上海裸鼠動物模型構(gòu)建

糖尿病足大鼠模型【目的】構(gòu)建糖尿病足大鼠模型；【材料】1、材料：STZ藥物、注射器、檸檬酸、檸檬酸三鈉；2、試劑配制：1）檸檬酸納緩沖液配制：A液十B液=1:，PH=；A液:檸檬酸mL；B液:朽檬酸三納2）STZ液配制:55mg/kg（避光，現(xiàn)配現(xiàn)用10min內(nèi)注射)；3、糖尿病模型構(gòu)建方法：1）大鼠術(shù)前禁食12h；2）按55ug/g注射.連續(xù)3天注射，對照組注射檸檬酸緩沖液，造模組注射STZ液，注射后不禁水、禁食2-4h；3）STZ注射結(jié)束5天后空腹測血糖，血糖值高于12mmol/L選入實驗組；【方法】方法一：細(xì)菌懸浮液造模1、糖尿病模型大鼠第二周至第三周時，后足背側(cè)注射l0ul金黃色葡萄球菌懸浮液，造成糖尿病肢端的動物模型；2、后續(xù)觀察傷口情況；方法二：皮膚劃傷造模1、三周后糖尿病大鼠后足足背手術(shù)剪做一個圓形皮膚創(chuàng)口，直徑5mm；2、后續(xù)每日觀察傷口情況，作好記錄。放血致失血性貧血小鼠模型。上海裸鼠動物模型構(gòu)建

根據(jù)gm20541的cdna序列設(shè)計引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3；(g)以提取的cdna為模板，進(jìn)行rt-pcr。擴(kuò)增后進(jìn)行電泳。結(jié)果見圖4中b，可以看出，通過rt-pcr方法檢測gm20541在gm20541基因敲除純合子小鼠的視網(wǎng)膜中表達(dá)量降低。圖4的b中ctrl是指野生型對照，sixko是指gm20541基因敲除純合子小鼠；gm20541rnalevel是指rna表達(dá)水平相對變化，以野生型表達(dá)水平為1。實施例3對4月齡的gm20541基因敲除純合子小鼠進(jìn)行erg視力檢測：1暗適應(yīng)動物應(yīng)整夜暗適應(yīng)，環(huán)境應(yīng)做到?jīng)]有光線；2次日麻醉：稱重，腹腔內(nèi)注射；宜深度麻醉；3動物固定及散瞳：麻醉完成后，在暗紅光照明下將小鼠用膠帶固定在動物試驗平臺的前方：需保證小鼠正"趴"，即相對于閃光刺激器的刺激口，雙眼高度一致，充分暴露，滴加散瞳劑。4電極安裝：將視網(wǎng)膜電圖儀(espionvisualelectrophysiologysystem,diagnosysllc,littleton,ma,usa)預(yù)熱后，在耳夾電極涂上導(dǎo)電膏，夾尾巴，插入放大器“地”接口；雙頭的針電極插入后頸皮(大約在兩耳中間)，同時接兩個通道的“負(fù)”接口；金環(huán)電極夾在動物實驗平臺的電極支架上，仔細(xì)調(diào)整其角度。西藏皮下成瘤動物模型造模心力衰竭(heart failure)簡稱心衰,是指由于心臟的收縮功能和(或)舒張功能發(fā)生障礙。

再向老師、師兄師姐學(xué)習(xí)經(jīng)驗和技術(shù)，如果實驗平臺的儀器需要提前預(yù)約，建議提前規(guī)劃好使用的時間。反復(fù)總結(jié)尋找答案在整個預(yù)實驗的過程中可能會出現(xiàn)很多問題。比如造模效果欠佳、灌胃操作不當(dāng)、腹腔注射操作失誤、物使用不當(dāng)?shù)纫饎游锼劳?。每遇到問題都需要自己想辦法解決，可以從導(dǎo)師、師兄師姐、文獻(xiàn)、貼吧、視頻教程等找到答案。比如筆者曾遇到同樣的物給藥，發(fā)現(xiàn)有的大鼠麻醉得很深，有的大鼠還活蹦亂跳，在反復(fù)嘗試調(diào)整濃度，給藥劑量，更換麻醉方式，后來才發(fā)現(xiàn)是動物體重秤的準(zhǔn)度有問題，導(dǎo)致體重秤得不準(zhǔn)。因此，需要自己反復(fù)琢磨到底是實驗過程中哪一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，逐一排除。也要求在每一個實驗步驟需要標(biāo)準(zhǔn)化，統(tǒng)一化，盡可能的排除干擾因素，這樣方便在遇到問題快的找到答案。同時，建議每日總結(jié)，大到動物死亡原因分析，小到灌胃操作耗時多長時間。建議反復(fù)總結(jié)出每天實驗的優(yōu)缺點。做任何一個操作之前，建議提前腦海中反復(fù)模擬，準(zhǔn)備好相關(guān)工具和試劑，避免臨用之際缺少藥的，影響實驗操作節(jié)奏和個人心情。筆者曾經(jīng)灌胃操作的時候發(fā)現(xiàn)藥物竟然忘帶了，只好重新回實驗室準(zhǔn)備，那真叫一個郁悶。仔細(xì)記錄每日實驗過程無論是碩士還是博士。

本發(fā)明實施例提供了由上述的方法所得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在視網(wǎng)膜色素變性性疾病研究中的應(yīng)用。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述研究是以非疾病的為目的。通過本發(fā)明的構(gòu)建方法得到的動物模型其具有典型視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，其具有非常廣闊的應(yīng)用前景，例如將其用于研究視網(wǎng)膜色素變性性疾病的發(fā)病過程、發(fā)病機(jī)制，為深入了解研究視網(wǎng)膜色素變性性疾病提供基礎(chǔ)。又或者將其用于篩選用于預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物、用于評價藥物的療效或預(yù)后等。第三方面，本發(fā)明實施例提供了由上述的方法所得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在篩選用于預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明方面提供了構(gòu)建方法的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員容易想到將由該方法得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型用于篩選預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物或其他類似領(lǐng)域，這也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實施方案中，所述應(yīng)用包括：向所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型施用候選藥物，如果所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在施用所述候選藥物前后發(fā)生如下變化中的至少一種，則指示所述候選藥物可以作為預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病的藥物：(1)施用所述候選藥物后。通過高脂飲食誘導(dǎo)構(gòu)建非酒精性脂肪肝模型。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)在這些組織中，gm20541均有表達(dá)，說明該基因可能在體內(nèi)發(fā)揮重要功能。2采用免疫印跡(westernblot)的方法檢測gm20541基因在不同組織中的表達(dá)。方法：(1)分別獲取小鼠腦、肝臟、視網(wǎng)膜、心臟、腎臟以及脾，充分研磨后加入200μl蛋白裂解液ripa。(2)超聲破碎細(xì)胞后，在冰上裂解20min。(3)4℃，16000g離心10min后，取上清轉(zhuǎn)移至另一干凈離心管，加入50μl的蛋白上樣液，混勻后95℃加熱5min。(4)待樣本冷卻后，分別取20μl，160v電壓進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)以分離蛋白。(5)sds-page結(jié)束后，根據(jù)需要，裁剪適當(dāng)大小的硝酸纖維素膜，按順序鋪上濾紙、膠、硝酸纖維素膜及濾紙，并趕去氣泡，轉(zhuǎn)膜槽放入冰水浴中，采用恒流，轉(zhuǎn)膜2h。(6)轉(zhuǎn)膜完畢后，純水沖洗硝酸纖維素膜一遍，晾干并標(biāo)記。然后用8％的脫脂牛奶封閉2h。(7)封閉完成后，加入一定量的按一定比例(按照抗體使用說明書)稀釋于封閉液的一抗，4℃孵育過夜。(8)回收一抗，1×tbst緩沖液洗膜4次，每次10min，根據(jù)一抗來源，選擇合適二抗，用1×tbst稀釋辣根過氧化氫酶(hrp)標(biāo)記的二抗，室溫于搖床上孵育2h。(9)二抗孵育結(jié)束后，用1×tbst洗膜3次，每次10min，用thermo的elc發(fā)光試劑盒檢測蛋白。因此，外科結(jié)扎膽總管并使膽總管完全阻塞已成為引起嚙齒動物梗阻性膽汁淤積性損傷的常用模型。上海大鼠動物模型造模

特發(fā)性肺纖維化（IPF）小鼠模型建立。上海裸鼠動物模型構(gòu)建

但是目前對znf124的研究還處于初期階段，其小鼠同源基因為gm20541(predictedgene20541，mgi：5142006)，該基因位于小鼠17號染色體3，全長2750kb，其cdna全長1406bp，包含3個外顯子，其cdna序列如seqid所示，如下：gaatgcagtgacctatgatgatgtgtgtgtgaacttcactctggaagaatggactttactggatccttcacagaagagtctctacagagatgtgatgcaggaaacctacaggaatctcactgctataggctacaattgggaagatgacaatattgaagactattttcaaagttctagaagacatggaaggcatgaaagaaatcatagtggagagaaaccttatgcttgtaaccaatgtgataaagccttttcatgtcatcatagtctccaaatacataaaagaagacatactggagagaaactctatgaatgtaaccgttgtaataaaggctttccatatcccagtgctctacaaatacataaaaggatacacagtggagagaaaccctatgaatgtaaacaatgtggtaaagcctttgcatgtcacagttctcttcaaaggcatgaaagaatacatactggtgagaaaccttatgaatgtagccaatgtggtaaagcctttacacatcaaaagagtctccaaatacataaaagaactcacagtggagaaaaaccatatgggtgtagtcagtgtggaaaagactttgtaagtcagagtcgtcttctagaacataaaaggacacatactggagagaaaccctatgaatgtaaccaatgtggtaaagcctttgcatattccaacagtctccaaatacatcaaagaacacacactggagagaaaccctatgaatgtaaccagtgtggtaaagcctttgcatatcacaatagtctccaaatacata。上海裸鼠動物模型構(gòu)建