6羧基熒光素

    Q：熒光素酶作為報(bào)告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢(shì)？Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上，同時(shí)具有更寬的動(dòng)態(tài)范圍，便于數(shù)值分析比較，不需要熒光顯微鏡，而且在***實(shí)驗(yàn)中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白，同時(shí)由于沒有內(nèi)源活性、其本底信號(hào)很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢(shì)在于可以進(jìn)行失蹤定位，并且其觀測(cè)不需裂解細(xì)胞，方便進(jìn)行適時(shí)觀察。Q：海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比，相對(duì)活性如何？在氧、鎂和ATP的存在下，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而來源于海洋腔腸（Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報(bào)告基因技術(shù)（Dual-reporterassays）,結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測(cè)試和海腎熒光素酶測(cè)試。Q：雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)轉(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來是什么原因？轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個(gè)方面改善，首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的，通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞，另外陽性對(duì)照您可以選擇過表達(dá)的熒光蛋白質(zhì)粒，還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要，更好是先酶切驗(yàn)證。這個(gè)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果很靈敏，有一定差異是正常的，通常只要確保它在一個(gè)數(shù)量級(jí)之內(nèi)即可。如果差異超出這個(gè)范圍可以從兩方面改善，一是記住保持樣本的均一性。D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司怎么樣？6羧基熒光素

    產(chǎn)品描述D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，構(gòu)建原位**模型，之后注入熒光素底物，通過IVIS系統(tǒng)來檢測(cè)光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評(píng)價(jià)等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。注：在抗**藥物藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)中，由于生物自發(fā)光檢測(cè)需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定**大小，受**生長(zhǎng)所發(fā)生的**內(nèi)部壞死影響，生物自發(fā)光并不能很***的評(píng)價(jià)**生長(zhǎng)，在抗**藥效評(píng)價(jià)有較高要求的實(shí)驗(yàn)中，建議使用小動(dòng)物核磁成像系統(tǒng)檢測(cè)**生長(zhǎng)。D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報(bào)告基因分析；高通量測(cè)序和各種污染檢測(cè)。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸），D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液?？扇苡诩状己虳MSO。 無錫專業(yè)做D-熒光素鉀鹽試劑南京D-熒光素鉀鹽測(cè)試公司有哪幾家。

    短期保存：4℃干燥避光長(zhǎng)期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×)，混勻。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。作者：思存鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。高斯熒光素酶近年來，其他熒光素酶（例如高斯熒光素酶）的使用有所增加，因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小，并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì)，可通過氧氣催化腔腸素氧化，產(chǎn)生光。來自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（#AAT-12530）使用專有的發(fā)光配方來定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí)，產(chǎn)sheng發(fā)光產(chǎn)物，該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定試劑盒特點(diǎn)：提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度。

    2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇**酸三(環(huán)已胺)鹽PEP病毒保存液肝素鋰乙二胺四乙酸二鉀/EDTA二鉀血清分離膠/血液分離膠肝素抗凝劑乙二胺四乙酸三鉀/EDTA三鉀血液促凝劑高效促凝粉高效硅化劑水溶性硅化劑草酸鉀鈣離子螫合抗凝劑弱效抗凝劑吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4結(jié)合物吖啶酯-T3結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-N-乙胺基馬來酰亞胺吖啶磺酰胺鹽-T4結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-T3結(jié)合物生物素-T4結(jié)合物化學(xué)發(fā)光分析試劑及標(biāo)記物生物素-T3結(jié)合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲，游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素運(yùn)輸和保存冰袋運(yùn)輸；-20℃干燥避光保存；有效期一年。使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鈉鹽，配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×)，混勻。立即使用。光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。

    重組為一個(gè)明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低，從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測(cè)定；也可以和HiBiT一樣高，從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究，我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測(cè)且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽，具有多種功能，例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時(shí)，可以創(chuàng)建內(nèi)源性報(bào)告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展，人們認(rèn)識(shí)到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測(cè)定的組分檢測(cè)多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺(tái)（現(xiàn)稱為“Lumit”）提供了具有高靈敏度的簡(jiǎn)化免疫檢測(cè)法。熒光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢，而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）。熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試哪個(gè)公司好？連云港熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽活題成像原理

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    可用熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)靈敏方便地測(cè)定熒光素酶基因的表達(dá)。熒光素酶報(bào)告基因有許多優(yōu)點(diǎn)：①非放射性；②比CAT及其他報(bào)告基因速度快；③比CAT靈敏100倍；④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時(shí)，在植物中的半衰期為3．5小時(shí)。由于半衰期短，故啟動(dòng)子的改變會(huì)即時(shí)導(dǎo)致熒光素酶活性的改變，而熒光素酶不會(huì)積累。相反，CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時(shí)。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內(nèi)，熒光信號(hào)強(qiáng)度與酶濃度成正比。在理想條件下，可檢測(cè)到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測(cè)步驟：1．用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測(cè)啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。2．設(shè)計(jì)引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動(dòng)子片段，將此片段插入到熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒（pGL3-basic）中。3．篩選陽性克隆，測(cè)序。擴(kuò)增克隆并提純質(zhì)粒備用。4．?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒，提純備用。同時(shí)準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對(duì)照，提純備用。5．培養(yǎng)293（或其它目的細(xì)胞），并接種于24孔板中，生長(zhǎng)10-24小時(shí)（80%匯合度）。6．將報(bào)告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。7．提取蛋白并用于熒光素酶檢測(cè)。8．加入底物，測(cè)定熒光素酶的活性。9．計(jì)算相對(duì)熒光強(qiáng)度，并與空載對(duì)照比較。6羧基熒光素