目前應(yīng)用較多的免疫酶技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA試劑盒),如果要分類的話,它屬于異相固相酶免疫技術(shù)。所謂異相是指在檢測(cè)時(shí)不需要將酶標(biāo)記抗原抗體和游離抗原抗體分開,所謂固相就是指的ELISA試劑盒的96孔板固相載體了。ELISA試劑盒的主要原理:1、包被:抗原或者抗體能以物理性吸附于固相載體表面,可能原理是蛋白質(zhì)和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原抗體反應(yīng)等免疫活性。2、標(biāo)記:抗原或者抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點(diǎn)。3、顯色:酶結(jié)合物與相應(yīng)包被在固相載體的抗原或者抗體結(jié)合后,也被固定在固相載體上,加入酶的底物之后可出現(xiàn)顯色反應(yīng),根據(jù)反應(yīng)的顏色深淺可計(jì)算抗原或者抗體的相對(duì)含量。ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。中山ELISA試劑盒哪個(gè)牌子好
ELISA試劑盒產(chǎn)物結(jié)構(gòu)松散不穩(wěn)定,易清洗,易發(fā)生假陰性。很多人在做檢測(cè)的時(shí)分,都不太在意ELISA試劑盒中的說明書上的檢測(cè)過程,覺得自己都知道,都懂的。但就是由于這種心態(tài),所以形成有時(shí)分的檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)失誤。生物檢測(cè)原本就是個(gè)很嚴(yán)格并且嚴(yán)謹(jǐn)?shù)氖虑椋愕囊粋€(gè)小的疏忽或許就會(huì)形成意想不到的錯(cuò)誤。正確的運(yùn)用ELISA試劑盒的過程:在運(yùn)用之前要將試劑充沛的混合均勻,可是要注意在搖晃的時(shí)分不要產(chǎn)生過多的泡沫,從而形成有太多的空氣進(jìn)入試劑中,產(chǎn)生測(cè)試差錯(cuò)。中山ELISA試劑盒哪個(gè)牌子好ELISA試劑盒產(chǎn)物結(jié)構(gòu)松散不穩(wěn)定,易清洗,易發(fā)生假陰性。
ELISA試劑盒要查驗(yàn)技術(shù)人員應(yīng)具有試驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。檢測(cè)技術(shù)人員能夠嫻熟操作試驗(yàn)儀器儀表,具有必定的總結(jié)和剖析問題的能力,能及時(shí)、妥善地解決ELISA試劑盒試驗(yàn)中呈現(xiàn)的意外狀況。洗刷要徹底,洗版不徹底,酶偶聯(lián)物的布景色彩為假陽性。此外,清潔劑應(yīng)該是新鮮的,能夠隨時(shí)使用。舊的洗刷劑會(huì)添加布景,也可能呈現(xiàn)假陽性。嚴(yán)控ELISA試劑盒試驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間,ELISA試劑盒反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng),酶被滅活,反應(yīng)時(shí)間過短,酶與血清中的微生物抗原和抗體不能徹底結(jié)合。
ELISA試劑盒要求陽性參閱血清和陰性參閱血清的O.D值有明顯差別。運(yùn)用ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)別離以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照操控實(shí)驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)效果的準(zhǔn)確性。ELISA試劑盒有時(shí)本底較高,說明有非特異性反應(yīng)。在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其間包含:固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。珠式ELISA試劑盒的反應(yīng)往往靈敏。
ELISA試劑盒是較容易造假的試劑,因?qū)嶒?yàn)簡(jiǎn)單、一次性實(shí)驗(yàn)等特點(diǎn)而決定。常見的造假方法是:廠家用一種試劑盒如VEGF的盒子,貼上不同標(biāo)簽。如TGF,MIF等,就可以賣錢了,因?yàn)檠獫{,培養(yǎng)基等都含有VEGF,所以買家肯定能做出試驗(yàn)結(jié)果,發(fā)光液標(biāo)準(zhǔn)曲線也很好,待測(cè)品也會(huì)顯色(沒有清水),你根本不會(huì)懷疑,很Happy地去比色、計(jì)算、統(tǒng)計(jì)。這是商家常用的手段,很高明,一般人很難察覺。這比樓上說的標(biāo)準(zhǔn)品沒做出來不知要高明多少,一般不會(huì)砸自己牌子。這類ELISA試劑盒,就是目錄很長(zhǎng),能提供上百種甚至上千種試劑盒(目錄冊(cè)包裝很爛),一打電話都說是國(guó)外分裝,而且能較快供貨,遇到這種情況你就要當(dāng)心了。ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了普遍的應(yīng)用。河源ELISA試劑盒廠家
ELISA檢測(cè)試劑盒法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)。中山ELISA試劑盒哪個(gè)牌子好
ELISA試劑盒用量少時(shí),可使用分裝,前期是它的長(zhǎng)久性不是很好。ELISA試劑盒測(cè)定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復(fù)性好。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反響的完結(jié)需求有一定的溫度和時(shí)刻,這一保溫進(jìn)程稱為溫育,有人稱之為孵育,在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。ELISA屬固相免疫測(cè)定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標(biāo)本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī)。中山ELISA試劑盒哪個(gè)牌子好
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