熒光定量PCR儀具有高靈敏度、高特異性和精確定量等特點,被廣泛應(yīng)用于多個行業(yè),以下是一些主要的應(yīng)用行業(yè):食品行業(yè)食品安全檢測:可檢測食品中的致病微生物,如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等,以及食品中的轉(zhuǎn)基因成分,保障食品安全,維護(hù)消費(fèi)者的健康權(quán)益。食品溯源:通過對食品中特定 DNA 序列的檢測和分析,實現(xiàn)對食品原料的來源追溯和產(chǎn)品質(zhì)量的全程監(jiān)控,有助于建立健全食品質(zhì)量安全追溯體系。環(huán)境監(jiān)測行業(yè)微生物群落分析:對環(huán)境樣品中的微生物進(jìn)行定量分析和群落結(jié)構(gòu)研究,了解不同環(huán)境中微生物的種類、數(shù)量和分布規(guī)律,評估環(huán)境質(zhì)量和生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性。污染物降解菌檢測:篩選和檢測環(huán)境中具有污染物降解能力的微生物菌株,為生物修復(fù)技術(shù)提供理論依據(jù)和菌種資源,推動環(huán)境污染治理和生態(tài)修復(fù)工作的開展。對于一些隱性遺傳疾病,熒光定量 PCR 儀可用于檢測個體是否為致病基因的攜帶者。常州HEX熒光定量PCR儀價格實惠
ROX通常并不指代一種特定的熒光定量PCR儀,而是一種熒光染料,在熒光定量PCR中常被用作被動參考染料。其作用是用于校正熒光信號,減少孔與孔之間由于加樣誤差、反應(yīng)體積差異、光學(xué)系統(tǒng)的微小變化以及蒸發(fā)等因素導(dǎo)致的熒光信號波動,提高實驗的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。在實時熒光定量PCR儀的使用中,很多儀器都可以兼容ROX染料進(jìn)行信號校正。例如,賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABI的7500、7900等型號的熒光定量PCR儀都支持ROX染料。不同的熒光定量PCR儀在檢測通道、光學(xué)系統(tǒng)、熱循環(huán)性能等方面存在差異,但只要其具備相應(yīng)的熒光檢測通道,能夠檢測ROX染料的熒光信號,并在軟件中支持以ROX信號作為參考進(jìn)行數(shù)據(jù)校正,就可以在實驗中使用ROX染料來輔助提高定量分析的準(zhǔn)確性。例如,QuantStudio1實時熒光定量PCR儀采用新型Optiflex光學(xué)檢測架構(gòu),提供FAM、VIC和ROX三種常用激發(fā)和發(fā)射濾光片,實現(xiàn)3重實時定量分析。徐州HEX熒光定量PCR儀微量檢測結(jié)核分枝桿菌的檢測,傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法需要數(shù)周時間;
熒光染料法原理:一些熒光染料(如 SYBR Green I)能特異性地結(jié)合到雙鏈 DNA 上。在 PCR 反應(yīng)體系中,隨著 DNA 擴(kuò)增產(chǎn)物的不斷增加,與雙鏈 DNA 結(jié)合的熒光染料也越來越多,熒光信號強(qiáng)度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關(guān)。通過檢測熒光信號的強(qiáng)度變化,就可以實時監(jiān)測 PCR 反應(yīng)的進(jìn)程。過程:在 PCR 反應(yīng)的每一個循環(huán)中,當(dāng)溫度降低到退火溫度時,引物與模板結(jié)合,DNA 聚合酶開始延伸引物,合成新的 DNA 鏈。此時,熒光染料會結(jié)合到新合成的雙鏈 DNA 上,儀器會在特定的時間點檢測熒光信號的強(qiáng)度。隨著循環(huán)次數(shù)的增加,熒光信號逐漸增強(qiáng),當(dāng)信號強(qiáng)度達(dá)到設(shè)定的閾值時,對應(yīng)的循環(huán)數(shù)被稱為閾值循環(huán)數(shù)(Ct 值)。定量依據(jù):在一定的范圍內(nèi),起始模板量與 Ct 值呈對數(shù)關(guān)系。即起始模板量越多,達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)越少,Ct 值越小;反之,起始模板量越少,Ct 值越大。通過已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,再根據(jù)待測樣本的 Ct 值,就可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出其對應(yīng)的起始模板量。
基因表達(dá)分析:可以精確測定不同組織、不同發(fā)育階段以及不同生理狀態(tài)下基因的表達(dá)水平,幫助研究人員了解基因在生物體內(nèi)的功能和調(diào)控機(jī)制。例如,研究胚胎發(fā)育過程中某些關(guān)鍵基因的表達(dá)變化,揭示胚胎發(fā)育的分子機(jī)制?;蚍中停簩魏塑账岫鄳B(tài)性(SNP)等基因變異進(jìn)行分型,用于遺傳疾病的診斷、藥物遺傳學(xué)研究以及生物進(jìn)化分析等。例如,通過檢測個體在特定基因位點上的 SNP 類型,預(yù)測其對某些藥物的反應(yīng),實現(xiàn)個體化用藥。微生物研究:用于對環(huán)境中的微生物進(jìn)行定量分析,了解微生物群落結(jié)構(gòu)和動態(tài)變化。例如,研究土壤、水體等環(huán)境中微生物的種類和數(shù)量,以及在不同環(huán)境條件下微生物群落的演替規(guī)律,為環(huán)境保護(hù)和生態(tài)研究提供依據(jù)。在 PCR 反應(yīng)條件下具有較好的穩(wěn)定性,能夠保證熒光信號的穩(wěn)定輸出,從而實現(xiàn)對核酸模板的準(zhǔn)確定量。
儀器提示或報錯儀器軟件可能會提示光路系統(tǒng)出現(xiàn)故障或異常,如 “熒光信號異?!薄肮饴沸?zhǔn)錯誤” 等報錯信息。這是儀器自身檢測到光路系統(tǒng)存在問題,需要進(jìn)行校準(zhǔn)或維修的直接提示。儀器使用時間和環(huán)境因素使用時間:如果儀器已經(jīng)使用了較長時間,如超過一年且頻繁使用,即使沒有出現(xiàn)明顯的異常現(xiàn)象,也建議按照廠家的建議定期對光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn),以確保儀器始終保持良好的性能。環(huán)境變化:儀器所處的環(huán)境發(fā)生較大變化,如溫度、濕度劇烈波動,或者儀器經(jīng)過搬運(yùn)、移動后,可能會導(dǎo)致光路系統(tǒng)的部件發(fā)生微小位移或性能改變,此時也需要對光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn),以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。具備多個熒光檢測通道,可同時檢測多種熒光染料;SYBR-Green熒光定量PCR儀代理商
在多重 PCR 反應(yīng)中對不同的目標(biāo)序列進(jìn)行特異性標(biāo)記和檢測。常州HEX熒光定量PCR儀價格實惠
熒光定量 PCR 儀是一種通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針,對 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實時監(jiān)測反應(yīng)過程的儀器。儀器特點:高靈敏度和特異性:能檢測極低拷貝數(shù)的核酸模板,對目標(biāo)序列具有高度特異性,可減少假陽性和假陰性結(jié)果。準(zhǔn)確 quantification:通過實時監(jiān)測熒光信號,實現(xiàn)對核酸模板的準(zhǔn)確定量,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。高 throughput:可同時檢測多個樣品,大幅提高檢測效率,節(jié)省時間和成本。高度自動化:具備自動進(jìn)樣、反應(yīng)程序設(shè)置、數(shù)據(jù)采集和分析等功能,操作簡便,減少人為誤差。常州HEX熒光定量PCR儀價格實惠