浙江高通量測(cè)序突變分析方法

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2021-12-07

發(fā)現(xiàn)病例的要盡快對(duì)病毒進(jìn)行全基因組測(cè)序的原因是:通過(guò)對(duì)病毒全基因組高通量測(cè)序可以在較短時(shí)間內(nèi)獲取病毒的全部基因信息,解釋病毒的來(lái)源、傳播、變異演化等科學(xué)問(wèn)題,為后續(xù)流行病學(xué)調(diào)查指明方向,為相關(guān)病例的追蹤溯源提供重要依據(jù),目前對(duì)病毒溯源分型主要檢測(cè)手段就是高通量測(cè)序技術(shù)。高通量測(cè)序技術(shù)如何進(jìn)行病毒溯源?先對(duì)獲得的早期病例標(biāo)本開(kāi)展病毒全基因組高通量序列測(cè)定,通過(guò)與本地流行病毒及全球其他地區(qū)測(cè)定過(guò)序列的病毒比較,如果該病例傳染的病毒在基因組上和北美流行株更接近,比如在全長(zhǎng)接近3萬(wàn)個(gè)堿基的序列上,兩者只相差幾個(gè)堿基,相似度為99%以上,這就是為我們推斷該病例攜帶病毒為北美流行株提供依據(jù)。DNA病毒基因組測(cè)序:一種指定DNA病毒盡量完整的序列。浙江高通量測(cè)序突變分析方法

病毒全基因組測(cè)序注意事項(xiàng):病毒全基因組測(cè)序,測(cè)序覆蓋度,基因組被測(cè)序得到的堿基覆蓋的比例;測(cè)序覆蓋度是反映測(cè)序隨機(jī)性的指標(biāo)之一;測(cè)序序深度與覆蓋度之間的關(guān)系可以過(guò)Lander-WatermanModel(1988)來(lái)確定。當(dāng)深度達(dá)到5X時(shí),則可覆蓋基因組的約99.4%以上。通過(guò)生物信息手段,分析不同個(gè)體基因組間的結(jié)構(gòu)差異,同時(shí)完成SNP及基因組結(jié)構(gòu)注釋。DNA突變可誘發(fā)病癥。吸煙過(guò)程中所釋放的>60種致病化學(xué)物質(zhì)可與DNA結(jié)合并對(duì)DNA鏈上的鳥(niǎo)嘌呤和腺嘌呤進(jìn)行化學(xué)修飾從而產(chǎn)生大的加合物,該加合物改變了DNA雙螺旋的結(jié)構(gòu),如果不被核苷酸剪切修復(fù)或其他的途徑進(jìn)行糾正,那么DNA在復(fù)制時(shí)就會(huì)按照non-Watson-Crick方式進(jìn)行復(fù)制并阻止RNA聚合酶進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。江蘇深度測(cè)序進(jìn)化分析技術(shù)病毒基因組測(cè)序包括完成圖測(cè)序、掃描圖測(cè)序和重測(cè)序幾個(gè)層面。

第二代測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用:第二代測(cè)序技術(shù)(NGS)因其快速和靈敏的檢測(cè)特點(diǎn)已成為植物病毒學(xué)研究的強(qiáng)有力工具,這一技術(shù)具有非序列依賴性的優(yōu)勢(shì),能同時(shí)檢測(cè)植物樣品中可培養(yǎng)和不可培養(yǎng)的、含量高及含量低的所有的DNA病毒、RNA病毒以及類病毒,它的出現(xiàn)極大地變革和推進(jìn)了病毒的發(fā)現(xiàn)歷程,近期來(lái)自浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所等處的研究人員圍繞NGS及其在植物病毒發(fā)掘中的應(yīng)用研究和前景進(jìn)行概述和展望。對(duì)分離培養(yǎng)和臨床標(biāo)本的病毒核酸的測(cè)序?qū)嶒?yàn)及分析流程。基于無(wú)差別的樣本處理方式和獨(dú)特的生物信息學(xué)分析流程,除了對(duì)于被宿主核酸污染的病原微生物/病毒核酸樣本進(jìn)行全基因組和宏基因組測(cè)序之外,未知病原也在探普特有的流程下可以得以鑒別。

高通量基因組測(cè)序中,測(cè)序深度和覆蓋度指的是:測(cè)序深度是指測(cè)序得到的總堿基數(shù)與待測(cè)基因組大小的比值。假設(shè)一個(gè)基因大小為2M,測(cè)序深度為10X,那么獲得的總數(shù)據(jù)量為20M。覆蓋度是指測(cè)序獲得的序列占整個(gè)基因組的比例。由于基因組中的高GC、重復(fù)序列等復(fù)雜結(jié)構(gòu)的存在,測(cè)序終拼接組裝獲得的序列往往無(wú)法覆蓋有所的區(qū)域,這部分沒(méi)有獲得的區(qū)域就稱為。例如一個(gè)細(xì)菌基因組測(cè)序,覆蓋度是98%,那么還有2%的序列區(qū)域是沒(méi)有通過(guò)測(cè)序獲得的。病毒全基因組測(cè)序產(chǎn)品特點(diǎn):基于PCR技術(shù)和抗原抗體技術(shù)的售后驗(yàn)證平臺(tái)。

需要對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序的應(yīng)用場(chǎng)景:在探普生物長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)行過(guò)程中,我們接觸到的對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序項(xiàng)目有比較豐富的應(yīng)用場(chǎng)景。先,從事基因進(jìn)化/疫苗/藥品/抗體研制方向的研究的研究者一定會(huì)用到測(cè)序。這種場(chǎng)景一般是用密集的sanger測(cè)序監(jiān)測(cè)某幾個(gè)關(guān)鍵基因,搭載一定頻率的全基因組測(cè)序。這樣的組合省時(shí)省力省經(jīng)費(fèi),同時(shí)能達(dá)到研究目的。此外,有的單位需要對(duì)傳染病的病原進(jìn)行流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和研究,如疾控/疫控中心、醫(yī)院的傳染病科室以及一些高校和研究所的相應(yīng)課題組,可能需要對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序以后,結(jié)合其他上下游的研究數(shù)據(jù),達(dá)到研究或者監(jiān)測(cè)疫病的目的。高通量測(cè)序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測(cè)序和分析。DNA病毒全基因組測(cè)序分析診斷

病毒全基因組測(cè)序產(chǎn)品特點(diǎn):結(jié)果穩(wěn)定可靠。浙江高通量測(cè)序突變分析方法

DNA病毒基因組的測(cè)序:動(dòng)物、人、植物被特定病毒株侵染、分離到病毒株、連續(xù)傳代的病毒株往往都需要獲得盡量完整的基因組序列來(lái)指導(dǎo)下一步的研究,傳統(tǒng)的sanger測(cè)序需要了解序列、設(shè)計(jì)引物、做很多PCR,往往效率很低,而NGS作為一種無(wú)需特異性引物擴(kuò)增的測(cè)序方式,可以直接從DNA中獲得序列。DNA病毒基因組測(cè)序:如果,1,您的目的是:獲得一種指定DNA病毒盡量完整的序列;2,您可以提供該病毒的中英文名稱;3,您了解樣本中病毒的載量情況、培養(yǎng)狀況、ct值等任一信息。那么,探普為你準(zhǔn)備了完整的下單、樣本準(zhǔn)備方法,經(jīng)過(guò)探普的實(shí)驗(yàn)、測(cè)序、分析,你將獲得:1,1-5Gb測(cè)序數(shù)據(jù)量rawdata;2,一般可獲得95%以上的拼接序列,100kb以上大基因組病毒除外;其他特殊要求如:突變分析、進(jìn)化分析都可直接與技術(shù)支持聯(lián)系。浙江高通量測(cè)序突變分析方法

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