河南蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)分析研究

翻譯后修飾蛋白組分析：蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTMs）是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTMs）通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯、乙酸酯、酰胺基或甲基等官能團(tuán)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性，并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過程中起著關(guān)鍵作用，如細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過程、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化、糖基化、泛素化、亞硝基化、甲基化、乙酰化、脂質(zhì)化和蛋白水解。因此，PTM的特征（包括修飾類別和修飾位點(diǎn)）在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要。蛋白質(zhì)的N-糖基化位點(diǎn)修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一。河南蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)分析研究

蛋白質(zhì)的甲基化修飾 ：蛋白質(zhì)的甲基化（methylation）是指將甲基酶促轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)的某個殘基上，通常是賴氨酸或精氨酸，也包括組氨酸、半胱氨酸和天冬酰胺等。蛋白質(zhì)的甲基化是一種普遍的修飾，在大鼠肝細(xì)胞核的總蛋白提取物中，大約2％的精氨酸殘基是二甲基化的。蛋白質(zhì)甲基化經(jīng)常與乙?；⒘?，因為它們都是常見的表觀遺傳修飾，經(jīng)常發(fā)生在組蛋白上。不過從化學(xué)反應(yīng)的角度來看，乙?；梢运阕饕环N短鏈脂酰化修飾，這里主要討論甲基化方面的問題。江蘇泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)是通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團(tuán)，可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)。

蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)技術(shù)服務(wù)：乙酰化修飾是體內(nèi)高度保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾，對細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著非常重要的作用。此外，還存在大量的非組蛋白乙酰化修飾參與了代謝通路及代謝酶活性的調(diào)節(jié)。乙?；揎椊M學(xué)技術(shù)服務(wù)采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙酰化鑒定的影響，再結(jié)合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙?；碾亩危瑥亩鴮崿F(xiàn)大規(guī)模乙?；蔫b定及定量。蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù)：泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外，泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位，調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動。

糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)：蛋白質(zhì)的糖基化具有異質(zhì)性。不同的糖鏈可以連接到同一位點(diǎn)上，不同位點(diǎn)可以連接到同一蛋白質(zhì)上的不同糖鏈上。糖基化的異質(zhì)性嚴(yán)重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質(zhì)，在電泳上會出現(xiàn)分散的條帶，導(dǎo)致信號分散。此外，對低豐度蛋白質(zhì)的識別性差導(dǎo)致糖蛋白在色譜圖中分離不佳，質(zhì)譜中有一簇分子量不準(zhǔn)確的分辨不清的峰。目前，蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術(shù)體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進(jìn)行分離和富集，消除糖基化的異質(zhì)性及其對質(zhì)譜的影響，標(biāo)記糖基化位點(diǎn)。從而實現(xiàn)高通量糖蛋白和糖基化位點(diǎn)的識別。常用的糖蛋白分離和富集技術(shù)有：a. 凝集素親和技術(shù)；b. 肼化學(xué)富集；c. 親水性相互作用色譜法；d. β-消除/邁克爾加成反應(yīng)。基于質(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點(diǎn)測定方法有：a. PNGase F酶法；b. Endo H酶法；c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析。

甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)原理：目前用于甲基化蛋白質(zhì)組分析的甲基化肽段富集抗體分為精氨酸甲基化（Me-R）抗體和賴氨酸甲基化（Me-K）抗體兩大類。根據(jù)氨基酸殘基上所含甲基化修飾基團(tuán)數(shù)量的不同，精氨酸甲基化（Me-R）抗體又包括：單甲基化精氨酸（MMA）抗體、非對稱二甲基化精氨酸（ADMA）抗體和對稱二甲基化精氨酸（SDMA）抗體；賴氨酸甲基化（Me-K）抗體又包括：賴氨酸單甲基化（K-Me）抗體、賴氨酸二甲基化（K-2Me）抗體和賴氨酸三甲基化（K-3Me）抗體。其中，Me-R的各類抗體需要單獨(dú)使用，而Me-K抗體可以混合使用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTMs）是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程。湖北蛋白質(zhì)氧化修飾組學(xué)主要方式

糖基化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學(xué)主要在復(fù)雜的多細(xì)胞或組織形成過程中起關(guān)鍵作用。河南蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)分析研究

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