我們將與LgBiT具有極強親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質標簽，具有多種功能，例如當與基于CRIPSR的標簽一起使用時，可以創(chuàng)建內源性報告基因模型。[1]2020Lumit?技術隨著NanoBiT?技術的發(fā)展，人們認識到可以利用該系統(tǒng)通過結合免疫測定的組分檢測多種分析物。由此產生的平臺（現稱為“Lumit”）提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法。螢光素酶（英語：Luciferase）是自然界中能夠產生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱，其中**有代表性的是一種學名為Photinuspyralis的螢火蟲體內的螢光素酶。在相應化學反應中，熒光的產生是來自于螢光素的氧化，有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有螢光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應的速率非常慢，而鈣離子的存在常?？梢赃M一步加速反應（與肌肉收縮的情況相似）。螢光生成反應通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應非常節(jié)省能量，幾乎所有輸入反應的能量都被轉化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈，只有約10%的能量被轉化為光，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M。螢光素或螢光素酶不是特定的分子。D-熒光素鉀鹽測試怎么樣？淮安熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽
SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級純（）應用：1）體外化學發(fā)光分析（invitro）；2）***成像實驗（invivo）；3）高靈敏度ATP分析；步驟：Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1）用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽，配制成100mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2）用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細胞內添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析。Protocol2：Invivoanalysis/***成像分析1）用無菌的PBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL)，。一旦使用，保持冰冷且避光。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應用于整個生物技術領域，尤其是體內***成像技術。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光（見下圖）。當熒光素過量時，產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質粒轉染入細胞后，導入研究動物如大、小鼠體內，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術（BLI）來檢測光強度變化。徐州專業(yè)做D-熒光素鉀鹽應用D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司。
后者能夠易溶于水或緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內實驗。配成溶液后的這三種產品，在絕大多數的應用上都沒有實質性的差別。產品性質運輸和保存運輸條件：4℃冰袋運輸；短期保存：4℃干燥避光長期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長期保存：有效期一年工作液：先用現配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30mg/mL的儲存液(100-200×)，混勻。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復凍融。2）用預熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細胞培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細胞內添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min，然后進行圖像分析。2.***成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液，混勻。2）用μm濾膜過濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復凍融。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入體內10-15min（待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期）后進行成像分析。注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期。
可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達。熒光素酶報告基因有許多優(yōu)點：①非放射性；②比CAT及其他報告基因速度快；③比CAT靈敏100倍；④熒光素酶在哺乳細胞中的半衰期為3小時，在植物中的半衰期為3．5小時。由于半衰期短，故啟動子的改變會即時導致熒光素酶活性的改變，而熒光素酶不會積累。相反，CAT在哺乳細胞中的半衰期為50小時。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內，熒光信號強度與酶濃度成正比。在理想條件下，可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測步驟：1．用生物信息學方法分析并預測啟動子區(qū)可能的轉錄因子結合位點。2．設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。3．篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。4．擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒對照，提純備用。5．培養(yǎng)293（或其它目的細胞），并接種于24孔板中，生長10-24小時（80%匯合度）。6．將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。7．提取蛋白并用于熒光素酶檢測。8．加入底物，測定熒光素酶的活性。9．計算相對熒光強度，并與空載對照比較。南京D-熒光素鉀鹽測試公司哪家便宜。
具體實驗流程：注：該操作流程通常用來檢測轉染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細胞中熒光素酶表達的活性，不適用于對細菌熒光素酶進行檢測。1．實驗***天，消化并接種細胞（根據具體實驗選擇合適的細胞）于35mm細胞培養(yǎng)皿，置于5％CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)過夜。2．等細胞密度達到70％時用Luciferase報告基因質粒、LacZ的表達質粒及其它質粒（根據具體實驗確定）共轉染細胞（根據具體實驗選擇轉染方法，如磷酸鈣沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可）。3．轉染24－36h后，吸取培養(yǎng)液，用預冷的PBS（無鈣和鎂離子）洗滌細胞。注：熒光酶的酶促反應會被痕量的鈣所抑制，故用磷酸鈣轉染的細胞在收集細胞前應充分洗滌除去含鈣介質。4．在每個培養(yǎng)皿中加入350μl預冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細胞。5．在細胞裂解期間，準備足量的ml微量離心管，將ATPbuffer與luciferinbuffer以1：，每管100μl。6．依次取等體積的細胞裂解液（100μl）至步驟5中的離心管中，迅速混勻，在發(fā)光儀（Luminometer）上讀取吸光值。注：發(fā)光反應會迅速衰減，將細胞裂解液加入反應液后5s內必須讀取吸光值。7．確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后。D-熒光素鉀鹽使用的是什么技術？上海熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽生物公司
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LAR）Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報告基因一起，為研究人員開始了解基因表達調控因子提供了首要的工具。[1]1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)（DLR）DLR是第一種允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內部歸一化，在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關鍵進展。此外，pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因，luc+。這個改造一種報告基因以實現性能改進的例子后來被進一步應用到pGL4和luc2報告基因上，通過生物信息學和合成方法，實現了更大的改進。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎上，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進行一步法“加樣-讀數”檢測的關鍵。此后，通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進行檢測。而“加樣-讀數”的形式簡化了樣品處理。淮安熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽
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