加哥大學肺和重癥護理系的 Nickolai Dulin 博士友情提供
制備大鼠的動脈平滑肌原代細胞并用使用 LipoD293?試劑(左圖)和 Lipofecatmine 2000(L2K, 右圖)分別將 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)制造商的轉(zhuǎn)染操作步轉(zhuǎn)染至該細胞。轉(zhuǎn)染 24 小時后,用尼康 Eclipse 2000 熒光顯微鏡檢測 GFP 熒光,以此來評價轉(zhuǎn)染效率。
對難轉(zhuǎn)染細胞 LNCap 細胞轉(zhuǎn)染效率的比較
圖片由羅斯威爾公園**研究所(Roswell Cancer Institute)的 Lyn Gao 博士友情提供
研發(fā)合成的針對siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的轉(zhuǎn)染試劑。廣東12孔板轉(zhuǎn)染試劑用量
轉(zhuǎn)染 48 小時后,使用尼康熒光顯微鏡 GFP 熒光進行成像(左側(cè)四幅圖),A:LipoD293; B:293fectin;C:Xfect 和 D:Fugene 6. 帶有 6xHis 標記的 GFP 熒光蛋白使用 Ni-NTA 親和柱技術(shù)實現(xiàn)分離。5 微升洗脫液載入 SDS-PAGE 凝膠電泳分離并進行 Coomassie 亮藍染色(右上圖 E),道 1 為 LipoD293293、道 2 為標準蛋白分子、道 3 為 Xfect、道 4 為 293fectin 和道 5 為 Fugene 6。這四種轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生蛋白質(zhì)的效率被進一步定量(見右下圖 F)。產(chǎn)生慢***的比較
通過 LipoD293? 試劑(升級版)和 Lipofectamine LTX(LTX)試劑將三個 cDNAs 共轉(zhuǎn)染進 293T 細胞。一個 GFP 載體,pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用來測定慢***的滴度。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 細胞,其次是分別添加不同量的慢定都上清液,1 微升(上圖)和 10 微升(下圖)。 廣東pei液體轉(zhuǎn)染試劑用于siRNA的轉(zhuǎn)染試劑,還有通用型轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?.
細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學實驗室中**常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,物理轉(zhuǎn)染和化學轉(zhuǎn)染。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用***等微生物作為基因?qū)胼d體,以慢***、腺***和腺相關(guān)***等**常見,其侵染效率可以達到90%以上,但常因安全性等問題,很多實驗室對其敬而遠之。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因***,無論哪一種都需要特定的設(shè)備,且一分錢一分貨,性能好的價格也都很性感電轉(zhuǎn)化化學轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學研究中**常用的轉(zhuǎn)染方法,主要包括兩類:陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學分子與帶有負電荷的核酸通過正負電荷作用形成穩(wěn)定的復合物。
.在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。
高靈活應用, 同一試劑可用于siRNA和質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的基因沉默實驗。
細胞毒性低,結(jié)果相關(guān)性好,確保所觀察到的細胞效應是由轉(zhuǎn)染的siRNA而非轉(zhuǎn)染過程本身介導。
兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)染前后均無需換液(如無血清培養(yǎng)基)。
X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗。根據(jù)各試劑說明書建議的操作流程,或標準實驗方法,將100nM HPRT特異性siRNA轉(zhuǎn)染至4種細胞,通過LightCycler® h-HPRT Housekeeping Gene Set的熒光定量法評估基因沉默效率。結(jié)果顯示用羅氏這款試劑在四種細胞中轉(zhuǎn)染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異。 但相對于連續(xù)細胞系,它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。
細胞轉(zhuǎn)染過程:X-tremeGENE 9 DNA 轉(zhuǎn)染試劑 簡介:
X-tremeGENE 9 DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,經(jīng)0.2 μm濾膜過濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細胞分析的多種實驗。
優(yōu)勢:1.具有細胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細胞存活率高,生成可信任的生理學相關(guān)數(shù)據(jù)。
2.操作簡便、節(jié)省時間,只需對X-tremeGENE 9 DNA轉(zhuǎn)染試劑進行簡單稀釋,再與質(zhì)粒DNA共同孵育,即可直接向細胞添加反應混合物(有無血清均可)。
3.對于常用細胞無需進行費時費力的優(yōu)化工作。 轉(zhuǎn)染復合物制備完成; 混勻后室溫下孵育15-20分鐘,直接取10μL加入已鋪好細胞的孔中.北京dmrie-c轉(zhuǎn)染試劑
mRNA細胞&***轉(zhuǎn)染試劑來助力.廣東12孔板轉(zhuǎn)染試劑用量
簡介:
X-tremeGENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑,兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,可用于轉(zhuǎn)染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細胞系。
優(yōu)勢:
1.簡單易用的多組分混合試劑,無動物源性成分,室溫穩(wěn)定。
2.高轉(zhuǎn)染效率,對于原代細胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細胞系有高轉(zhuǎn)染效率。
3.使用細胞毒性低的試劑,結(jié)果相關(guān)性好.
圖2. X-tremeGENE HP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過X-tremeGENE HP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實驗后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細胞毒性遠高于X-tremeGENE HP,導致存活細胞量減少(圖片來源于網(wǎng)絡(luò)). 廣東12孔板轉(zhuǎn)染試劑用量