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蛋白翻譯后修飾位點(diǎn)鑒定:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-Translational Modifications, PTMs)幾乎參與了細(xì)胞所有正常生命活動(dòng)的過(guò)程,并發(fā)揮十分重要的調(diào)控作用。蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)能夠影響蛋白的多種屬性,包括蛋白質(zhì)折疊、活性以及之后的功能,對(duì)于蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)及研究對(duì)闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。技術(shù)特點(diǎn):時(shí)間快,周期短;識(shí)別位點(diǎn)準(zhǔn)確,采用高分辨率質(zhì)譜技術(shù)可以準(zhǔn)確定位到發(fā)生修飾的氨基酸位點(diǎn)。適用范圍:已知蛋白序列;明確翻譯后修飾的類(lèi)型。泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有些什么?南京蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)有哪些類(lèi)型
蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)技術(shù)怎么確定位點(diǎn)?蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)酶解后利用凝集素(lectin)富集N-糖基化肽段,然后用N-糖酰胺酶(PNGase)在H218O中切除連接在天冬酰胺殘基(Asn)上的糖鏈。該處理致使Asn分子量增加2.9890Da。之后用高精度LC-MS質(zhì)譜儀檢測(cè)脫糖后的肽段,并通過(guò)MASCOT軟件檢索數(shù)據(jù)庫(kù),確認(rèn)脫糖后分子量與其理論分子量的變化以及糖基化修飾肽段的序列,從而確定該蛋白質(zhì)的N-糖基化位點(diǎn)。琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點(diǎn):采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好。四川亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)一般流程蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)有什么重要的作用呢?
蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問(wèn)題?覆蓋率:覆蓋率越高,檢測(cè)和鑒定含有修飾基團(tuán)的肽幾率就越大。修飾位點(diǎn)的占有率:被修飾的蛋白質(zhì)的百分比低,則檢測(cè)到修飾肽的機(jī)會(huì)會(huì)隨之減少。如果百分比較高(> 30%),則有助于識(shí)別修飾位點(diǎn)。棕櫚?;鞍仔揎椯|(zhì)譜鑒定方法:S-棕櫚酰化的主要功能是促進(jìn)蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜的結(jié)合。蛋白質(zhì)可以由一個(gè)棕櫚?;M成,也可以與更多棕櫚基或與其他脂質(zhì),如豆蔻?;S捎趯?duì)S-棕櫚?;鞍追治鋈匀痪哂刑魬?zhàn)性,由于S-棕櫚?;揎椀鞍讈喫揭约笆杷院蜐撛诓环€(wěn)定的硫代質(zhì)鏈的S-脂?;摹?/p>
定量磷酸化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學(xué):蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化是重要的翻譯后修飾,它與信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期、生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)理等諸多生物學(xué)問(wèn)題有密切關(guān)系。研究蛋白質(zhì)磷酸化對(duì)闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義。將磷酸化肽段TiO2富集技術(shù)和iTRAQ/TMT/Lable free技術(shù)相結(jié)合,實(shí)現(xiàn)對(duì)磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)的定量研究。技術(shù)原理:在磷酸化肽段富集前先進(jìn)行 iTRAQ/TMT 標(biāo)記,然后通過(guò) TiO2 富集方法獲得高純度的磷酸化肽段,之后結(jié)合高分辨率質(zhì)譜完成對(duì)樣品的定量分析。蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)能夠影響蛋白的多種屬性,包括蛋白質(zhì)折疊、活性以及之后的功能。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對(duì)酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過(guò)高質(zhì)量的修飾類(lèi)抗體和生物材料對(duì)修飾肽段進(jìn)行富集,之后上樣至液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析,通過(guò)相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)檢索匹配,一次可鑒定成百上千個(gè)修飾位點(diǎn)。蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)分析樣品經(jīng)酶解后,用 TiO2 微球?qū)α姿峄亩芜M(jìn)行富集,富集后的產(chǎn)物由質(zhì)譜分析,并通過(guò)軟件完成數(shù)據(jù)檢索。琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點(diǎn):采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好。蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)技術(shù)怎么確定位點(diǎn)?杭州丙二?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)領(lǐng)域
乙酰化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù)采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對(duì)蛋白乙?;b定的影響。南京蛋白質(zhì)丙酰化修飾組學(xué)有哪些類(lèi)型
蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略:早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細(xì)胞生長(zhǎng)的不同時(shí)期,或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而,許多生命過(guò)程不僅受蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度控制,還受時(shí)空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此,揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復(fù)雜性和多樣的生物學(xué)功能的前提。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見(jiàn)的修飾類(lèi)型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來(lái)了很大的挑戰(zhàn)?;诜g后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對(duì)豐度低的特點(diǎn),主要利用凝膠、生物質(zhì)譜和生物信息學(xué)工具對(duì)其進(jìn)行研究。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類(lèi)似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法,包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)分析。南京蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)有哪些類(lèi)型