靶向代謝組學(xué):靶向代謝組學(xué)分析主要是以標(biāo)準(zhǔn)品為參照,對(duì)特定的代謝物群進(jìn)行有針對(duì)性地、特異性地檢測(cè)與分析。通常采用的技術(shù)方案包括常規(guī)的液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)分析技術(shù)和選擇性反應(yīng)/多反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)(MRM/ SRM)。常規(guī)分析法首先利用LC-MS的方法對(duì)待分析樣本進(jìn)行大規(guī)模代謝組分析,然后通過(guò)與相同分析條件下標(biāo)準(zhǔn)品的分析結(jié)果進(jìn)行比對(duì),實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本內(nèi)目標(biāo)代謝群的定性和定量分析。MRM/SRM技術(shù)是基于已知或假定的反應(yīng)離子信息,有針對(duì)性地選擇數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)譜信號(hào)采集,對(duì)符合規(guī)則的離子對(duì)進(jìn)行信號(hào)記錄,去除不符合規(guī)則離子信號(hào)的干擾。定量過(guò)程中,該技術(shù)首先篩選到目標(biāo)代謝物特異性的母離子,然后選擇性地對(duì)這些母離子進(jìn)行碰撞誘導(dǎo),去除其他離子的干擾,只對(duì)選定的特異MS/MS2離子進(jìn)行質(zhì)譜信號(hào)的采集,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)代謝分子更為特異、靈敏、準(zhǔn)確的分析。代謝組學(xué)主要技術(shù)手段是核磁共振。北京GC-MS非靶向代謝組學(xué)定性分析
LC-MS非靶向代謝組學(xué):LC-MS非靶向代謝組學(xué)通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)方法檢測(cè)生物體受外界刺激前后體內(nèi)大多數(shù)小分子代謝物的動(dòng)態(tài)變化,重點(diǎn)尋找在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中有明顯變化的代謝物,進(jìn)而研究這些代謝物與生理病理變化的相關(guān)關(guān)系,其研究對(duì)象大都是分子量1500Da以?xún)?nèi)的小分子物質(zhì)。LC-MS非靶向代謝組學(xué)技術(shù)優(yōu)勢(shì):1、較高的靈敏度、分辨率;2、較寬的動(dòng)態(tài)范圍;3、適合于生物樣本中復(fù)雜代謝產(chǎn)物的檢測(cè)和潛在標(biāo)志物的鑒定;4、適合對(duì)標(biāo)本中未知代謝物的探索研究。四川個(gè)性化定制靶向代謝組學(xué)分析方法代謝組學(xué)的研究介于基因、蛋白質(zhì)和細(xì)胞、組織之間。
代謝組學(xué)的研究領(lǐng)域有哪些?1、疾病機(jī)制研究;2、疾病診斷與防治;3、新藥篩選和開(kāi)發(fā);4、藥物作用機(jī)制的研究;5、藥物毒性評(píng)價(jià);6、植物的細(xì)胞代謝組學(xué)研究;7、微生物代謝組學(xué)研究。代謝組學(xué)的研究方法:代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類(lèi)似,通常有兩種方法。一種方法稱(chēng)作代謝物指紋分析,采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)的方法,比較不同血樣中各自的代謝產(chǎn)物以確定其中所有的代謝產(chǎn)物。從本質(zhì)上來(lái)說(shuō),代謝指紋分析涉及比較不同個(gè)體中代謝產(chǎn)物的質(zhì)譜峰,了解不同化合物的結(jié)構(gòu),建立一套完備的識(shí)別這些不同化合物特征的分析方法。另一種方法是代謝輪廓分析,研究人員假定了一條特定的代謝途徑,并對(duì)此進(jìn)行更深入的研究。
代謝組學(xué)樣品收集方法及所需樣本量是什么?根據(jù)不同的檢測(cè)要求,需要配合不同的樣本量和樣本采集方法,常規(guī)的方法和單個(gè)樣本量如下:(1) 微生物和細(xì)胞樣本:細(xì)胞迅速猝滅細(xì)胞并冷凍保存;單個(gè)樣本細(xì)胞數(shù)量要求10^6。(2) 動(dòng)物體液(如尿、血、組織、唾液):采樣后要迅速預(yù)處理,如加入抗凝血?jiǎng)?、防腐劑,并立即冷凍處理?80 ℃);單個(gè)樣本要求體積為10μL。(3) 植物樣本:采集后迅速冷凍(液氮),然后轉(zhuǎn)入-80℃保存,單個(gè)樣本要求質(zhì)量為50mg。代謝組學(xué)可以檢測(cè)的樣品種類(lèi)有哪些呢?
代謝組學(xué)究竟是一門(mén)什么樣的研究方向?首先定義什么是代謝組學(xué)。簡(jiǎn)單的說(shuō)就是研究生物體對(duì)內(nèi)外刺激的整體代謝應(yīng)答規(guī)律。那么為什么代謝組學(xué)是基因組,轉(zhuǎn)錄組,蛋白質(zhì)組的下游。我們研究它到底有什么意義。中心法則告訴我們了遺傳信息的流向,的執(zhí)行者蛋白質(zhì)中很多酶參與了體內(nèi)的代謝過(guò)程。基因測(cè)序數(shù)量太大,而且基因水平解釋問(wèn)題往往很吃力。因?yàn)榛虻恼{(diào)控和生物學(xué)事件之間隔了一個(gè)很漫長(zhǎng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。蛋白同理,一是蛋白種類(lèi)巨大,二是蛋白組學(xué)發(fā)展進(jìn)入瓶頸;發(fā)展代謝組是因?yàn)榇x物種類(lèi)只有不到1w種,建立它的差異分析更加簡(jiǎn)單,同時(shí)在價(jià)格等方面更有推廣的意義。代謝組學(xué)的研究處于生物信息流的中游。四川個(gè)性化定制靶向代謝組學(xué)分析方法
代謝組學(xué)主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物(MW<1000)。北京GC-MS非靶向代謝組學(xué)定性分析
非靶向代謝組學(xué)分析流程:1、代謝譜分析(也稱(chēng)為差異表達(dá)分析):在一組實(shí)驗(yàn)和對(duì)照樣品中,尋找豐度改變有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的感興趣代謝物;2、鑒定:進(jìn)行代謝譜分析后,測(cè)定這些代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu);3、解釋?zhuān)貉芯苛鞒痰慕Y(jié)尾的一步,解釋所發(fā)現(xiàn)的代謝物與生物過(guò)程或生物狀態(tài)之間的關(guān)聯(lián)。代謝組學(xué)主要是對(duì)生物體受到內(nèi)部(基因)或外部(飲食、環(huán)境等)刺激后所發(fā)生生物響應(yīng)進(jìn)行綜合分析的研究工具,代謝組學(xué)的研究按照研究目的的不同可分為靶向代謝組學(xué)和非靶向代謝組學(xué)。北京GC-MS非靶向代謝組學(xué)定性分析