南通熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    螢火蟲熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號分子，可以用來標記腫瘤細胞.一．細胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報告基因的真核表達重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7，利用G418篩選，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細胞株MCF-7-luc，并在穩(wěn)定表達熒光素酶基因的細胞克隆MCF-7體外評價其發(fā)光能力。通過建立裸鼠移植瘤模型，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長及轉(zhuǎn)移情況，為下一步監(jiān)測裸鼠移植瘤對藥物作用的變化情從而為分析藥物對腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0、200、400、600、800、1000μg/ml設(shè)置6個濃度梯度。在細胞接種24h后，加入6孔板中，每個濃度設(shè)2個孔在10～14d內(nèi)全部死亡。每天觀察細胞生長情況，死亡更低的G418濃度，即為篩選質(zhì)粒轉(zhuǎn)染克隆MCF－7細胞的濃度。1)細胞轉(zhuǎn)染取對數(shù)生長期的MCF－7細胞，將細胞接種于6孔板內(nèi)待細胞融合度達到80%～90%孔培養(yǎng)板中，TM即可轉(zhuǎn)染。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進行轉(zhuǎn)染。在250μl無血清、無雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質(zhì)粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無血清、無雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000，室溫培育5min。將上述2種稀釋液混勻。D-熒光素鉀鹽使用濃度怎么樣？南通熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    每孔加入100μl養(yǎng)24h后，Luciferin使其終濃度為150μg/ml，PBS，再加入D-立即用活題成像系統(tǒng)檢測，分析發(fā)光強度與細胞數(shù)之間的相關(guān)性。4)細胞生長曲線繪制MCF7-luc細胞和作為對照取表達熒光素酶的MCF-7細胞，接種于24孔板，接種密度為2×104/孔。細胞接種后1～7d，每天胰蛋白酶消化其中3孔細胞，用細胞計數(shù)儀測定細胞數(shù)。以細胞生長天數(shù)為橫坐標，細胞數(shù)目為縱坐標，分別繪制兩種細胞生長曲線。二．動物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠，4～5周齡，體重（15±2）g，雌雄各3只。取對數(shù)生長期的MCF-7用PBS重懸為2．5×10/ml懸液，每只裸鼠左右背側(cè)近腋部皮下接種100μl，共接種6只。接種后第5d采用德國BERTHOLD公司的活題成像系統(tǒng)檢測信號強度。以后每5d觀測一連續(xù)觀測30d。觀測前每只裸鼠戊巴比妥鈉麻醉（計量為：35mg/kg體重），按150mg/kg體重的量腹腔注射luciferin（invivograde），10min后，進行活題成像觀察皮下腫大的瘤的生長情況，定量分析各時間點的熒光值。繪制腫大的瘤皮下生長曲線.MCF-7-luc細胞裸鼠皮下移植瘤的病理形態(tài)學(xué)觀察MCF-7-luc細胞裸鼠皮下接種后25d，脫頸處死小鼠，取腫大的瘤組織，制成石蠟切片，切片厚度為3μm。泰州熒光素D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存D-熒光素鉀鹽長期保存是有效期一年。

    但是上一次底物的殘留曲線可以知道，可以控制對下一次觀察結(jié)果的影響。儲存與運輸一般放在-20℃的冰箱即可，半年以上不使用放在-80℃的冰箱，溶解配制后放在4℃冰箱，短期運輸放在4℃環(huán)境。建議現(xiàn)用現(xiàn)配，D熒光素鉀鹽在液體中容易降解。應(yīng)用領(lǐng)域腫大的瘤，干細胞，藥物開發(fā)，基因治的好，轉(zhuǎn)基因小鼠，免疫學(xué)等等。英文名字firefly.中文名稱熒光素酶，重組熒光素貨號AAT-12500規(guī)格￥1430/1mL背景資料：熒光素酶是來自北美螢火蟲（Photinuspyralis）中熒光素酶基因的克隆和重組表達，它為實驗研究或者用生物熒光試劑制備試劑盒檢測ATP或者熒光素底物提供了可信度和可靠性。這種重組酶可以克服由天然資源純化獲得熒光素酶時受季節(jié)和地方區(qū)域變化的影響。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)，可通過熒光測定儀設(shè)備測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，常應(yīng)用于啟動子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗證等方向研究。產(chǎn)品形式提供的熒光素酶*重組熒光素*產(chǎn)品為溶液形式。作者：思存鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處。

    熒光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細胞中。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成熒光素酶。間接體外成像是一種強大的研究手段，可以對整個動物體中的細胞群落進行分析：將不同類型的細胞（骨髓干細胞、T細胞等）標記上（即表達）熒光素酶，就可以用高敏感度的CCD相機進行對動物體內(nèi)進行活ti觀察而不會傷害到動物本身。在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以放出熒光，而發(fā)出的光子可以被光敏感元件，如熒光探測器或改進后的光學(xué)顯微鏡探測到。這就使得對包括影響在內(nèi)的多種生命活動進程進行觀察成為可能。例如，熒光素酶可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂。法醫(yī)可以用含有熒光素酶的溶液來檢測犯罪現(xiàn)場中殘留的血跡。醫(yī)院用熒光素酶的發(fā)光來發(fā)現(xiàn)特定的疾病。熒光素酶還可以作為“報告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中，例如，用于在轉(zhuǎn)染過熒光素酶的細胞中檢測特定啟動子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測細胞內(nèi)的ATP的水平；這一技術(shù)被稱為報告基因檢測法或熒光素酶檢測法（LuciferaseAssay）。熒光素酶是一個熱敏感蛋白，因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過程中熱休克蛋白的保護能力。D-熒光素鉀鹽運輸條件是4℃冰袋運輸。

    SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級純（）應(yīng)用：1）體外化學(xué)發(fā)光分析（invitro）；2）***成像實驗（invivo）；3）高靈敏度ATP分析；步驟：Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1）用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽，配制成100mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2）用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析。Protocol2：Invivoanalysis/***成像分析1）用無菌的PBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL)，。一旦使用，保持冰冷且避光。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光（見下圖）。當熒光素過量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細胞后，導(dǎo)入研究動物如大、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測光強度變化。D-熒光素也常用于身體的外部研究。鹽城熒光素D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商

D-熒光素鉀鹽測試需要滿足哪些條件？南通熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進行半衰期為一小時的“輝光型”信號在大量檢測板之間提供一致的信號與標準細胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑（Renillareniformis）分離的36kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比，海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素，產(chǎn)生480nm的藍光。與螢火蟲螢光素酶類似，海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報告檢測。Amplite?海腎熒光素酶報告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報告基因檢測試劑盒（#AAT-12535）提供了一種快速，靈敏的方法，可以使用專有的發(fā)光配方在基于細胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性，與海腎螢光素酶相互作用后，該試劑產(chǎn)生具有強光的產(chǎn)物。Amplite?海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒特點：該測定法與標準細胞生長培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達或基因表達每個試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分各類螢光素酶底物，輔因子和物理特性：近幾十年來，腺苷三磷酸(ATP)生物發(fā)光技術(shù)得到了很大的發(fā)展，已經(jīng)在細胞增殖、細胞毒性和生物量計數(shù)等方面廣泛應(yīng)用。南通熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

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