因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象，并且發(fā)光光強度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān)。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的，約一分鐘就可以擴散到小鼠全身。熒光素的半衰期約三個小時，只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶。(1)熒光素不會影響動物的正常生理功能。(2)熒光素是280道爾頓的小分子，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。(3)熒光素在體內(nèi)擴散速度快，可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動物體內(nèi)。腹腔注射擴散較慢，持續(xù)發(fā)光長。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光，10min后強度達(dá)到穩(wěn)定的更高點，在更高點持續(xù)約20~30min后開始衰減，約3h后熒光素排除，發(fā)光全部消失，更佳檢測時間是在注射后15~35min之間；若進(jìn)行熒光素靜脈注射，擴散快，但發(fā)光持續(xù)時間很短?？蒲腥藛T根據(jù)大量的實驗總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg，即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素。(4)觀察時間的間隔沒有更短限制，只要觀察的條件控制一致就可以。雖然底物在動物體內(nèi)有一定的代謝過程。D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。鎮(zhèn)江專業(yè)做D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存
具體實驗流程：注：該操作流程通常用來檢測轉(zhuǎn)染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細(xì)胞中熒光素酶表達(dá)的活性，不適用于對細(xì)菌熒光素酶進(jìn)行檢測。1．實驗***天，消化并接種細(xì)胞（根據(jù)具體實驗選擇合適的細(xì)胞）于35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，置于5％CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。2．等細(xì)胞密度達(dá)到70％時用Luciferase報告基因質(zhì)粒、LacZ的表達(dá)質(zhì)粒及其它質(zhì)粒（根據(jù)具體實驗確定）共轉(zhuǎn)染細(xì)胞（根據(jù)具體實驗選擇轉(zhuǎn)染方法，如磷酸鈣沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可）。3．轉(zhuǎn)染24－36h后，吸取培養(yǎng)液，用預(yù)冷的PBS（無鈣和鎂離子）洗滌細(xì)胞。注：熒光酶的酶促反應(yīng)會被痕量的鈣所抑制，故用磷酸鈣轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在收集細(xì)胞前應(yīng)充分洗滌除去含鈣介質(zhì)。4．在每個培養(yǎng)皿中加入350μl預(yù)冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細(xì)胞。5．在細(xì)胞裂解期間，準(zhǔn)備足量的ml微量離心管，將ATPbuffer與luciferinbuffer以1：，每管100μl。6．依次取等體積的細(xì)胞裂解液（100μl）至步驟5中的離心管中，迅速混勻，在發(fā)光儀（Luminometer）上讀取吸光值。注：發(fā)光反應(yīng)會迅速衰減，將細(xì)胞裂解液加入反應(yīng)液后5s內(nèi)必須讀取吸光值。7．確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后。鹽城D-熒光素鉀鹽活題成像D-熒光素鉀鹽檢測公司招代理嗎？
5）對于檢測靈敏度要求特別高的實驗，建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6）在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時，應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS，因鈣鎂離子可能會抑制熒光素酶的活性，此外鎂離子可能會對熒光素的氧化造成影響，從而影響檢測。7）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。8）本產(chǎn)品只作科研用途！熒光素酶(Luciferase)是自然界中能夠催化熒光素產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱，其中更有代表性的是來自螢火蟲體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類螢光素酶，分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase，同時近年來研究得較多的來源于高斯氏菌的高斯熒光素酶（Gaussluciferase）。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)，可通過熒光測定儀設(shè)備測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，常應(yīng)用于啟動子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗證等方向研究。螢火蟲螢光素酶更通用和更常見的報告基因是北美螢火蟲photinuspyralis的熒光素酶，該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性。高濃度（體內(nèi)）甚至沒有毒性，可用于原核和真核細(xì)胞。運輸和保存運輸條件：4℃冰袋運輸。
并實現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)實現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo)，這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力，尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測原理還促進(jìn)了其它ATP檢測平臺的誕生，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶檢測系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外，還可以檢測底物（luciferin）濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián)，能對這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊的建立，一種改進(jìn)的luciferin面世，能更好地用于典型的報告基因檢測應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin，是新型底物開發(fā)的一個早期實例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計出一種新型螢光素酶報告基因，即NanoLuc?螢光素酶。D-熒光素鉀鹽的合作平臺有哪些？
可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時的“輝光型”信號在大量檢測板之間提供一致的信號與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑（Renillareniformis）分離的36kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比，海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素，產(chǎn)生480nm的藍(lán)光。與螢火蟲螢光素酶類似，海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報告檢測。Amplite?海腎熒光素酶報告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報告基因檢測試劑盒（#AAT-12535）提供了一種快速，靈敏的方法，可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性，與海腎螢光素酶相互作用后，該試劑產(chǎn)生具有強光的產(chǎn)物。Amplite?海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒特點：該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分各類螢光素酶底物，輔因子和物理特性：近幾十年來，腺苷三磷酸(ATP)生物發(fā)光技術(shù)得到了很大的發(fā)展，已經(jīng)在細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性和生物量計數(shù)等方面廣泛應(yīng)用。做D-熒光素鉀鹽測試找哪家公司？鹽城熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用
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SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級純（）應(yīng)用：1）體外化學(xué)發(fā)光分析（invitro）；2）***成像實驗（invivo）；3）高靈敏度ATP分析；步驟：Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1）用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽，配制成100mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2）用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析。Protocol2：Invivoanalysis/***成像分析1）用無菌的PBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL)，。一旦使用，保持冰冷且避光。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光（見下圖）。當(dāng)熒光素過量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，導(dǎo)入研究動物如大、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測光強度變化。鎮(zhèn)江專業(yè)做D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存
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