腦定位動物模型技術(shù)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法和應(yīng)用，采用該構(gòu)建方法可以得到視網(wǎng)膜色素變性疾病模型，該模型可表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，該模型可用于視網(wǎng)膜色素變性性疾病的研究，可以幫助闡明rp的發(fā)病過程及機(jī)制，并為該疾病的或預(yù)防提供新的靶標(biāo)。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法，其包括：敲除目標(biāo)動物視網(wǎng)膜前體細(xì)胞中的基因組中的gm20541基因。小鼠膽管結(jié)扎誘導(dǎo)炎癥性肝損傷和肝纖維化模型的建立。腦定位動物模型技術(shù)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法和應(yīng)用，采用該構(gòu)建方法可以得到視網(wǎng)膜色素變性疾病模型，該模型可表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，該模型可用于視網(wǎng)膜色素變性性疾病的研究，可以幫助闡明rp的發(fā)病過程及機(jī)制，并為該疾病的或預(yù)防提供新的靶標(biāo)。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法，其包括：敲除目標(biāo)動物視網(wǎng)膜前體細(xì)胞中的基因組中的gm20541基因。znf124是一種編碼鋅指蛋白的新基因。鋅指蛋白是一類具有手指狀結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子，對基因調(diào)控起重要的作用。znf124蛋白可穿過核孔進(jìn)入核內(nèi)，作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控其他基因的表達(dá)。目前針對znf124蛋白功能的研究報(bào)道并不多，對其功能也知之甚少，znf124與一種先天性系統(tǒng)發(fā)育疾病dandy-walker復(fù)合征(dandy-walkercomplex，dwc)相關(guān)。此外，znf124被認(rèn)為參與了前體生長因子(vegf)對人造血細(xì)胞凋亡的抑制作用，表明znf124在人體生命活動中承擔(dān)有重要功能。發(fā)明人的另一研究表明，znf124基因突變與rp有關(guān)，對探索rp的致病機(jī)制有極大幫助。因此，深入研究znf124對視網(wǎng)膜色素變性疾病的及病因探討潛力巨大。哪里有動物模型實(shí)驗(yàn)致使腎小球系膜這以 IgA 為主的免疫復(fù)合物沉積,同時(shí)使系膜細(xì)胞增生,基質(zhì)增多。

40mmnaoh，)，并在金屬浴100℃加熱1h；(3)取出離心管，冷卻至室溫后，加入100μl的中和液(40mmtris-hcl，)，10000g離心2min后，取上清用于小鼠基因型鑒定。(3)pcr擴(kuò)增：按照如系配置pcr反應(yīng)體系2×taqmix：10μl尾巴組織裂解液：2μl引物1(gm20541-loxp-forward或six3-cre-forward)：1μl(濃度：10mm)引物2(gm20541-loxp-reverse或six3-cre-reverse)：1μl(濃度：10mm)ddh2o：6μl。引物序列如下：gm20541-loxp-forward序列：5’-attccccttcaagatagctac-3’；gm20541-loxp-reverse序列：5’-aatgatcaactgtaattcccc-3’；six3-cre-forward序列：5’-gccgccgggatcactctcg-3’；six3-cre-reverse序列：5’-ccagccgccgtcgcaactc-3’。擴(kuò)增程序：pcr反應(yīng)體系配制完后，在pcr儀上于95℃預(yù)加熱5分鐘使模板dna充分變性，然后進(jìn)入擴(kuò)增循環(huán)。在每一個(gè)循環(huán)中，先于95℃保持30秒鐘使模板變性，然后將溫度降到復(fù)性溫度58℃，保持30秒，使引物與模板充分退火；在72℃保持30秒，使引物在模板上延伸，合成dna，完成一個(gè)循環(huán)。重復(fù)這樣的循環(huán)25次，使擴(kuò)增的dn段大量累積。，在72℃保持5分鐘，使產(chǎn)物延伸完整，4℃保存。(4)凝膠電泳稱取1g瓊脂糖放于100mltaebuffer中。

但是目前對znf124的研究還處于初期階段，其小鼠同源基因?yàn)間m20541(predictedgene20541，mgi：5142006)，該基因位于小鼠17號染色體3，全長2750kb，其cdna全長1406bp，包含3個(gè)外顯子，其cdna序列如seqid所示，如下：gaatgcagtgacctatgatgatgtgtgtgtgaacttcactctggaagaatggactttactggatccttcacagaagagtctctacagagatgtgatgcaggaaacctacaggaatctcactgctataggctacaattgggaagatgacaatattgaagactattttcaaagttctagaagacatggaaggcatgaaagaaatcatagtggagagaaaccttatgcttgtaaccaatgtgataaagccttttcatgtcatcatagtctccaaatacataaaagaagacatactggagagaaactctatgaatgtaaccgttgtaataaaggctttccatatcccagtgctctacaaatacataaaaggatacacagtggagagaaaccctatgaatgtaaacaatgtggtaaagcctttgcatgtcacagttctcttcaaaggcatgaaagaatacatactggtgagaaaccttatgaatgtagccaatgtggtaaagcctttacacatcaaaagagtctccaaatacataaaagaactcacagtggagaaaaaccatatgggtgtagtcagtgtggaaaagactttgtaagtcagagtcgtcttctagaacataaaaggacacatactggagagaaaccctatgaatgtaaccaatgtggtaaagcctttgcatattccaacagtctccaaatacatcaaagaacacacactggagagaaaccctatgaatgtaaccagtgtggtaaagcctttgcatatcacaatagtctccaaatacata。四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠模型。

可在設(shè)定的壓差標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)無極調(diào)控，以保障系統(tǒng)對海拔(3000m～7000m)的微負(fù)壓進(jìn)行模擬。并且，進(jìn)排風(fēng)風(fēng)管裝有高效空氣過濾器，使進(jìn)入飼養(yǎng)倉2的氣體潔凈。實(shí)施例3在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上提供的一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)，所述高原低氧環(huán)境模擬裝置包括惰性氣源，所述惰性氣源與進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)13連接，所述惰性氣源與進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)13之間設(shè)置有比例式氣閥，還包括設(shè)置在飼養(yǎng)倉2內(nèi)的嵌入式氧測定儀。本實(shí)施例的工作原理：惰性氣源可以是惰性氣體儲備罐或者是液態(tài)惰性氣體儲備罐。在模擬低氧環(huán)境時(shí)，外接惰性氣體儲備罐連接進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)13。比例式氣閥和嵌入式氧測定儀均與功能控制面板19連接，通過功能控制面板19上的氧濃度表顯示濃度來調(diào)節(jié)比例式氣閥，通過加惰性氣體來來實(shí)現(xiàn)降低氧氣濃度。當(dāng)倉體內(nèi)的氧氣濃度較高時(shí)，手動打開惰性氣體儲備罐與進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)之間的氣閥，調(diào)節(jié)惰性氣體進(jìn)入量，使倉體內(nèi)氧氣濃度降低，觀察控制面板上的氧濃度顯示，調(diào)整氣閥開度大小，達(dá)到需求的氧濃度，以此調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)高原缺氧環(huán)境的模擬。本技術(shù)方案采用的惰性氣體為對生命體無危害的惰性氣體。實(shí)施例4在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上提供的一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)。通過高脂飲食誘導(dǎo)構(gòu)建非酒精性脂肪肝模型。上海裸鼠動物模型培養(yǎng)

在肝臟中，肝外膽道系統(tǒng)的阻塞會引發(fā)膽汁淤積和炎癥，導(dǎo)致門靜脈周圍區(qū)域的強(qiáng)烈纖維化反應(yīng)。腦定位動物模型技術(shù)

實(shí)驗(yàn)樣本分類實(shí)驗(yàn)一般采取樣本有：血液樣本、組織樣本和細(xì)胞樣本。通常，組織樣本采集后，應(yīng)立即用等滲溶液（PBS或生理鹽水）盡量把血液漂洗干凈（除非血液也是分析對象），用濾紙或紗布吸干，把樣本分切成幾分，每份的體積約2個(gè)黃豆大小，每份用一個(gè)管子裝。血液樣本的采集應(yīng)根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)的要求，將會采取不同策略。血清樣本：全血中不加抗凝劑，血液凝固后取出的不含凝血因子的淡黃色透明液體。（全血標(biāo)本室溫放置2小時(shí)3000rpm/min離心15min）血漿樣本：全血中加抗凝劑，血液凝固后取出的含凝血因子的淡黃色透明液體。（可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃，3000rpm/min離心15min）如果是做生化\ELISA等檢測可以考慮血漿和血清，根據(jù)獲得的樣本量可考慮分裝成100-500μl/管，可避免反復(fù)凍融造成的檢測誤差。生化：建議優(yōu)先選擇血清，其次選擇肝素抗凝血漿；ELISA：建議優(yōu)先選擇血清，其次選擇肝素或EDTA抗凝血漿；凝血實(shí)驗(yàn)：只能選擇枸櫞酸鈉抗凝血漿；血常規(guī)：只能選擇EDTA抗凝全血；如果要收集其中的白細(xì)胞、血小板等建議用抗凝全血。如果要做流式建議用專門的流式用血液收集管，防止表面抗原的丟失，或者盡快安排就近檢測。樣本處理取樣完后。腦定位動物模型技術(shù)