南京動(dòng)物靶向代謝組學(xué)應(yīng)用

靶向代謝組學(xué)的一般分析流程為：1. 數(shù)據(jù)采集 第1步是得到標(biāo)準(zhǔn)品。如果無法從市場(chǎng)上買到，就必須定制合成。然后通過優(yōu)化產(chǎn)物離子碰撞能量以得到的信號(hào)，再通過測(cè)定三重串聯(lián)四極桿測(cè)定代謝物的 MRM 躍遷值。2. 定量 接下來用定量分析軟件對(duì) MRM 數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，得到報(bào)告。3. 統(tǒng)計(jì)分析和解釋 將定量報(bào)告輸入統(tǒng)計(jì)分析軟件包，用統(tǒng)計(jì)工具，如ANOVA，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。靶向分析：在基于質(zhì)譜的代謝組學(xué)分析中，要意識(shí)到離子強(qiáng)度和色譜保留時(shí)間都會(huì)隨著時(shí)間的推移而產(chǎn)生漂移，所以在實(shí)驗(yàn)中，要按隨機(jī)順序?qū)颖具M(jìn)行檢測(cè)，且數(shù)據(jù)需要在同天同一批次進(jìn)行采集，以減少誤差。非靶向代謝組學(xué)（Untargeted metabolomics）即非目標(biāo)代謝組學(xué)或發(fā)現(xiàn)代謝組學(xué)。南京動(dòng)物靶向代謝組學(xué)應(yīng)用

靶向代謝組學(xué)分析成功的關(guān)鍵因素是準(zhǔn)確度、高通量和可靠性。靶向代謝組學(xué)鑒定一般采用 GC/MS 系統(tǒng)的選擇性離子監(jiān)測(cè) (SIM)，或在三重串聯(lián)四極桿 LC/MS 系統(tǒng)上用多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè) (MRM) 進(jìn)行靶向 MS/MS。SIM 比全掃描圖譜采集具有更高的靈敏度，在單四極桿質(zhì)譜中,這種靈敏度增強(qiáng)的原因是延長了所選擇離子的采集時(shí)間。因?yàn)楸O(jiān)測(cè)的是一個(gè)很小的質(zhì)量窗口，所以質(zhì)量色譜圖只表示對(duì)極為特定質(zhì)量的檢測(cè)。在大多數(shù)情況下，靈敏度可以提高 10 倍。MRM 是進(jìn)行質(zhì)譜定量的選擇方法，與 SIM 相比更為靈敏、更加特異?？梢援a(chǎn)生獨(dú)特的碎片離子，可對(duì)非常復(fù)雜基質(zhì)中的目標(biāo)化合物進(jìn)行監(jiān)測(cè)和定量。河南GC-MS非靶向代謝組學(xué)分析靶向代謝組學(xué)著重對(duì)于設(shè)定好的目標(biāo)代謝物進(jìn)行定性、量檢測(cè)分析和研究。

靶向代謝組學(xué)：靶向代謝組學(xué)（Targeted Metabolomics）是代謝組學(xué)研究的重要組成部分，也是全代謝組研究的延伸與拓展。相對(duì)于全代謝組分析而言，靶向代謝組分析具有特異性強(qiáng)，檢測(cè)靈敏度高和定量準(zhǔn)確等幾個(gè)特點(diǎn)。通過對(duì)血液、尿液或其他體液以及組織中某一特定的代謝物的富集與準(zhǔn)確定量定性分析，一方面可以結(jié)合其它實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)揭示相關(guān)的分子生物學(xué)作用機(jī)制，另一方面，也可以為后續(xù)代謝分子標(biāo)志物的深入研究和開發(fā)利用提供有力支持。靶向代謝組學(xué)可以用于：驗(yàn)證有非靶向代謝組學(xué)實(shí)驗(yàn)提出的假說；進(jìn)行基于假說的探索性實(shí)驗(yàn)，針對(duì)特定代謝物，研究代謝模型。

藥物代謝和代謝組學(xué)區(qū)別：代謝組學(xué)與藥物代謝不同是它關(guān)注的對(duì)象不是外源性的藥物而是生物體本身就有的內(nèi)源性代謝物。這些代謝物是糖，脂肪，蛋白質(zhì)，核酸，膽汁酸等等代謝得到的。還有共生菌代謝的，是一個(gè)龐大的混合物。目的是通過樣本的對(duì)比，發(fā)現(xiàn)潛在標(biāo)志物，指導(dǎo)疾病早期診斷甚至基因水平的研究。而藥物代謝的目標(biāo)是只要只要追蹤到這種藥物分子在體內(nèi)變化就好，相當(dāng)具有靶向性，因此使用的技術(shù)手段就是LC-MS。檢測(cè)藥物的中間體，和具體的藥效，藥代動(dòng)的效應(yīng)。代謝組學(xué)關(guān)注的對(duì)象是分子量在1000以下的小分子化合物。

代謝組學(xué)樣品收集方法及所需樣本量是什么？(1) 血清樣品： 避免反復(fù)凍融。血液收集在離心管中靜置30分鐘進(jìn)行凝血。8000rpm離心10分鐘，取上清分裝到凍存管中，放置液氮中或-80度凍存；單個(gè)樣本要求體積為50μL。(2) 尿液樣品：臨床樣本請(qǐng)全部取清晨第1次尿液。尿液直接分裝到離心管中，8000rpm離心10分鐘，取上清分裝到凍存管中，放置液氮中或-80度凍存，-80度凍存；單個(gè)樣本要求體積為100μL。(3) 其他樣本收集辦法請(qǐng)咨詢譜領(lǐng)工作人員。代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)之后新近發(fā)展起來的一門學(xué)科。河南GC-MS非靶向代謝組學(xué)分析

較低的費(fèi)用，是促使代謝組學(xué)在臨床上易于接受的另一個(gè)原因。南京動(dòng)物靶向代謝組學(xué)應(yīng)用

代謝組學(xué)的研究對(duì)象與層次有哪些？一般來說，代謝組學(xué)關(guān)注的對(duì)象是分子量在1000以下的小分子化合物。根據(jù)研究的對(duì)象和目的不同，科學(xué)家將生物體系的代謝產(chǎn)物分析分為4個(gè)層次：代謝物靶標(biāo)分析：某一個(gè)或幾個(gè)特定組分的定性和定量分析，如某一類結(jié)構(gòu)、性質(zhì)相關(guān)的化合物（氨基酸、有機(jī)酸、順二醇類）或者某一代謝途徑的所有中間產(chǎn)物或多條代謝途徑的標(biāo)志性組分。代謝物指紋分析：同時(shí)對(duì)多個(gè)代謝物進(jìn)行分析，不分離鑒定具體單一組分。代謝輪廓分析：限定條件下對(duì)生物體內(nèi)特定組織內(nèi)的代謝產(chǎn)物的快速定性和半定量分析。代謝組分析：對(duì)生物體或體內(nèi)某一特定組織所包含的所有代謝物的定量分析，并研究該代謝物組在外界干預(yù)或病理生理?xiàng)l件下的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。南京動(dòng)物靶向代謝組學(xué)應(yīng)用

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