在食品衛(wèi)生領域由于ATP生物發(fā)光技術無需培養(yǎng)過程，操作簡便、靈敏度高，數(shù)分鐘內(nèi)可得到結果，具有其它微生物檢測方法無法比擬的優(yōu)勢，是目前檢測微生物更快的方法。熒光素是更受歡迎的多功能生物熒光底物之一。在螢火蟲和幾種其它甲蟲中發(fā)現(xiàn)了螢火蟲熒光酶/熒光素。通過中間體dioxetanone介導作用，熒光素酶氧化ATPji活的熒光素。螢火蟲熒光素酶在ATP的輔助下氧化熒光素產(chǎn)生熒光。這個反應發(fā)生的幾秒內(nèi)在560nm處的化學熒光達到更高峰，當熒光素和ATP都超量存在的條件下，發(fā)射光與熒光素酶的活性成比例關系。螢火蟲熒光素酶很早以前就用于與抗體結合形成偶聯(lián)物，作為免疫分析中用熒光素作為底物進行檢測的標簽。與HRP和堿性磷酸酶相比，熒光素酶不耐化學修飾。這個酶的一個特殊的優(yōu)點是，除了高靈敏度外，在哺乳動物組織中內(nèi)源性熒光素酶的活性很低。熒光素酶另一個重要的作用是用于衛(wèi)生監(jiān)測。熒光素酶/熒光素系統(tǒng)可用于檢測污染，因為產(chǎn)生熒光所需的ATP存在于所以活ti生物中。這種類型的ATP生物熒光特性足以保證對食品表面的檢測，無論是在加工制作工程中設備的污染還是產(chǎn)品的污染都能檢出。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物。做D-熒光素鉀鹽測試工作液是先用現(xiàn)配。蘇州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽使用說明
室溫培育30min后加入細胞孔板中，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。2)單克隆細胞篩選轉染24h后胰酶消化細胞并按1∶6比例接種到新6孔板中，同時加入實驗確定的濃度G418，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細胞抗性克隆的出現(xiàn)。分別挑選單一抗性克隆至96孔板，待其逐漸增殖后轉入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng)。3)熒光素酶活性鑒定陽性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時用LuciferaseAs-sayAystem檢測熒光素酶活性。檢測時，各克隆按1×105個/孔接種到24孔板，24h后細胞裂解液裂解12000rpm，4℃離心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物，停留2s后，取10s的熒光值（RLU），每個克隆設3個復孔，保留RLU值高的細胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng)，再過5代后進行熒光素酶活性檢測。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代，熒光素酶活性更高的幾個克隆MCF-7-luc即為陽性克隆.各不同數(shù)量細胞克隆的熒光值檢測7-luc陽性克隆細胞按細胞數(shù)將篩出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分別接種到96孔黑板中，另外一組只有細胞，一組只有培養(yǎng)基作對照，設置2個復孔，常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次。徐州熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽供應商D-熒光素鉀鹽的配置是什么？
可用于需要低檢測限的測定具有用于研究基因調(diào)控和功能的快速，簡單且均一的生物發(fā)光測定法與標準細胞生長培養(yǎng)基的使用兼容高斯熒光素酶近年來，其他熒光素酶（例如高斯熒光素酶）的使用有所增加，因為這些報告基因較小，并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質，可通過氧氣催化腔腸素氧化，產(chǎn)生光。來自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達后可有效地從哺乳動物細胞中分泌出來。Amplite?高斯熒光素酶報告基因檢測試劑盒使用專有的發(fā)光配方來定量細胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當該試劑與高斯熒光素酶相互作用時，產(chǎn)***光產(chǎn)物，該發(fā)光產(chǎn)物提供強發(fā)光。Amplite高斯熒光素酶報告基因測定試劑盒特點：提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度，可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進行半衰期為一小時的“輝光型”信號在大量檢測板之間提供一致的信號與標準細胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑（Renillareniformis）分離的36kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比，海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素，產(chǎn)生480nm的藍光。與螢火蟲螢光素酶類似。
SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級純（）應用：1）體外化學發(fā)光分析（invitro）；2）***成像實驗（invivo）；3）高靈敏度ATP分析；步驟：Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1）用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽，配制成100mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2）用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析。Protocol2：Invivoanalysis/***成像分析1）用無菌的PBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL)，。一旦使用，保持冰冷且避光。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應用于整個生物技術領域，尤其是體內(nèi)***成像技術。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光（見下圖）。當熒光素過量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關性。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質粒轉染入細胞后，導入研究動物如大、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術（BLI）來檢測光強度變化。D-熒光素鉀鹽長期保存條件是-20℃干燥避光。
而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種，而叩甲總科（包括螢火蟲、叩頭蟲和相關昆蟲）則有更多，因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）。熒光素酶報告基因（Luc）是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。熒光素酶是能夠催化不同底物氧化發(fā)光的一類酶，哺乳細胞無內(nèi)源性熒光素酶。更常用的熒光素酶有細菌熒光素酶、螢火蟲熒光素酶和Renilla熒光素酶。細菌熒光素酶對熱敏感，因此在哺乳細胞的應用中受到限制。螢火蟲熒光素酶靈敏度高，檢測線性范圍寬達7～8個數(shù)量級，是更常用于哺乳細胞的報道基因，用熒光比色計即可檢測酶活性，因而適用于高通量篩選。隨著具有膜通透性和光裂解作用的螢火蟲熒光素酶的應用，無需裂解細胞即可檢測酶活性。Renilla熒光素酶催化腸腔（coelenterazine）氧化，產(chǎn)物可透過生物膜，可能是更適用于活細胞的報告分子。將熒光素酶報告基因載體轉染到細胞中。D-熒光素鉀鹽運輸條件是4℃冰袋運輸。宿遷螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽活題成像
D-熒光素鉀鹽使用的注意事項。蘇州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽使用說明
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