山東LC-MS／MS非靶向代謝組學(xué)質(zhì)譜分析

靶向代謝組學(xué)分析成功的關(guān)鍵因素是準(zhǔn)確度、高通量和可靠性。靶向代謝組學(xué)鑒定一般采用 GC/MS 系統(tǒng)的選擇性離子監(jiān)測 (SIM)，或在三重串聯(lián)四極桿 LC/MS 系統(tǒng)上用多反應(yīng)離子監(jiān)測 (MRM) 進(jìn)行靶向 MS/MS。SIM 比全掃描圖譜采集具有更高的靈敏度，在單四極桿質(zhì)譜中,這種靈敏度增強(qiáng)的原因是延長了所選擇離子的采集時(shí)間。因?yàn)楸O(jiān)測的是一個(gè)很小的質(zhì)量窗口，所以質(zhì)量色譜圖只表示對極為特定質(zhì)量的檢測。在大多數(shù)情況下，靈敏度可以提高 10 倍。MRM 是進(jìn)行質(zhì)譜定量的選擇方法，與 SIM 相比更為靈敏、更加特異?？梢援a(chǎn)生獨(dú)特的碎片離子，可對非常復(fù)雜基質(zhì)中的目標(biāo)化合物進(jìn)行監(jiān)測和定量。代謝組學(xué)的研究對象與層次有哪些？山東LC-MS／MS非靶向代謝組學(xué)質(zhì)譜分析

代謝組學(xué)有哪些特點(diǎn)？(1) 代謝處于系統(tǒng)生物學(xué)的末端，更能反映基因與外部環(huán)境互作的真實(shí)情況，因此，在多數(shù)生物表型研究上更加適用。(2) 常規(guī)代謝組學(xué)只關(guān)注內(nèi)源性化合物，也有使用代謝組學(xué)技術(shù)測定外源性化合物的。內(nèi)源性化合物的上調(diào)和下調(diào)指示了與疾病、毒性、基因修飾或環(huán)境因子的影響。(3) 高通量定量和定性研究生物小分子化合物。(4) 內(nèi)源性化合物的結(jié)果可以作為疾病的診斷、藥物篩選或者其他分型評估等潛在生物標(biāo)志物。謝組學(xué)通過揭示內(nèi)在和外在因素影響下，生物體的代謝整體的變化軌跡來反映某種生理或病理的一系列發(fā)展過程。上海LC-MS／MS非靶向代謝組學(xué)分析鑒定代謝組學(xué)主要研究的是產(chǎn)物的小分子代謝物（MW<1000）。

代謝組學(xué)發(fā)展前景：代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)后出現(xiàn)的新興“組學(xué)”,每年發(fā)表的代謝組學(xué)研究的文章數(shù)量都在不斷增加。代謝組學(xué)的發(fā)展很迅速，盡管還沒有經(jīng)典論文出現(xiàn),但是研究人員相信，與基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)相比，代謝組學(xué)將在臨床上發(fā)揮更大的作用。許多公司通過市場研究發(fā)現(xiàn)，健康人并不希望進(jìn)行基因型分析，所以，對于這些人群來說，基因組學(xué)研究在臨床上的應(yīng)用很有限。而代謝組學(xué)與臨床化學(xué)較為相似，且相對于基因組學(xué)來說，提供的個(gè)人信息更少，故其在臨床上的應(yīng)用有可能產(chǎn)生一定的影響。

代謝組學(xué)細(xì)胞樣本收集：懸浮細(xì)胞：1）連同培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到1.5 mL的進(jìn)口離心管中。2）低速離心5 min（低于3000 rpm），使細(xì)胞沉淀于離心管的底部（1*107個(gè)細(xì)胞為宜）。3）倒掉培養(yǎng)基（盡量倒干凈），用預(yù)冷的PBS反復(fù)沖洗2 ~ 3次，低速離心5 min，棄上清。4）標(biāo)記離心管，將離心管的尖的一端插入液氮中，淬滅細(xì)胞沉淀1 min，-80 ℃凍存，干冰寄送。注意事項(xiàng)：1. 培養(yǎng)基傾倒時(shí)盡量倒干凈，可使用濾紙將殘留培養(yǎng)液吸凈；2. 甲醇/水請使用色譜純及以上規(guī)格；3. 液氮淬滅細(xì)胞時(shí)，請小心避免離心管破碎導(dǎo)致樣本受損;4. 建議細(xì)胞樣本在進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)多準(zhǔn)備樣本，以備后續(xù)使用。代謝組學(xué)主要研究的是各種代謝路徑的底物。

代謝組學(xué)的研究對象與層次有哪些？一般來說，代謝組學(xué)關(guān)注的對象是分子量在1000以下的小分子化合物。根據(jù)研究的對象和目的不同，科學(xué)家將生物體系的代謝產(chǎn)物分析分為4個(gè)層次：代謝物靶標(biāo)分析：某一個(gè)或幾個(gè)特定組分的定性和定量分析，如某一類結(jié)構(gòu)、性質(zhì)相關(guān)的化合物（氨基酸、有機(jī)酸、順二醇類）或者某一代謝途徑的所有中間產(chǎn)物或多條代謝途徑的標(biāo)志性組分。代謝物指紋分析：同時(shí)對多個(gè)代謝物進(jìn)行分析，不分離鑒定具體單一組分。代謝輪廓分析：限定條件下對生物體內(nèi)特定組織內(nèi)的代謝產(chǎn)物的快速定性和半定量分析。代謝組分析：對生物體或體內(nèi)某一特定組織所包含的所有代謝物的定量分析，并研究該代謝物組在外界干預(yù)或病理生理?xiàng)l件下的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。代謝組學(xué)的研究處于生物信息流的中游。武漢非靶向代謝組學(xué)主要技術(shù)

代謝組學(xué)的代謝產(chǎn)物是基因表達(dá)的產(chǎn)物。山東LC-MS／MS非靶向代謝組學(xué)質(zhì)譜分析

代謝組學(xué)疾病診斷應(yīng)用： 代謝組學(xué)研究人員已經(jīng)對此進(jìn)行了研究。新生兒是否缺失酶基因，可以在出生時(shí)就檢測出來?？蓹z測出包括涉及合成途徑中的基本成分（如氨基酸）的酶。酶缺失的結(jié)果就是相應(yīng)的代謝產(chǎn)物過少或過多。尿癥（PKU）是一種常見的嬰兒疾病。這種疾病是由于缺失將苯丙氨酸水解成酪氨酸所必須的苯丙氨酸水解酶基因，導(dǎo)致血液中苯丙氨酸累積造成的。若是不能及時(shí)檢測出這種天生的代謝缺乏，在嬰兒出生后九個(gè)月內(nèi)，就會(huì)引起無法挽救的大腦損傷。這種疾病通過簡單的血樣和尿素化驗(yàn)就可以確診。而血樣和尿素化驗(yàn)以后也將成為代謝指紋研究方法的一部分。像尿癥那樣的疾病，研究人員正試圖從疾病的生物化學(xué)基礎(chǔ)著手，而不是只有檢測生物標(biāo)記物。他們希望通過代謝組學(xué)，可以找到更好的方法去治這些疾病。山東LC-MS／MS非靶向代謝組學(xué)質(zhì)譜分析

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