宿遷ATPD-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    LAR）Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測(cè)試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏、非放射性的報(bào)告基因檢測(cè)拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報(bào)告基因一起，為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具。[1]1995Dual-Luciferase?報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)（DLR）DLR是第一種允許在單個(gè)樣本中依次檢測(cè)兩個(gè)報(bào)告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化，在提高報(bào)告基因檢測(cè)的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展。此外，pGL3報(bào)告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因，luc+。這個(gè)改造一種報(bào)告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報(bào)告基因上，通過生物信息學(xué)和合成方法，實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測(cè)和儲(chǔ)藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測(cè)的關(guān)鍵。此后，通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測(cè)的信號(hào)動(dòng)力學(xué)，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測(cè)。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡(jiǎn)化了樣品處理。D-熒光素鉀鹽熒光素酶和ATP水平分析。宿遷ATPD-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn)，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因，即NanoLuc?螢光素酶。這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨(dú)特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著范圍廣的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測(cè)定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)?？蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測(cè)量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè)。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生，Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大，更精細(xì)的NanoLuc?亞基，LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合。南京專業(yè)做D-熒光素鉀鹽試劑D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。

    從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的***功效等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級(jí)純（）應(yīng)用：1）活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析；2）***用于報(bào)告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析；Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測(cè)1）配制成100mM的儲(chǔ)存液（200×，濃度30mg/ml）。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液，配制工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無殘留。4）圖像分析前立即向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析（或者細(xì)胞放在37℃短時(shí)間孵育后檢測(cè)可增強(qiáng)信號(hào)）。D-熒光素鉀鹽注：螢光素、螢光素酶、螢火蟲螢光素酶、螢光素鉀鹽、螢光素鉀鹽鹽也經(jīng)常被稱作熒光素、熒光素酶、螢火蟲熒光素酶、熒光素鉀鹽、熒光素鈉鹽。Protocol2：Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1）用無菌的DPBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL)，。一旦使用，保持冰冷且避光。

    GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲，游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素活題成像用D-luciferin,potassiumsalt熒光素鉀鹽介紹一、活題成像技術(shù)簡(jiǎn)介活題生物發(fā)光成像技術(shù)能夠讓研究人員直接快速的測(cè)量各種哎癥模型中腫大的瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移以及對(duì)藥物的反應(yīng)。在藥效學(xué)評(píng)價(jià)方面，熒光素酶哎癥模型可用于哎癥體內(nèi)用藥在整體動(dòng)物水平上進(jìn)行長(zhǎng)期療效跟蹤觀察。利用無創(chuàng)傷活題成像對(duì)哎細(xì)胞生長(zhǎng)的檢測(cè)，可對(duì)哎癥治的好之前和過程中的哎細(xì)胞的變化進(jìn)行實(shí)時(shí)觀測(cè)和評(píng)估。熒光素酶的發(fā)光是生物發(fā)光，不需要激發(fā)光，但需要底物熒光素(D-Luciferin)。熒光素酶的底物熒光素，約280道爾頓。熒光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的，約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身。熒光素。D-熒光素鉀鹽檢測(cè)是個(gè)人合作嗎？

    室溫培育30min后加入細(xì)胞孔板中，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。2)單克隆細(xì)胞篩選轉(zhuǎn)染24h后胰酶消化細(xì)胞并按1∶6比例接種到新6孔板中，同時(shí)加入實(shí)驗(yàn)確定的濃度G418，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細(xì)胞抗性克隆的出現(xiàn)。分別挑選單一抗性克隆至96孔板，待其逐漸增殖后轉(zhuǎn)入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng)。3)熒光素酶活性鑒定陽性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時(shí)用LuciferaseAs-sayAystem檢測(cè)熒光素酶活性。檢測(cè)時(shí)，各克隆按1×105個(gè)/孔接種到24孔板，24h后細(xì)胞裂解液裂解12000rpm，4℃離心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物，停留2s后，取10s的熒光值（RLU），每個(gè)克隆設(shè)3個(gè)復(fù)孔，保留RLU值高的細(xì)胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng)，再過5代后進(jìn)行熒光素酶活性檢測(cè)。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代，熒光素酶活性更高的幾個(gè)克隆MCF-7-luc即為陽性克隆.各不同數(shù)量細(xì)胞克隆的熒光值檢測(cè)7-luc陽性克隆細(xì)胞按細(xì)胞數(shù)將篩出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分別接種到96孔黑板中，另外一組只有細(xì)胞，一組只有培養(yǎng)基作對(duì)照，設(shè)置2個(gè)復(fù)孔，常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次。D-熒光素鉀鹽測(cè)試適用范圍包括哪些？鹽城ATPD-熒光素鉀鹽哪家好

D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光。宿遷ATPD-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè)。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo)，這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力，尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測(cè)原理還促進(jìn)了其它ATP檢測(cè)平臺(tái)的誕生，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶檢測(cè)系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測(cè)除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測(cè)定樣品中螢光素酶或ATP的含量外，還可以檢測(cè)底物（luciferin）濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián)，能對(duì)這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測(cè)，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)隨著對(duì)螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立，一種改進(jìn)的luciferin面世，能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測(cè)應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin，是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn)，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因，即NanoLuc?螢光素酶。宿遷ATPD-熒光素鉀鹽應(yīng)用