除了獲得載體的滴度及產(chǎn)量,生產(chǎn)慢病毒更關(guān)心的指標(biāo)主要是各種污染物的去除??侱NA污染的去除百分比在99.1-99.84%,總蛋白污染物的去除百分比在99.85-99.9%。針對(duì)宿主細(xì)胞的DNA(HCD)及蛋白(HCP),有報(bào)道其去除百分比分別為99.8%和99.4%。因?yàn)椴粌H殘存的DNA可能是個(gè)問(wèn)題,而且DNA的大小以及由此引起的可能轉(zhuǎn)移整個(gè)有功能的開(kāi)放閱讀框也是問(wèn)題,因此監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)殘存DNA污染的分子量上限的要求越來(lái)越高。例如,F(xiàn)DA的指南‘生產(chǎn)用于傳染病適應(yīng)癥的病毒疫苗的細(xì)胞基質(zhì)和其他生物材料的特性和鑒定’中說(shuō)明,殘留的細(xì)胞宿主的DNA片段不能超過(guò)一個(gè)功能基因的長(zhǎng)度,估計(jì)在200bp左右。東臺(tái)中鹽核酸酶售后服務(wù)哪家好呢,歡迎咨詢(xún)上海倍篤生物 。安徽中鹽核酸酶70950-150
核酸酶活性受到很多因素影響,如鹽濃度、pH、底物、溫度等。因此,不同客戶(hù)、不同項(xiàng)目中核酸酶的使用條件都不一。目前,生物制藥行業(yè)對(duì)Benonase全能核酸酶的使用比較熟悉,如生理鹽或低鹽濃度、脫鹽操作等。對(duì)于大部分使用Benzonase的項(xiàng)目,使用M-SAN HQ中鹽核酸酶可以完全替代,而且溫度、Mg2+濃度等條件不用做任何調(diào)整,同樣酶量的M-SAN HQ對(duì)宿主細(xì)胞DNA(HCD)的去除效果更好、病毒載體得率更高。經(jīng)過(guò)工藝優(yōu)化后,可以將M-SAN HQ中鹽核酸酶的用量減少到原來(lái)的1/3-1/2,且HCD去除效果及產(chǎn)品得率更高。河南上海倍篤生物中鹽核酸酶70950-160中鹽核酸酶的生產(chǎn)在符合ISO13485:2016體系基礎(chǔ)上,增加了cGMP相應(yīng)要求。
在生物工藝流程中,需要使用核酸酶去除終產(chǎn)品中的核酸污染,而核酸酶作為外源成份,也需要在生產(chǎn)流程中去除。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等。慢病毒LV的pI在6.0-6.5左右,包裝了完整基因組DNA后的AAV病毒顆粒PI大致為5.9,來(lái)自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右,M-SAN HQ中鹽核酸酶pI 8.7左右。因此,在同樣的條件下,從LV/AAV溶液中去除M-SAN HQ中鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底。
ArcticZymes廠家對(duì)鹽活性核酸酶系列產(chǎn)品(Salt Active Nucleases,SANs)的生產(chǎn)及質(zhì)控,在符合ISO13485:2016體系基礎(chǔ)上,增加了cGMP質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),如microbes、endotoxin、蛋白酶等,符合USP-EP要求。廠家提供HQ級(jí)別和GMP級(jí)別的SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶,從成本角度分別滿(mǎn)足臨床前和早期臨床階段、商業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)階段的需求;且GMP級(jí)SAN HQ高鹽核酸酶已完成在FDA的藥物主文件(Drug Master File, DMF)申報(bào)備案,助力加快藥物申報(bào)流程。M-SAN HQ中鹽核酸酶終產(chǎn)品經(jīng)過(guò)0.22μm過(guò)濾;
對(duì)于含包膜的病毒載體,如慢病毒LV、逆轉(zhuǎn)錄病毒RV等,在細(xì)胞培養(yǎng)上清液中收獲。而M-SAN HQ中鹽核酸酶,作為市場(chǎng)上更適合生理鹽條件的核酸酶,所以,M-SAN HQ成了包膜病毒載體生產(chǎn)的更好選擇。優(yōu)勢(shì)在于:1. M-SAN HQ兼容多種細(xì)胞培養(yǎng)體系,在細(xì)胞培養(yǎng)鹽濃度條件下具有更優(yōu)活性;2. M-SAN HQ酶活更高、酶切速度更快,縮短孵育時(shí)間;3. M-SAN HQ能夠高效剪切染色質(zhì)到更小片段,簡(jiǎn)化下游工藝流程;4. 相比Benzonase,M-SAN HQ用量減少1/2-2/3,降低了酶用量及生產(chǎn)成本。浙江中鹽核酸酶款式哪家好呢,歡迎咨詢(xún)上海倍篤生物 。湖北M-SAN HQ中鹽核酸酶
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監(jiān)管部門(mén)對(duì)HCD的殘留量有明確的規(guī)定。美國(guó)FDA發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品HCD殘余限度為 100pg/劑,對(duì)于大劑量生物制品如單克隆抗體,根據(jù)其殘留DNA來(lái)源及給藥途徑,殘留量可放寬至 10ng/劑。細(xì)胞基因藥物終產(chǎn)品的DNA殘留有兩種來(lái)源,分別是宿主細(xì)胞DNA(HCD)和轉(zhuǎn)染用的質(zhì)粒。質(zhì)粒和HCD的存在形式不同,去除效率也差別很大。其中,質(zhì)粒是裸露的DNA雙鏈,帶強(qiáng)負(fù)電荷,通過(guò)色譜純化主要是離子交換能夠很高效去除;HCD則是以核小體緊密折疊形成的染色質(zhì)形式存在,幾乎不以裸DNA形式存在,所以很難去除。安徽中鹽核酸酶70950-150