河南高通量測序分析診斷

來源: 發(fā)布時間:2022-01-11

第二代測序技術(shù)的應(yīng)用:第二代測序技術(shù)(NGS)因其快速和靈敏的檢測特點已成為植物病毒學(xué)研究的強有力工具,這一技術(shù)具有非序列依賴性的優(yōu)勢,能同時檢測植物樣品中可培養(yǎng)和不可培養(yǎng)的、含量高及含量低的所有的DNA病毒、RNA病毒以及類病毒,它的出現(xiàn)極大地變革和推進了病毒的發(fā)現(xiàn)歷程,近期來自浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所等處的研究人員圍繞NGS及其在植物病毒發(fā)掘中的應(yīng)用研究和前景進行概述和展望。對分離培養(yǎng)和臨床標(biāo)本的病毒核酸的測序?qū)嶒灱胺治隽鞒??;跓o差別的樣本處理方式和獨特的生物信息學(xué)分析流程,除了對于被宿主核酸污染的病原微生物/病毒核酸樣本進行全基因組和宏基因組測序之外,未知病原也在探普特有的流程下可以得以鑒別。通過對病毒全基因組高通量測序可以在較短時間內(nèi)獲取病毒的全部基因信息,解釋病毒的來源。河南高通量測序分析診斷

二代測序可以用于對病毒的全基因組進行測序有哪些挑戰(zhàn)?二代測序相較sanger測序,差異主要就是單次運行可以獲得海量的數(shù)據(jù)量,因此也稱為高通量測序。想要通過高通量測序獲得病毒全序列,需要經(jīng)歷:核酸純化-文庫構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這三大基本流程。而高通量測序技術(shù)本身并不是以病毒為目標(biāo)開發(fā)的,因此每個環(huán)節(jié)都是挑戰(zhàn)。核酸純化步驟決定了Input核酸的起始濃度和總量,從而決定了文庫構(gòu)建的成敗、質(zhì)量和產(chǎn)量;文庫的好壞決定了數(shù)據(jù)的質(zhì)量和產(chǎn)出;而數(shù)據(jù)的質(zhì)量產(chǎn)出直接影響分析結(jié)果。樣品一般核酸濃度很低,且?guī)в写罅克拗魑廴荆虼藢嶒灢糠趾头治霾糠侄急容^困難。探普生物基于這些困難點,進行了大量有針對性的研發(fā)和測試,開發(fā)了全套的實驗和分析流程用于對病毒的全基因組進行測序,該流程自運行以來廣受研究者們好評。四川高通量測序服務(wù)病毒全基因組測序具有的特點:專業(yè)化服務(wù)。

高通量基因組測序中,測序深度和覆蓋度指的是:測序深度是指測序得到的總堿基數(shù)與待測基因組大小的比值。假設(shè)一個基因大小為2M,測序深度為10X,那么獲得的總數(shù)據(jù)量為20M。覆蓋度是指測序獲得的序列占整個基因組的比例。由于基因組中的高GC、重復(fù)序列等復(fù)雜結(jié)構(gòu)的存在,測序終拼接組裝獲得的序列往往無法覆蓋有所的區(qū)域,這部分沒有獲得的區(qū)域就稱為。例如一個細(xì)菌基因組測序,覆蓋度是98%,那么還有2%的序列區(qū)域是沒有通過測序獲得的。

高通量測序技術(shù)具有的作用:高通量測序技術(shù)在冠狀病毒的鑒定中發(fā)揮了重要作用,先通過該技術(shù)確認(rèn)了該病原為以前未知的β冠狀病毒,其次確認(rèn)了該病毒與蝙蝠相關(guān)冠狀病毒ZC45和ZXC21密切相關(guān),同源性約為88%,后高通量測序為后續(xù)的診斷提供了強有力的技術(shù)支撐。高通量測序能否定向檢測細(xì)菌病毒等微生物?例如某人有皮膚病,提取組織,能否通過高通量測序來檢測后列出所有的致病菌?;蛘弋?dāng)懷疑的時候,在人體組織中檢測是否有某種特定的細(xì)菌或者病毒。(不求原理),就是想知道現(xiàn)在的測序技術(shù)能否替代傳統(tǒng)臨床檢驗方法。相比傳統(tǒng)培養(yǎng)等方法,對樣本的全微生物檢測,或者特定微生物檢測,基因測序技術(shù)目前的時間消耗,準(zhǔn)確率,和金錢成本大概如何。可以定向檢測,用特異引物就可以。對病毒全基因組進行測序,是利用生物信息分析手段,得到病毒的全基因組序列。

人類的病毒性傳染很普遍,病毒可以通過呼吸道、消化道、皮膚等多種途徑進行傳播,常常會導(dǎo)致嚴(yán)重的公共健康問題,對人類的健康造成威脅。傳統(tǒng)的病毒檢測方法主要依賴于細(xì)胞培養(yǎng)法、抗原抗體結(jié)合法等,這些方法耗時久,靈敏度低,往往不能夠滿足臨床檢測需求。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,PCR方法用于病毒檢測的案例越來越多,但該方法的特異性限制了其同時檢測其它病毒的能力。因此,需要通過新的技術(shù)來實現(xiàn)。隨著二代測序技術(shù)成本的降低與普及,二代測序在臨床病原體檢測方面的優(yōu)勢也越加突顯。該技術(shù)基于二代測序平臺,可以直接從樣本中獲得病原體的核酸序列信息,再通過生物信息學(xué)的方法對得到的序列進行分析,可以快速地對樣本中可能存在的全部病原體進行鑒定,縮短了臨床檢測的周期。測序的完成程度,決定著基因組的下游應(yīng)用。深度測序排行

病毒全基因組測序具有的特點:獨有的一定定量技術(shù),實現(xiàn)病原定量分析。河南高通量測序分析診斷

新一代測序中基因從頭測序和重測序有什么區(qū)別?我要做乙肝病毒DNA全長測序,應(yīng)該選用哪種方法?1、條件不同;從頭測序的條件是不依賴于任何物種基因組;重測序的條件是在已知物種基因組的情況下進行的。2、病毒變異率不同;從頭測序是通過拼接和組裝的方式獲得基因組序列圖譜,病毒變異率很低;重測序可以尋找出大量的單核苷酸多態(tài)性位點,插入缺失位點,結(jié)構(gòu)變異位點,拷貝數(shù)變異等變異信息,從而獲得生物群體的遺傳特征。病毒變異率很高。乙肝病毒在醫(yī)學(xué)上已經(jīng)測過,只需要做重測序就可以。河南高通量測序分析診斷

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