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而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生螢光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱(chēng),雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的螢光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng)。**為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲(chóng),而其所采用不同的螢光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類(lèi)臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲(chóng)中,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱(chēng)為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲(chóng),含有多種不同的螢光素酶,能夠催化同一螢光素底物,而發(fā)出不同顏色的螢光。螢火蟲(chóng)有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲(chóng)、叩頭蟲(chóng)和相關(guān)昆蟲(chóng))則有更多,因此它們的螢光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。如今研究得**透徹的螢光素酶是來(lái)自Photinini族螢火蟲(chóng)中的北美螢火蟲(chóng)(Photinuspyralis)。[1]螢光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成,并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn)。螢光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成螢光素酶。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段,可以對(duì)整個(gè)動(dòng)物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析:將不同類(lèi)型的細(xì)胞(骨髓干細(xì)胞、T細(xì)胞等)標(biāo)記上(即表達(dá))螢光素酶。D-熒光素鉀鹽使用的是什么技術(shù)?宿遷熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好
我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測(cè)且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,具有多種功能,例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時(shí),可以創(chuàng)建內(nèi)源性報(bào)告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,人們認(rèn)識(shí)到可以利用該系統(tǒng)通過(guò)結(jié)合免疫測(cè)定的組分檢測(cè)多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺(tái)(現(xiàn)稱(chēng)為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡(jiǎn)化免疫檢測(cè)法。螢光素酶(英語(yǔ):Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱(chēng),其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲(chóng)體內(nèi)的螢光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒(méi)有螢光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。螢光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類(lèi)使用的白熾燈,只有約10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。螢光素或螢光素酶不是特定的分子。生物素-4-熒光素做D-熒光素鉀鹽測(cè)試工作液是先用現(xiàn)配。
SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol純度:高級(jí)純()應(yīng)用:1)體外化學(xué)發(fā)光分析(invitro);2)***成像實(shí)驗(yàn)(invivo);3)高靈敏度ATP分析;步驟:Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測(cè)1)用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽,配制成100mM的儲(chǔ)存液(200×,濃度30mg/ml)。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2)用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)。3)去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液,然后進(jìn)行圖像分析。Protocol2:Invivoanalysis/***成像分析1)用無(wú)菌的PBS(w/oMg2+、Ca2+)配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL),。一旦使用,保持冰冷且避光。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,尤其是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素(底物)能夠被氧化發(fā)光(見(jiàn)下圖)。當(dāng)熒光素過(guò)量時(shí),產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后,導(dǎo)入研究動(dòng)物如大、小鼠體內(nèi),之后注入熒光素,通過(guò)生物發(fā)光成像技術(shù)(BLI)來(lái)檢測(cè)光強(qiáng)度變化。
在食品衛(wèi)生領(lǐng)域由于ATP生物發(fā)光技術(shù)無(wú)需培養(yǎng)過(guò)程,操作簡(jiǎn)便、靈敏度高,數(shù)分鐘內(nèi)可得到結(jié)果,具有其它微生物檢測(cè)方法無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì),是目前檢測(cè)微生物更快的方法。熒光素是更受歡迎的多功能生物熒光底物之一。在螢火蟲(chóng)和幾種其它甲蟲(chóng)中發(fā)現(xiàn)了螢火蟲(chóng)熒光酶/熒光素。通過(guò)中間體dioxetanone介導(dǎo)作用,熒光素酶氧化ATPji活的熒光素。螢火蟲(chóng)熒光素酶在ATP的輔助下氧化熒光素產(chǎn)生熒光。這個(gè)反應(yīng)發(fā)生的幾秒內(nèi)在560nm處的化學(xué)熒光達(dá)到更高峰,當(dāng)熒光素和ATP都超量存在的條件下,發(fā)射光與熒光素酶的活性成比例關(guān)系。螢火蟲(chóng)熒光素酶很早以前就用于與抗體結(jié)合形成偶聯(lián)物,作為免疫分析中用熒光素作為底物進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)簽。與HRP和堿性磷酸酶相比,熒光素酶不耐化學(xué)修飾。這個(gè)酶的一個(gè)特殊的優(yōu)點(diǎn)是,除了高靈敏度外,在哺乳動(dòng)物組織中內(nèi)源性熒光素酶的活性很低。熒光素酶另一個(gè)重要的作用是用于衛(wèi)生監(jiān)測(cè)。熒光素酶/熒光素系統(tǒng)可用于檢測(cè)污染,因?yàn)楫a(chǎn)生熒光所需的ATP存在于所以活ti生物中。這種類(lèi)型的ATP生物熒光特性足以保證對(duì)食品表面的檢測(cè),無(wú)論是在加工制作工程中設(shè)備的污染還是產(chǎn)品的污染都能檢出。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物。D-熒光素鉀鹽的活題成像技術(shù)。
酸化后消失,中和或堿化后又出現(xiàn),微溶于乙醇;比較大吸收波長(zhǎng)(水)。中文名稱(chēng):熒光素鈉中文別名:熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名FLUORESCEINSODIUM等級(jí):BS物性數(shù)據(jù)編輯播報(bào)1.性狀:未確定2.密度(g/cm3,25/4℃):.相對(duì)蒸汽密度(g/cm3,空氣=1):未確定4.熔點(diǎn)(oC):3205.沸點(diǎn)(oC,常壓):未確定6.沸點(diǎn)(oC,8kPa):未確定7.折射率:未確定8.閃點(diǎn)(oC):未確定9.比旋光度(o):未確定10.自燃點(diǎn)或引燃溫度(oC):未確定11.蒸氣壓(kPa,25oC):未確定12.飽和蒸氣壓(kPa,60oC):未確定13.燃燒熱(KJ/mol):未確定14.臨界溫度(oC):未確定15.臨界壓力(KPa):未確定16.油水(辛醇/水)分配系數(shù)的對(duì)數(shù)值:未確定17.上限(%,V/V):未確定18.下限(%,V/V):未確定19.溶解性:溶于水及乙醇,帶有強(qiáng)的綠色熒光,水溶性好。D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光。徐州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽活題成像原理
D-熒光素鉀鹽一般都是使用什么技術(shù)。宿遷熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好
Q:熒光素酶作為報(bào)告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢(shì)?Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上,同時(shí)具有更寬的動(dòng)態(tài)范圍,便于數(shù)值分析比較,不需要熒光顯微鏡,而且在***實(shí)驗(yàn)中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白,同時(shí)由于沒(méi)有內(nèi)源活性、其本底信號(hào)很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢(shì)在于可以進(jìn)行失蹤定位,并且其觀測(cè)不需裂解細(xì)胞,方便進(jìn)行適時(shí)觀察。Q:海腎熒光素酶和螢火蟲(chóng)熒光素酶相比,相對(duì)活性如何?在氧、鎂和ATP的存在下,螢火蟲(chóng)熒光素酶作用于甲蟲(chóng)熒光素,而來(lái)源于海洋腔腸(Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報(bào)告基因技術(shù)(Dual-reporterassays),結(jié)合了螢火蟲(chóng)熒光素酶測(cè)試和海腎熒光素酶測(cè)試。Q:雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)轉(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來(lái)是什么原因?轉(zhuǎn)染效率低的話(huà)可以從三個(gè)方面改善,首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的,通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞,另外陽(yáng)性對(duì)照您可以選擇過(guò)表達(dá)的熒光蛋白質(zhì)粒,還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要,更好是先酶切驗(yàn)證。這個(gè)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果很靈敏,有一定差異是正常的,通常只要確保它在一個(gè)數(shù)量級(jí)之內(nèi)即可。如果差異超出這個(gè)范圍可以從兩方面改善,一是記住保持樣本的均一性。宿遷熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好