蛋白組究竟研究原因:首先,由于翻譯調控和翻譯后調控的存在,RNA的表達量與實際對應蛋白質的含量相關性并不高,就簡單地測試了酵母中mRNA和對應蛋白質的定量相關性,結果是,低豐度蛋白與mRNA的相關性尤其低,而高豐度蛋白和其mRNA的相關性則高,經(jīng)過平均后r值只為0.4。蛋白質組學相關技術目前在一小部分]應用中具有獨特優(yōu)勢。蛋白組究竟研究的是什么呢?第1,蛋白質定性,或者說大規(guī)模檢測某些蛋白質是否存在于樣品當中;第2,蛋白質定量,也就是大規(guī)模檢測某些蛋白質的含量(包括一定含量與相對含量);第3,蛋白質翻譯后修飾,這些修飾主要包括磷酸化,泛素化,糖基化,乙?;鹊?,也包括對這些翻譯后修飾的定量研究。蛋白質組學研究對提高我國生物醫(yī)學原始創(chuàng)新能力、重大疾病防診治能力發(fā)展具有重大的戰(zhàn)略意義。南京TMT/iTRAQ標記定量蛋白質組學服務
什么樣本能做蛋白組學檢測?大概可以測到多少的蛋白種類?原則上只要能提取到蛋白,就可以做蛋白組檢測。樣本測到的蛋白種類跟數(shù)據(jù)庫和樣本本身蛋白濃度有關,一般數(shù)據(jù)庫越大,可以鑒定到的蛋白質數(shù)量越多。也與樣本的類型有關,通常,組織細胞相比于體液樣本,能夠鑒定到更多的蛋白。蛋白組學樣本寄送前是否需要精確計數(shù)或是稱量?不同樣本寄送會有不同的送樣要求,按照收集方法提供可以保證實驗用量充足。不需要精確計數(shù)或是稱量,項目開展前會進行蛋白濃度的測定,后續(xù)也是不同樣本等蛋白量處理、上機檢測,但是要保證每個樣本的寄樣量達到實驗要求。四川PRM靶向定量蛋白質組學檢測價格蛋白質組學技術的本質(從分析化學角度來看),就是對蛋白質的定性定量分析。
DIA 定量蛋白質組學技術優(yōu)點:采集所有離子及碎片圖譜,重現(xiàn)性好。基于碎片離子定量,選擇性好,可媲美 SPM/MRM。循環(huán)時間固定,掃描點數(shù)均勻,定量準確度高。高通量,能同時監(jiān)測所有目標蛋白。PRM 靶向定量蛋白組:平行反應監(jiān)測(PRM)是一種靶向檢測方法,能夠對目標蛋白、目標肽段進行選擇性檢測,從而實現(xiàn)對目標蛋白/肽段進行相對定量。技術優(yōu)點:不依賴抗體;特異性;結果準確、可靠;高通量。修飾蛋白質組學:利用 LC-MS/MS 結合數(shù)據(jù)庫檢索的方法,在搜庫時設置修飾搜庫參數(shù),實現(xiàn)對目標所有已知的修飾位點磷酸化、乙?;?、糖基化和泛素化進行鑒定。
蛋白質組研究內(nèi)容:1.蛋白質鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結合Western等技術,利用蛋白質芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術對蛋白質進行鑒定研究。2.翻譯后修飾:很多mRNA表達產(chǎn)生的蛋白質要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化,糖基化,酶原刺激等。翻譯后修飾是蛋白質調節(jié)功能的重要方式,因此對蛋白質翻譯后修飾的研究對闡明蛋白質的功能具有重要作用?;?受體結合分析。可以利用基因敲除和反義技術分析基因表達產(chǎn)物-蛋白質的功能。另外對蛋白質表達出來后在細胞內(nèi)的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質功能的了解。蛋白質組學研究的首要任務是建立獲取和分析蛋白質的常規(guī)、可靠、有效的技術。
PRM靶向定量蛋白質組學分析流程是怎樣的?要做PRM首先要明確目標蛋白(或多肽)是什么,設計和建立針對這些目標蛋白PRM質譜采集方法,然后對待測樣品進行PRM數(shù)據(jù)采集,將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導入分析軟件提取子離子信息進行定量。另外,如果配制已知濃度的標準肽段,用PRM額外做一個標準曲線,即可實現(xiàn)一定的定量。PRM靶向定量蛋白質組學技術能應用到哪些方面?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術來實現(xiàn)。具體說來,比如驗證定量蛋白質組學中某些蛋白的變化,多肽的相對和一定的定量,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對蛋白修飾位點的定量,想同時定量多個蛋白的情況等,都可以用PRM來做。DIA 定量蛋白質組學可以采集所有離子及碎片圖譜,重現(xiàn)性好。北京TMT/iTRAQ標記定量蛋白質組學鑒定
蛋白質組學研究不僅是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益。南京TMT/iTRAQ標記定量蛋白質組學服務
蛋白質組學常用技術:非靶向蛋白組學:蛋白質定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學。蛋白質組研究技術在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍。蛋白質組學主要以全蛋白組(組織、細胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學功能、作用機制、疾病診斷的標志物以及預測蛋白的上、下游變化關系。蛋白質組學可以克服核酸水平預測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。南京TMT/iTRAQ標記定量蛋白質組學服務