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總RNA提取試劑盒

Trizol是廣譜型總RNA提取試劑。實驗操作快速方便，顏色鮮明，便于分層。本試劑適用范圍較大，可以從動物單位、 植物材料、 各種微生物及培養(yǎng)細胞等樣品中提取總RNA。 該方法對少量的單位(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的單位(≥1g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在Trizol中被充分裂解的同時能夠比較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液會分成三層：上層無色水相、中間層和下層紅色有機相，RNA 分布在上清層中。收集上清層后，經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好，無蛋白和DNA污染，可用于各種分子生物學常規(guī)實驗，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、體外翻譯等。

Trizol 試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見許多介于7kb和15 kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分)，兩條優(yōu)勢核糖體~5 kb(28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之間 (tRNA, 5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。(注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳，28S的位置大約在2kb，18S大約在1kb的位置，不同濃度的凝膠位置變化較大。)

牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的.南通capricorn血清 封閉

解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。上海雞血清公司提供各種生長因子，如胰島素、氫化可的松、雌二醇、睪酮、孕酮.

何謂熱滅活

一般是以56℃，30分鐘來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補體去活化，而補體所參與的反應有:溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化。

有必要做熱滅活嗎?

實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會的增多，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察，像是 "小黑點"，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

購買的時候注意詢問廠家是否是已滅***清。

T細胞增殖試驗類型  (1) 形態(tài)法：其原則是將外周血液或分離的單個細胞與適量的植物血凝素(PHA)混合，置37℃培養(yǎng)72h，取培養(yǎng)細胞作涂片染色鏡檢。據(jù)細胞的大小、核與胞漿的比例、胞漿的染色性和核結(jié)構(gòu)以及有無核仁等特征，分別計數(shù)淋巴母細胞、過渡性母細胞和核有絲分裂相以及成熟的小淋巴細胞，以**者為轉(zhuǎn)化細胞，每份標本計數(shù)200個細胞，計算轉(zhuǎn)化率。   (2) 核素法：絕大多數(shù)外周血T細胞通產(chǎn)處于細胞周期的G0期，受特異性抗原或促有絲分裂原后，從G0期進入G1期，開始合成蛋白質(zhì)、RNA和DNA前體物質(zhì)等，為DNA復制準備物質(zhì)基礎(chǔ)，然后進入S期，細胞合成DNA量倍增，此時若在培養(yǎng)液中加入3H標記的TdR，后者摻入新合成的DNA中，據(jù)摻入的多少推測細胞增殖程度。血清還含有一些微量元素和離子，它們在代謝穩(wěn)定中起重要作用。

血清主要作用

●提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質(zhì)。

●提供和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)（氫化可的松）、類固醇（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。

●提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要的低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。

●提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。

●對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞，如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護細胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝中起重要作用，如SeO3,硒等 如需購買血清，歡迎咨詢上海儒安。上海胎牛血清公司

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無血清快速細胞凍存液產(chǎn)品簡介：  無血清快速細胞凍存液，是一種新型開發(fā)的快速凍存細胞的保護液，不含動物來源的血清成分，能夠有效提高細胞凍存活率和復蘇活力，減少各類霉菌和支原體等的污染，確保凍存細胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細胞的凍存，也適用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞的凍存。  產(chǎn)品特色：  1.即用型細胞凍存液  2.無動物來源血清成分，化學成分明確。  3.快速冷凍，可直接置于-80℃冰箱冷凍，長期保存，不需要程序性降溫。  4.細胞存活率和活力高，批次性差異小。南通capricorn血清 封閉