湖北外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜分析

轉(zhuǎn)錄組學(xué)的概念：轉(zhuǎn)錄組是指特定組織或細(xì)胞在某一發(fā)育階段或功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的匯合，包括蛋白質(zhì)編碼的信使RNA和非編碼RNA（rRNA、tRNA和其他ncRNAs），高通量測序技術(shù)也被稱為下一代測序（NGS）技術(shù)，推進(jìn)了基因組學(xué)的研究進(jìn)展。該項(xiàng)新技術(shù)除了研究靜態(tài)基因組，近年來也開始應(yīng)用于動態(tài)轉(zhuǎn)錄分析，由此衍生的技術(shù)稱為RNA序列分析（RNA-seq）隨著DNA基因芯片技術(shù)的快速發(fā)展，開創(chuàng)了這個病癥近十年的高通量轉(zhuǎn)錄組研究。RNA-Seq技術(shù)可以從轉(zhuǎn)錄水平檢測瘤中的改變基因。通過相關(guān)軟件分析，鑒定相關(guān)改變基因在瘤發(fā)生的發(fā)展中所起的作用。然后經(jīng)過刷選，進(jìn)一步挑選出相關(guān)靶基因進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，有望為瘤的基因醫(yī)治提供新的靶點(diǎn)。轉(zhuǎn)錄組學(xué)即一個活細(xì)胞所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和。湖北外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜分析

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)測試步驟：第1步就是把單個細(xì)胞分選出來。分選的方式也比較多，物理切割，酶消化，F(xiàn)ACS分選等。假如已經(jīng)分到了一個單細(xì)胞，跟常規(guī)的轉(zhuǎn)錄組步驟上是一樣的。下一步就是把單細(xì)胞里的RNA提取出來去建庫測序。但是一個細(xì)胞里的RNA含量是比較少的，難建庫成功。這個里面“量”的概念很有意思。比如說單細(xì)胞量少，需要特殊處理。因?yàn)閱渭?xì)胞里面RNA的量少，所以說整個富集的過程中會出現(xiàn)一部分基因在一個細(xì)胞里能檢測到，在另外一個細(xì)胞里面檢測不到，而每個細(xì)胞里面的檢測存在一個隨機(jī)性，同時(shí)單細(xì)胞測序深度比較低，所以說分析時(shí)相比于普通轉(zhuǎn)錄組有一些是需要特別注意，但整體的分析思路是類似的。廣東circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)費(fèi)用轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序樣品純度要求，OD值應(yīng)在1.8至2.2之間。

轉(zhuǎn)錄組學(xué)和基因組學(xué)目前有實(shí)用價(jià)值嗎?二者實(shí)用價(jià)值非常大，尤其是對有瘤的患者的醫(yī)治，簡直顛覆了傳統(tǒng)醫(yī)治的模式。轉(zhuǎn)錄組和基因組月在生物學(xué)研究中有著重要價(jià)值。例如研究某個基因功能的時(shí)候，可以構(gòu)建該基因的敲除或者過表達(dá)生物，然后對比野生型進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析看看該基因涉及什么表達(dá)網(wǎng)絡(luò)。此外在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用也很大，例如在有的瘤病人中進(jìn)行基因組學(xué)測序和分析能夠了解其中的發(fā)生的發(fā)展的驅(qū)動基因，然后能根據(jù)發(fā)展的驅(qū)動基因研究靶向藥物，從而推動瘤的藥物研發(fā)和醫(yī)治！

單細(xì)胞RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)工作流程：單細(xì)胞RNA測序等高通量單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)通常從針對不同瘤和組織類型（解離、分選和分離細(xì)胞等）量身定制的實(shí)驗(yàn)工作流程開始，然后產(chǎn)生可以比對的序列，量化、質(zhì)量控制(QC)過濾和以不同方式標(biāo)準(zhǔn)化，以實(shí)現(xiàn)許多下游計(jì)算分析，例如聚類分析以識別轉(zhuǎn)錄不同的細(xì)胞類型和亞群，等位基因分析以識別單核苷酸變異（SNV，用星號表示）或拷貝數(shù)變體（CNV）、軌跡分析、剪接檢測或瘤的微環(huán)境（TME）相互作用的推斷中。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)的分析通常因精心設(shè)計(jì)的研究設(shè)計(jì)而變得復(fù)雜，這些設(shè)計(jì)可能包括來自患病和未患病個體的樣本、在不同時(shí)間點(diǎn)（例如，診療前和診療后）收集的同一個人的多個樣本，或來自表現(xiàn)出不同疾病狀態(tài)的不同個體的多個樣本。這樣的研究設(shè)計(jì)可以發(fā)現(xiàn)患者共享的轉(zhuǎn)錄特征，這些特征可能定義疾病中常見的干擾分子途徑。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序必須做生物學(xué)重復(fù)么？

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)：10×genomics技術(shù)：首先在凝膠微珠上種上特定的DNA的片段，DNA的片段由三部分組成：Barcode、UMI、PolyT組成。Barcode是16個堿基的長度。一共有400萬種Barcode，一個微珠是對應(yīng)于一種Barcode，通過這400萬種Barcode，可以把凝膠微珠給區(qū)分開（通過barcode可以把cell分開）。UMI是一段隨機(jī)序列，也就是說每一個DNA分子，都有自己的UMI序列（一個微珠上有很多種UMI，通過UMI可以把RNA分子分開，并可以標(biāo)記RNA分子的數(shù)量）。10個堿基長的UMI，有100萬種序列的變化（4^10=1,048,576），UMI的作用是為了區(qū)分哪些reads是來自于一個原始cDNA分子區(qū)分基因片段重復(fù)還是duplication及區(qū)分是真實(shí)的SNP位點(diǎn)還是PCR產(chǎn)生的突變。通過10×genomics儀器將單個細(xì)胞與單個凝膠微珠通過油相混在一起，形成油包水的小微滴。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序的研究對象為特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和。河南外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析價(jià)格

轉(zhuǎn)錄組學(xué)能準(zhǔn)確地識別可變剪切位點(diǎn)及cSNP，UTR區(qū)域。湖北外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜分析

轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)路線及研究意義：轉(zhuǎn)錄組測序的研究對象為特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和，包括mRNA和非編碼RNA。相對于傳統(tǒng)的芯片雜交平臺，轉(zhuǎn)錄組測序無需預(yù)先針對已知序列設(shè)計(jì)探針，即可對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動進(jìn)行檢測，提供更準(zhǔn)確的數(shù)字化信號，更高的檢測通量以及更普遍的檢測范圍，是目前深入研究轉(zhuǎn)錄組復(fù)雜性的強(qiáng)大工具。基于高通量測序平臺的轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)能夠全方面獲得物種特定組織的轉(zhuǎn)錄本信息，從而進(jìn)行基因表達(dá)水平研究、新轉(zhuǎn)錄本發(fā)現(xiàn)研究、轉(zhuǎn)錄本結(jié)構(gòu)變異研究等。湖北外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜分析

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