上海體外研究D-熒光素鉀鹽活題成像

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-08-05

    故根據(jù)熒光反應(yīng)的情況可以檢測(cè)樣品中的微生物含量。APT熒光檢測(cè)儀***用于食品、飲用水、餐飲器具等的微生物快速檢測(cè)。1970年,科學(xué)家***次測(cè)定了螢火蟲熒光素酶的結(jié)構(gòu);1985年,科學(xué)家***克隆了一種螢火蟲熒光素酶基因,并在大腸桿菌中表達(dá),從而得到了具有活性的熒光素酶;1986年,科學(xué)家們測(cè)定了該種螢火蟲熒光素酶的基因序列。隨后,各種螢火蟲熒光素酶基因相繼克隆成功,熒光素酶的研究和應(yīng)用不斷發(fā)展。目前,熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用到醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)等許多領(lǐng)域。以醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?yàn)槔?,專家們將熒光素酶基因嵌入?細(xì)胞中,再注入熒光素,使*細(xì)胞發(fā)光,通過(guò)探測(cè)熒光,就能監(jiān)測(cè)*細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。同理,用這種方法能對(duì)致病基因、***免疫機(jī)制等進(jìn)行研究,對(duì)某些疾病進(jìn)行診斷,監(jiān)測(cè)疫苗、藥物和治療方法的效力。熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽。上海體外研究D-熒光素鉀鹽活題成像

    按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,以小鼠為例,每只小鼠體重假定20g,每只小鼠用量3mg;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期)后進(jìn)行成像分析。注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。注意事項(xiàng)1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin)、螢光素鉀鹽只是不同別名,以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn)。2)注射方式、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),盡量避免外源ATP的污染,如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水。4)為避免反復(fù)凍融,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,如有條件,可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊4妗?)對(duì)于檢測(cè)靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn),建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6)在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí),應(yīng)使用無(wú)鈣鎂離子的DPBS,因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性,此外鎂離子可能會(huì)對(duì)熒光素的氧化造成影響,從而影響檢測(cè)。7)為了您的安全和健康。上海熒光素酶D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司。

    隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新,保持技術(shù)帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)(LAR)Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測(cè)試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏、非放射性的報(bào)告基因檢測(cè)拉開(kāi)了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報(bào)告基因一起,為研究人員開(kāi)始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)(DLR)DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個(gè)樣本中依次檢測(cè)兩個(gè)報(bào)告基因的試劑。通過(guò)允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化,在提高報(bào)告基因檢測(cè)的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展。此外,pGL3報(bào)告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因,luc+。這個(gè)改造一種報(bào)告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來(lái)被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報(bào)告基因上,通過(guò)生物信息學(xué)和合成方法,實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶(Enliten)基礎(chǔ)上,改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開(kāi)發(fā)是在各種檢測(cè)和儲(chǔ)藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測(cè)的關(guān)鍵。此后。

    請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。8)本產(chǎn)品只作科研用途!D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物,存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下,D-熒光素鉀被氧化,產(chǎn)生藍(lán)綠色的光(560nm),當(dāng)?shù)孜镞^(guò)量時(shí),產(chǎn)生的Chemicalbook光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、哺乳動(dòng)物細(xì)胞的常用報(bào)告基因。由于沒(méi)有背景干擾,因此可以很容易地檢測(cè)出低至。用途D-熒光素鉀鹽是一類在生物體中發(fā)現(xiàn)的能引起生物發(fā)光的雜環(huán)化合物,如螢火蟲。在ATP存在下,螢光素酶將其氧化脫羧后會(huì)發(fā)光?;瘜W(xué)研究中可用于熒光素酶的基板。生物活性D-Luciferin是螢火蟲熒光素酶的底物。體外研究D-luciferinisthenaturalsubstrateoftheenzymeluciferase(Luc),μM.體內(nèi)研究Bioluminescenceimaging(BLI)usingthefireflyluciferase(Fluc)(5,10,15,and20min)μLofD-luciferin(intraperitoneallyorintravenously)stocksolutionpergramofbodyweight:normally~200μLfora20gmouseforastandard150mg/(eitherPotassiumorSodiumSalt)atroomtemperatureanddissolveindPBS。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試工作液是先用現(xiàn)配。

    D-熒光素鉀鹽是一種化學(xué)品。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是體內(nèi)活題成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過(guò)量時(shí),產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見(jiàn)下圖)。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,構(gòu)建原位腫大的瘤模型,之后注入熒光素底物,通過(guò)IVIS系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)光強(qiáng)度變化,從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評(píng)價(jià)等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)指示能量或生命體征。注:在抗腫大的瘤藥物藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)中,由于生物自發(fā)光檢測(cè)需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定腫大的瘤大小,受腫大的瘤生長(zhǎng)所發(fā)生的腫大的瘤內(nèi)部壞死影響,生物自發(fā)光并不能很覆蓋面廣的評(píng)價(jià)腫大的瘤生長(zhǎng),在抗腫大的瘤藥效評(píng)價(jià)有較高要求的實(shí)驗(yàn)中,建議使用小動(dòng)物核磁成像系統(tǒng)檢測(cè)腫大的瘤生長(zhǎng)。D-熒光素也常用于體外研究。D-熒光素鉀鹽使用濃度怎么樣?專業(yè)做D-熒光素鉀鹽濃度

D-熒光素鉀鹽運(yùn)輸條件是4℃冰袋運(yùn)輸。上海體外研究D-熒光素鉀鹽活題成像

    而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生螢光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的螢光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng)。**為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,而其所采用不同的螢光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的螢光素酶,能夠催化同一螢光素底物,而發(fā)出不同顏色的螢光。螢火蟲有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲)則有更多,因此它們的螢光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。如今研究得**透徹的螢光素酶是來(lái)自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyralis)。[1]螢光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成,并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn)。螢光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成螢光素酶。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段,可以對(duì)整個(gè)動(dòng)物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析:將不同類型的細(xì)胞(骨髓干細(xì)胞、T細(xì)胞等)標(biāo)記上(即表達(dá))螢光素酶。上海體外研究D-熒光素鉀鹽活題成像