D-熒光素鉀鹽是一種化學品。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應用于整個生物技術領域,特別是體內活題成像技術。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當熒光素過量時,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關性(見下圖)。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉染入細胞后構建穩(wěn)定表達細胞株,構建原位腫大的瘤模型,之后注入熒光素底物,通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強度變化,從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展狀態(tài)或進行藥物藥效評價等。也可以利用ATP對此反應體系的影響,根據(jù)生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征。注:在抗腫大的瘤藥物藥效評價試驗中,由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達標定腫大的瘤大小,受腫大的瘤生長所發(fā)生的腫大的瘤內部壞死影響,生物自發(fā)光并不能很覆蓋面廣的評價腫大的瘤生長,在抗腫大的瘤藥效評價有較高要求的實驗中,建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長。D-熒光素也常用于體外研究。D-熒光素鉀鹽的發(fā)射波長是多少?氨基熒光素
Q:熒光素酶作為報告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢?Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上,同時具有更寬的動態(tài)范圍,便于數(shù)值分析比較,不需要熒光顯微鏡,而且在***實驗中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白,同時由于沒有內源活性、其本底信號很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢在于可以進行失蹤定位,并且其觀測不需裂解細胞,方便進行適時觀察。Q:海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比,相對活性如何?在氧、鎂和ATP的存在下,螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素,而來源于海洋腔腸(Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報告基因技術(Dual-reporterassays),結合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試。Q:雙熒光素酶報告基因實驗轉染效率很低而且復孔重復不出來是什么原因?轉染效率低的話可以從三個方面改善,首先要確保細胞狀態(tài)是好的,通常我們選出處于分裂期的細胞,另外陽性對照您可以選擇過表達的熒光蛋白質粒,還有就是DNA的質量尤為重要,更好是先酶切驗證。這個實驗檢測結果很靈敏,有一定差異是正常的,通常只要確保它在一個數(shù)量級之內即可。如果差異超出這個范圍可以從兩方面改善,一是記住保持樣本的均一性。南通D-熒光素鉀鹽活題成像原理D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長是多長?
SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol純度:高級純()應用:1)體外化學發(fā)光分析(invitro);2)***成像實驗(invivo);3)高靈敏度ATP分析;步驟:Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1)用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽,配制成100mM的儲存液(200×,濃度30mg/ml)。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2)用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)。3)去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細胞內添加1×熒光素工作液,然后進行圖像分析。Protocol2:Invivoanalysis/***成像分析1)用無菌的PBS(w/oMg2+、Ca2+)配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL),。一旦使用,保持冰冷且避光。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應用于整個生物技術領域,尤其是體內***成像技術。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素(底物)能夠被氧化發(fā)光(見下圖)。當熒光素過量時,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關性。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的質粒轉染入細胞后,導入研究動物如大、小鼠體內,之后注入熒光素,通過生物發(fā)光成像技術(BLI)來檢測光強度變化。
4)待圖像分析前,向細胞內添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,然后進行圖像分析。2.活ti成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射,以小鼠為例,每只小鼠體重假定20g,每只小鼠用量3mg;4)注射入體內10-15min(待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期)后進行成像分析。注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線,從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期。注意事項1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin)、螢光素鉀鹽只是不同別名,以CAS號115144-35-9為準。2)注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線,確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間。3)如果要進行ATP的檢測,盡量避免外源ATP的污染,如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,在進行熒光素的溶解時應使用ATP-free無菌水。4)為避免反復凍融,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,如有條件,可以對儲存液充氮氣或氬氣后保存。D-熒光素鉀鹽的使用說明。
故根據(jù)熒光反應的情況可以檢測樣品中的微生物含量。APT熒光檢測儀***用于食品、飲用水、餐飲器具等的微生物快速檢測。1970年,科學家***次測定了螢火蟲熒光素酶的結構;1985年,科學家***克隆了一種螢火蟲熒光素酶基因,并在大腸桿菌中表達,從而得到了具有活性的熒光素酶;1986年,科學家們測定了該種螢火蟲熒光素酶的基因序列。隨后,各種螢火蟲熒光素酶基因相繼克隆成功,熒光素酶的研究和應用不斷發(fā)展。目前,熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術已經(jīng)廣泛應用到醫(yī)學、生命科學、環(huán)境科學、微生物學等許多領域。以醫(yī)學領域為例,**們將熒光素酶基因嵌入到*細胞中,再注入熒光素,使*細胞發(fā)光,通過探測熒光,就能監(jiān)測*細胞的擴散和轉移。同理,用這種方法能對致病基因、***免疫機制等進行研究,對某些疾病進行診斷,監(jiān)測疫苗、藥物和治療方法的效力。D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。宿遷熒光素酶D-熒光素鉀鹽活題成像原理
D-熒光素鉀鹽的活題成像技術。氨基熒光素
在食品衛(wèi)生領域由于ATP生物發(fā)光技術無需培養(yǎng)過程,操作簡便、靈敏度高,數(shù)分鐘內可得到結果,具有其它微生物檢測方法無法比擬的優(yōu)勢,是目前檢測微生物更快的方法。熒光素是更受歡迎的多功能生物熒光底物之一。在螢火蟲和幾種其它甲蟲中發(fā)現(xiàn)了螢火蟲熒光酶/熒光素。通過中間體dioxetanone介導作用,熒光素酶氧化ATPji活的熒光素。螢火蟲熒光素酶在ATP的輔助下氧化熒光素產(chǎn)生熒光。這個反應發(fā)生的幾秒內在560nm處的化學熒光達到更高峰,當熒光素和ATP都超量存在的條件下,發(fā)射光與熒光素酶的活性成比例關系。螢火蟲熒光素酶很早以前就用于與抗體結合形成偶聯(lián)物,作為免疫分析中用熒光素作為底物進行檢測的標簽。與HRP和堿性磷酸酶相比,熒光素酶不耐化學修飾。這個酶的一個特殊的優(yōu)點是,除了高靈敏度外,在哺乳動物組織中內源性熒光素酶的活性很低。熒光素酶另一個重要的作用是用于衛(wèi)生監(jiān)測。熒光素酶/熒光素系統(tǒng)可用于檢測污染,因為產(chǎn)生熒光所需的ATP存在于所以活ti生物中。這種類型的ATP生物熒光特性足以保證對食品表面的檢測,無論是在加工制作工程中設備的污染還是產(chǎn)品的污染都能檢出。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物。氨基熒光素