江蘇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建模

所述外顯子序列為第3外顯子序列。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，利用cre-loxp基因敲除技術(shù)敲除gm20541基因上的第3外顯子序列。上述敲除策略是采用cre-loxp敲除技術(shù)敲除gm20541基因。但在其他的實(shí)施例中，實(shí)現(xiàn)基因敲除的技術(shù)手段有很多，例如crispr/cas9技術(shù)、人工核酸酶介導(dǎo)的鋅指核酸酶技術(shù)(zinc-fingernucleases，zfn)、轉(zhuǎn)錄因子樣效應(yīng)物核酸酶技術(shù)(transceriptionactivator-likeeffectornucleases,talen)等。因此，在其他的實(shí)施例中采用crispr/cas9技術(shù)或其他的技術(shù)手段敲除gm20541基因，也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述目標(biāo)動(dòng)物為哺乳動(dòng)物。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物選自小鼠、大鼠、狗、豬、猴以及猿中的任意一種。需要說明是，本發(fā)明所述的目標(biāo)動(dòng)物并不限于上述的動(dòng)物，其他類型的哺乳動(dòng)物也是可行，無論選用何種動(dòng)物，只要是具有g(shù)m20541基因或其同源基因的動(dòng)物，均可作為本發(fā)明所述構(gòu)建方法中的目標(biāo)動(dòng)物，在其前體細(xì)胞中敲除gm20541基因，使其表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型，這也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。第二方面。大鼠、小鼠動(dòng)物疾病模型技術(shù)。江蘇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建模

表明在gm20541敲除鼠視網(wǎng)膜外節(jié)變短退化。sixko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型小鼠；dapi(4,6-diamidino-2-phenylindole)：細(xì)胞核染料4,6-二脒基-2-苯基吲哚；rhodopsin：視紫紅質(zhì)抗體；merge：兩種顏色重疊。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。實(shí)施例11采用rt-pcr方法檢測gm20541基因在不同組織的表達(dá)情況。方法：分別提取小鼠腦、肝臟、視網(wǎng)膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾的總rna，然后用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。根據(jù)gm20541的cdna序列設(shè)計(jì)引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3。以提取的cdna為模板，進(jìn)行rt-pcr。擴(kuò)增后進(jìn)行電泳，結(jié)果見圖1。結(jié)果見圖1中a和b，可以看出，通過rt-pcr方法檢測gm20541基因在小鼠腦、肝臟、視網(wǎng)膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾中的表達(dá)。西藏皮下成瘤動(dòng)物模型手術(shù)膽管結(jié)扎致肝膽管性肝硬化大鼠模型。

準(zhǔn)備碎冰和。把膜置于甲醇溶液中活化1分鐘，然后轉(zhuǎn)移至轉(zhuǎn)膜液中平衡3分鐘后備用。2、轉(zhuǎn)膜組裝轉(zhuǎn)膜三明治夾，這一步很關(guān)鍵，重要的是膠和膜之間不能有氣泡且膜與膠要保證貼合緊密(否則會(huì)翻車)，可以加多點(diǎn)轉(zhuǎn)膜液泡著。組裝好后加滿轉(zhuǎn)膜液，設(shè)置電源參數(shù)，我習(xí)慣恒流轉(zhuǎn)膜，200-280毫安，1-2小時(shí)，根據(jù)分子量定，如50KD的分子用60分鐘就夠了。如果一個(gè)電源帶兩個(gè)轉(zhuǎn)膜大槽即四塊膠，我就會(huì)用恒壓70-110V。這個(gè)過程重要的是做好降溫。這里簡單說一下蛋白分子量與玻璃板厚度，分離膠的濃度，轉(zhuǎn)膜電源參數(shù)的選擇問題。如果是能用1毫米的玻璃板就不用，因?yàn)檗D(zhuǎn)膜是在電場的作用下蛋白分子從膠上遷移到膜上，1毫米膠的蛋白遷移距離要比。選擇更薄的膠蛋白轉(zhuǎn)膜時(shí)間可以減少，從而減少發(fā)熱，以免膠變形，條帶也會(huì)更好看。然后是分離膠的濃度，如果是150—200KD的分子選10%以下的的分離膠，200—300KD的選8%的,300KD以上的選6%的，小于30KD的200mA30分鐘，30-100KD的按分子量的數(shù)值算，如70KD，250mA70分鐘;100-150KD的250mA100分鐘;150—300KD的分子轉(zhuǎn)膜條件用280毫安(以上均是對(duì)于，)，120分鐘足矣，前提是膠的濃度相適應(yīng)。五、封閉孵一抗1、封閉轉(zhuǎn)膜結(jié)束后。

常見的有組織病理染色、WesternBlot、PCR等），實(shí)驗(yàn)儀器是否需要預(yù)約使用。如果需要外送生物公司檢測，需要提前聯(lián)系好商家，以及了解清楚樣本如何獲取，如何運(yùn)輸。飼養(yǎng)動(dòng)物及干預(yù)動(dòng)物購買后需要將時(shí)間節(jié)點(diǎn)提前規(guī)劃好，比如，周需要做什么？測量體重？觀察飲食？測量需要的指標(biāo)？中間有無特殊操作？比如灌胃、測量體重、做CT檢測、取血？……第幾周取材？取材需要哪些組織？預(yù)實(shí)驗(yàn)方案就要提前設(shè)計(jì)清楚以上內(nèi)容。取材及樣品準(zhǔn)備取材需要提前到動(dòng)物房禁食、稱體重、取出動(dòng)物、手術(shù)器械的消毒、組織固定所需要的試劑和EP管，WesternBlot和PCR所需要的樣本儲(chǔ)存條件。比如凍存管、EP管，是否需要冰塊？是否需要液氮？取材當(dāng)天需要多少人？是否需要請(qǐng)人幫忙？如果所需要取出的樣本較多，建議大家請(qǐng)人一起幫忙，流水線作業(yè)，這樣能節(jié)省時(shí)間，并且能保證樣品的質(zhì)量。如果請(qǐng)人，每個(gè)人需要負(fù)責(zé)哪一板塊的工作，比如誰負(fù)責(zé)麻醉，誰負(fù)責(zé)取血液，誰負(fù)責(zé)取，誰負(fù)責(zé)拍照、誰負(fù)責(zé)儲(chǔ)存，都需要提前規(guī)劃交代清楚。實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測如果是需要自己做的檢測，比如常見的WesternBlot、PCR，建議提前可以看看教程（無論是視頻還是貼吧，都要自己多方參考）。有了一定的理論基礎(chǔ)后。好的動(dòng)物模型能夠較好地模擬疾病狀態(tài)，為的研究提供可能。

實(shí)施例7在實(shí)施例6的基礎(chǔ)上提供的一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)，所述動(dòng)物行為學(xué)遠(yuǎn)程觀察單元18包括coms高清圖像采集系統(tǒng)、數(shù)字視頻傳輸系統(tǒng)、頻硬件解壓卡、視頻顯示系統(tǒng)。本實(shí)施例的工作原理：系統(tǒng)內(nèi)配置coms高清圖像采集系統(tǒng)(支持icp/ip網(wǎng)絡(luò)通訊協(xié)議)、數(shù)字視頻傳輸系統(tǒng)、頻硬件解壓卡(usb或pci接口用戶自選)、視頻顯示系統(tǒng)(用戶自備)，保障了實(shí)驗(yàn)過程中實(shí)時(shí)監(jiān)控與實(shí)驗(yàn)結(jié)束后操作過程的溯源。例如，在飼養(yǎng)倉2上方裝高精密攝像頭，搭載手機(jī)app，可360°監(jiān)控動(dòng)物的行為，并能實(shí)時(shí)錄像，圖像采集等，通過監(jiān)控錄像來實(shí)現(xiàn)動(dòng)物學(xué)行為觀察。以上所述為本實(shí)用新型的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本實(shí)用新型，凡在本實(shí)用新型的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。博萊霉素是具有多種抗腫瘤作用的多組分，其毒副作用之一是引起肺纖維化。北京小鼠動(dòng)物模型培養(yǎng)

肺泡上皮細(xì)胞及內(nèi)皮損傷，造成彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫，導(dǎo)致的急性低氧性呼吸功能不全。江蘇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建模

本發(fā)明實(shí)施例提供了由上述的方法所得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在視網(wǎng)膜色素變性性疾病研究中的應(yīng)用。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述研究是以非疾病的為目的。通過本發(fā)明的構(gòu)建方法得到的動(dòng)物模型其具有典型視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，其具有非常廣闊的應(yīng)用前景，例如將其用于研究視網(wǎng)膜色素變性性疾病的發(fā)病過程、發(fā)病機(jī)制，為深入了解研究視網(wǎng)膜色素變性性疾病提供基礎(chǔ)。又或者將其用于篩選用于預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物、用于評(píng)價(jià)藥物的療效或預(yù)后等。第三方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了由上述的方法所得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在篩選用于預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明方面提供了構(gòu)建方法的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員容易想到將由該方法得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型用于篩選預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物或其他類似領(lǐng)域，這也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述應(yīng)用包括：向所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型施用候選藥物，如果所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在施用所述候選藥物前后發(fā)生如下變化中的至少一種，則指示所述候選藥物可以作為預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病的藥物：(1)施用所述候選藥物后。江蘇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建模