湖北亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學質(zhì)譜鑒定

質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾：相對于蛋白質(zhì)印跡等技術(shù)，質(zhì)譜技術(shù)能更有效的對蛋白質(zhì)的翻譯后修飾進行分析，且可以對常規(guī)的Western blot 翻譯后修飾蛋白鑒定進行補充。質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾一般使用自下而上的基于肽段的方法。但是自下而上的質(zhì)譜方法無法保證可以完全識別目的蛋白的特定翻譯后修飾，因為質(zhì)譜是通過蛋白質(zhì)序列內(nèi)的多個肽段來鑒定的，這很大程度上降低了翻譯后修飾肽段被識別的機會。一種提高質(zhì)譜儀檢測到修飾肽段數(shù)量的策略是使用PTM親和試劑進行肽段富集，而不是使用PTM親和試劑進行蛋白富集，這將減少富集的未修飾肽段的數(shù)量。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性。湖北亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學質(zhì)譜鑒定

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學：血漿蛋白糖基化修飾分析：蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程，是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。分泌的細胞外蛋白常被糖基化，糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血漿中的蛋白質(zhì)包括維持機體正常生理狀態(tài)的蛋白質(zhì)和機體分泌、滲漏、脫落的蛋白質(zhì)，其中不乏存在一些糖基化蛋白質(zhì)。而蛋白質(zhì)糖基化修飾不只影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象、生物活性、運輸和定位，而且在分子識別、細胞通信、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等特定生物過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。因此對血漿蛋白糖基化進行分析，有助于研究血漿蛋白的生理功能等。湖北亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時其分子質(zhì)量會發(fā)生響應(yīng)的改變，通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量。

蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學定量分析：1. SILAC細胞標記，組織/細胞破碎，提取、提純目的蛋白質(zhì)（基于SILAC的乙?；揎椊M學定量）。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對多肽片段進行iTRAQ標記（基于iTRAQ的乙酰化修飾組學定量）。4. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙酰化修飾肽段進行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙酰化肽段進行序列分析。6. 數(shù)據(jù)分析，比對不同樣本中蛋白乙?；揎椝讲町悾Ξa(chǎn)生變化的生物學意義進行解釋。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點分析時應(yīng)該注意些什么問題？覆蓋率：覆蓋率越高，檢測和鑒定含有修飾基團的肽幾率就越大。修飾位點的占有率：被修飾的蛋白質(zhì)的百分比低，則檢測到修飾肽的機會會隨之減少。如果百分比較高（> 30％），則有助于識別修飾位點。棕櫚酰化蛋白修飾質(zhì)譜鑒定方法：S-棕櫚?；闹饕δ苁谴龠M蛋白質(zhì)與細胞膜的結(jié)合。蛋白質(zhì)可以由一個棕櫚?；M成，也可以與更多棕櫚基或與其他脂質(zhì)，如豆蔻?；Ｓ捎趯-棕櫚?；鞍追治鋈匀痪哂刑魬?zhàn)性，由于S-棕櫚酰化修飾蛋白亞水平以及疏水性和潛在不穩(wěn)定的硫代質(zhì)鏈的S-脂?；摹，F(xiàn)在常用的幾種方法可以捕獲S-脂?；鞍滓约皩δ繕诵揎椀鞍走M行捕獲。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學：磷酸化蛋白質(zhì)是由蛋白激酶將ATP或GTP分子上的磷酸基團轉(zhuǎn)移到底物蛋白特定的氨基酸側(cè)鏈上形成的。蛋白質(zhì)磷酸化是一種可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。在哺乳動物的細胞生命周期中，至少有三分之一的蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化修飾。磷酸化修飾參與許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和細胞代謝過程，且許多已知的疾病也與蛋白質(zhì)的異常磷酸化有關(guān)。因此，對磷酸化蛋白質(zhì)組進行定量研究，尋找差異表達的磷酸化蛋白質(zhì)，有助于發(fā)現(xiàn)疾病的生物標志物和尋找新的具有診療潛力的藥物靶標。蛋白質(zhì)糖基化是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。湖北亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學質(zhì)譜鑒定

蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價修飾方式之一。湖北亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學質(zhì)譜鑒定

翻譯后修飾蛋白組分析：蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個細胞過程的重要方式，幾乎在每個細胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學計量和豐度存在，這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。因此，要在蛋白質(zhì)組學的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白，純化方法是必要的，以分離修飾蛋白和肽段，然后再進行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進行，可以對翻譯后修飾蛋白組進行定性和定量研究。湖北亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學質(zhì)譜鑒定

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