泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-06-09

    luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示:,在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),生成氧化熒光素(oxyluciferin),分子結(jié)構(gòu)如右圖所示,并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進(jìn)口,產(chǎn)品價(jià)格昂貴。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果。所以,需要國產(chǎn)化的方式生產(chǎn),一方面可以降低成本,一方面可以增強(qiáng)使用效果。作者:科遠(yuǎn)迪鏈接:zhuanlan./p/來源:知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán),非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處。D-luciferin,potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說明書發(fā)光原理哺乳動物生物發(fā)光,一般是將Fireflyluciferase基因(由554個(gè)氨基酸構(gòu)成,約50KD)即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶,培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株,當(dāng)細(xì)胞分裂、轉(zhuǎn)移、分化時(shí),熒光素酶也會得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)?;颉⒓?xì)胞和活題動物都可被熒光素酶基因標(biāo)記。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)后,當(dāng)外源(腹腔或靜脈注射)給予其底物熒光素(D-luciferin,potassiumsalt,以下均簡稱熒光素),即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。所發(fā)的光波長在540-600nm。這種酶在ATP,氧存在的條件下,催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光。D-熒光素鉀鹽的使用說明。泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    具體實(shí)驗(yàn)流程:注:該操作流程通常用來檢測轉(zhuǎn)染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細(xì)胞中熒光素酶表達(dá)的活性,不適用于對細(xì)菌熒光素酶進(jìn)行檢測。1.實(shí)驗(yàn)***天,消化并接種細(xì)胞(根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇合適的細(xì)胞)于35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿,置于5%CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。2.等細(xì)胞密度達(dá)到70%時(shí)用Luciferase報(bào)告基因質(zhì)粒、LacZ的表達(dá)質(zhì)粒及其它質(zhì)粒(根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)確定)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞(根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇轉(zhuǎn)染方法,如磷酸鈣沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可)。3.轉(zhuǎn)染24-36h后,吸取培養(yǎng)液,用預(yù)冷的PBS(無鈣和鎂離子)洗滌細(xì)胞。注:熒光酶的酶促反應(yīng)會被痕量的鈣所抑制,故用磷酸鈣轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在收集細(xì)胞前應(yīng)充分洗滌除去含鈣介質(zhì)。4.在每個(gè)培養(yǎng)皿中加入350μl預(yù)冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細(xì)胞。5.在細(xì)胞裂解期間,準(zhǔn)備足量的ml微量離心管,將ATPbuffer與luciferinbuffer以1:,每管100μl。6.依次取等體積的細(xì)胞裂解液(100μl)至步驟5中的離心管中,迅速混勻,在發(fā)光儀(Luminometer)上讀取吸光值。注:發(fā)光反應(yīng)會迅速衰減,將細(xì)胞裂解液加入反應(yīng)液后5s內(nèi)必須讀取吸光值。7.確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后?;窗矡晒馑谼-熒光素鉀鹽試劑D-熒光素鉀鹽測試方法是體外生物發(fā)光檢測。

    而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲)則有更多,因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyralis)。熒光素酶報(bào)告基因(Luc)是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。熒光素酶是能夠催化不同底物氧化發(fā)光的一類酶,哺乳細(xì)胞無內(nèi)源性熒光素酶。更常用的熒光素酶有細(xì)菌熒光素酶、螢火蟲熒光素酶和Renilla熒光素酶。細(xì)菌熒光素酶對熱敏感,因此在哺乳細(xì)胞的應(yīng)用中受到限制。螢火蟲熒光素酶靈敏度高,檢測線性范圍寬達(dá)7~8個(gè)數(shù)量級,是更常用于哺乳細(xì)胞的報(bào)道基因,用熒光比色計(jì)即可檢測酶活性,因而適用于高通量篩選。隨著具有膜通透性和光裂解作用的螢火蟲熒光素酶的應(yīng)用,無需裂解細(xì)胞即可檢測酶活性。Renilla熒光素酶催化腸腔(coelenterazine)氧化,產(chǎn)物可透過生物膜,可能是更適用于活細(xì)胞的報(bào)告分子。將熒光素酶報(bào)告基因載體轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。

    螢光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶,螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍(lán)色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期,這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺。1991年,Promega發(fā)布了***代螢光素酶分析產(chǎn)品,并啟動了基于螢光素酶的進(jìn)一步創(chuàng)新計(jì)劃,通過持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù)。Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月,Promega***提出螢火蟲螢光素酶(Luc)作為一種新興報(bào)告基因技術(shù)的應(yīng)用可能性。當(dāng)時(shí)的人們認(rèn)為,螢火蟲螢光素酶具備的生物發(fā)光特性、極高的靈敏度和快速簡單的檢測流程等特點(diǎn),可能會對分子生物學(xué)家的研究產(chǎn)生重要的影響。幾個(gè)月后,***代螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因載體和檢測試劑在Promega誕生,使這項(xiàng)新技術(shù)正式并更***地為全球研究人員服務(wù)。隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新,保持技術(shù)***的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。[1]1991螢光素酶檢測系統(tǒng)。做D-熒光素鉀鹽測試哪個(gè)公司好?

    酸化后消失,中和或堿化后又出現(xiàn),微溶于乙醇;比較大吸收波長(水)。中文名稱:熒光素鈉中文別名:熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名FLUORESCEINSODIUM等級:BS物性數(shù)據(jù)編輯播報(bào)1.性狀:未確定2.密度(g/cm3,25/4℃):.相對蒸汽密度(g/cm3,空氣=1):未確定4.熔點(diǎn)(oC):3205.沸點(diǎn)(oC,常壓):未確定6.沸點(diǎn)(oC,8kPa):未確定7.折射率:未確定8.閃點(diǎn)(oC):未確定9.比旋光度(o):未確定10.自燃點(diǎn)或引燃溫度(oC):未確定11.蒸氣壓(kPa,25oC):未確定12.飽和蒸氣壓(kPa,60oC):未確定13.燃燒熱(KJ/mol):未確定14.臨界溫度(oC):未確定15.臨界壓力(KPa):未確定16.油水(辛醇/水)分配系數(shù)的對數(shù)值:未確定17.上限(%,V/V):未確定18.下限(%,V/V):未確定19.溶解性:溶于水及乙醇,帶有強(qiáng)的綠色熒光,水溶性好。D-熒光素鉀鹽的測試方法有哪幾種?徐州熒光素酶D-熒光素鉀鹽公司

D-熒光素鉀鹽測試需要滿足哪些條件?泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    附錄ⅧB),與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液制成的對照液比較,不得更濃()。干燥失重取本品,在105℃干燥至恒重,減失重量不得過%(附錄ⅧL)。鋅鹽取本品,加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后,加稀鹽酸2ml,搖勻,濾過,濾液中加亞鐵**鉀試液1ml,不得發(fā)生渾濁。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,點(diǎn)于濾紙上,即生成黃色斑點(diǎn),趁濕置溴蒸氣中,1分鐘后再使與氨蒸氣接觸,斑點(diǎn)即變?yōu)樯罘奂t色。(2)本品的水溶液顯強(qiáng)烈的熒光,用大量的水稀釋后仍極明顯;但加酸使成酸性后,熒光即消失;再加堿使成堿性,熒光又顯出。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)(附錄Ⅲ)。6含量測定編輯取本品約,精密稱定,加水20ml溶解后,加稀鹽酸5ml使熒光素析出,用丁醇-氯仿(1:1)提取4次,每次20ml,合并提取液,用水10ml洗滌,洗液再用異丁醇-氯仿(1:1)5ml振搖提取,合并提取液,置105℃恒重的容器中,在水浴上通風(fēng)蒸發(fā)至干,殘?jiān)靡掖?0ml溶解后,再置水浴上蒸干,并在105℃干燥至恒重,精密稱定,殘?jiān)亓颗c相乘,即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量。熒光素鈉是一種有機(jī)化合物,分子式為C20H10Na2O5,橙紅色粉末,無氣味,有吸濕性;易溶于水,溶液呈黃紅色,并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光。泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

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